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抗幽门螺杆菌UreB重组全人源化单域抗体的基因工程表达及分子改造
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作者 王雪芳 赵阳 +3 位作者 刘竹青 郭乐 仲飞亮 罗学刚 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期666-672,共7页
为了构建针对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)脲酶的单域抗体的基因工程表达系统。首先利用Pymol、ITASSER和ClussPro2等AI辅助工具分析比较了不同抗体与Hp脲酶亚单位B(UreB)之间的分子间作用力,确定了VL全人源化单域抗体UreBAb作... 为了构建针对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)脲酶的单域抗体的基因工程表达系统。首先利用Pymol、ITASSER和ClussPro2等AI辅助工具分析比较了不同抗体与Hp脲酶亚单位B(UreB)之间的分子间作用力,确定了VL全人源化单域抗体UreBAb作为重点研究对象。根据大肠埃希菌密码子偏好性优化了UreBAb基因序列,并将其分别插入pET28a、pE-SUMO等表达载体,转化大肠埃希菌Rosetta(DE3)获得了重组表达菌株,通过IPTG诱导制备重组抗体蛋白,并利用提取的Hp脲酶作为抗原,分析验证了重组表达抗体的活性。SDS-PAGE检测结果显示UreBAb和SUMO-UreBAb均获得了正确的表达,纯化后的蛋白产率分别为0.34和0.41 mg/mL。单向免疫扩散实验结果证实这两种重组表达抗体均与Hp UreB抗原具有良好的亲和力,对脲酶的抑制率分别为51.27%和74.07%。进而,结合AlphaFold2、cluspro2、mCSM-AB、OSPREY和FoldX等人工智能工具,评估分析了影响抗原-抗体复合物稳定性的关键位点及其突变策略,随后进一步构建了9个UreBAb进化突变体表达菌株,活性分析结果显示,这些突变体与抗原的结合活性均得到了提高,其中以I107W突变体的活性提升最为显著,相较于野生型UreBAb,提高了24.95%。本研究为Hp全人源化单域抗体的开发奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 脲酶 全人源化单域抗体 基因工程 AI辅助分子改造
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甘麦大枣露酒制备工艺优化
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作者 胥强 王佳丽 +5 位作者 王雪芳 杨珍 李寒露 王怡宁 霍超 罗学刚 《中国酿造》 CAS 北大核心 2024年第5期150-155,共6页
为了迎合当前多样性的露酒市场,以甘草、红枣和小麦为原料制备甘麦大枣露酒,对露酒浸提工艺、配方以及澄清条件进行优化,并对产品进行感官评价和理化分析。结果表明,甘麦大枣露酒的最佳浸提工艺为乙醇体积分数60%、料液比24∶100(g∶mL... 为了迎合当前多样性的露酒市场,以甘草、红枣和小麦为原料制备甘麦大枣露酒,对露酒浸提工艺、配方以及澄清条件进行优化,并对产品进行感官评价和理化分析。结果表明,甘麦大枣露酒的最佳浸提工艺为乙醇体积分数60%、料液比24∶100(g∶mL)、超声提取时间60 min、超声提取温度80℃、超声提取功率225 W、浸泡时间2 h。在此条件下,总黄酮含量最高达到了0.39 mg/mL;最佳甘麦大枣露酒配方为每100 mL的甘麦大枣露酒含8 mL甘麦大枣浸提浓缩液、63 mL 60%vol白酒基酒、29 mL纯净水和2 g的白砂糖,之后以0.4 g/L的皂土进行澄清,所制得的甘麦大枣露酒酒体澄清透明,口味鲜明,口感醇厚。 展开更多
关键词 露酒 甘麦大枣汤 制备工艺 澄清
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虾酱中益生菌的筛选及虾肉蛋白发酵饮品的制备与优化 被引量:1
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作者 杨小涵 秦济昆 +2 位作者 操俊 李月婵 罗学刚 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期112-117,共6页
虾肉是营养均衡的高蛋白质食物来源之一,但其嘌呤含量较高,筛选1株嘌呤代谢强的益生菌制成发酵饮品,将减少高嘌呤带来的隐患,同时兼有虾肉的丰富营养及益生菌肠道微生态健康调节功效的优点。该文从虾酱中筛选获得了1株凝结芽孢杆菌,并... 虾肉是营养均衡的高蛋白质食物来源之一,但其嘌呤含量较高,筛选1株嘌呤代谢强的益生菌制成发酵饮品,将减少高嘌呤带来的隐患,同时兼有虾肉的丰富营养及益生菌肠道微生态健康调节功效的优点。该文从虾酱中筛选获得了1株凝结芽孢杆菌,并命名为Bacillus coagulans GH1-1(菌种保藏编号:CGMCC No.24236)。分析显示,该菌株具有较强的抗逆性及肠道存活能力,生长性能良好,培养16 h左右进入稳定期,且嘌呤代谢能力达86.75%。经单因素及正交试验,确定该菌株虾肉发酵饮品最优工艺为:粉碎、无水乙醇脱脂2次、木瓜蛋白酶酶解、活性炭脱腥脱臭后,与柠檬汁进行复配,以3%的接种量,在37℃发酵12 h,再加入1 g/L的甜菊糖苷进行调配,最终得到一款口味酸甜的虾蛋白发酵饮品。该饮品中蛋白质含量达到2.44 g/100 mL,DPPH清除率为80.03%,对黄嘌呤氧化酶的抑制率为66.67%,提示其具有较好的抗氧化及预防高尿酸血症的作用。该研究为虾肉深加工开发提供了一种新的选择,有利于促进虾产业的多元化创新发展。 展开更多
关键词 虾酱 虾肉蛋白 凝结芽孢杆菌 工艺优化
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丹凤牡丹花蕊固体饮料配方及喷雾干燥工艺研究 被引量:1
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作者 张欣欣 柳宇航 +4 位作者 宋雅停 陈梦豪 王元楷 薛依涵 罗磊 《农产品加工》 2020年第2期35-38,共4页
对丹凤牡丹花蕊固体饮料加工工艺进行研究,结果表明,最优配方为丹凤牡丹花蕊浓缩液用量20 m L,白砂糖添加量8%,柠檬酸添加量0.6%;最优喷雾干燥工艺为固形物含量30%,进风温度190℃,进样量35 m L/h,在此条件下所得固体饮料色泽淡黄、颗粒... 对丹凤牡丹花蕊固体饮料加工工艺进行研究,结果表明,最优配方为丹凤牡丹花蕊浓缩液用量20 m L,白砂糖添加量8%,柠檬酸添加量0.6%;最优喷雾干燥工艺为固形物含量30%,进风温度190℃,进样量35 m L/h,在此条件下所得固体饮料色泽淡黄、颗粒细腻,有花蕊清香。 展开更多
关键词 丹凤牡丹花蕊 固体饮料 配方 喷雾干燥
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