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马铃薯卷叶病毒RT-LAMP检测方法的建立 被引量：11
1
作者 高彦萍 吕和平 +3 位作者 张武 王国祥 吴雁斌 梁宏杰 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1943-1950,共8页
为建立一种快速准确检测马铃薯卷叶病毒(potato leafroll virus,PLRV)的方法,本研究以PLRV CP(coat protein,CP)基因ORF3保守序列为靶标,建立了PLRV反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测体系,并对建立的RT-LAMP检测体系的特异性、灵敏度... 为建立一种快速准确检测马铃薯卷叶病毒(potato leafroll virus,PLRV)的方法,本研究以PLRV CP(coat protein,CP)基因ORF3保守序列为靶标,建立了PLRV反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测体系,并对建立的RT-LAMP检测体系的特异性、灵敏度、实际应用效果进行评估。结果表明,建立的PLRV RT-LAMP检测方法,在62℃恒温下扩增50 min,扩增产物中加入双链嵌合荧光染色(SYBR GreenⅠ),阳性样品颜色变为绿色,阴性样品颜色仍为褐色,可直接目测判断待检测样品是否感染PLRV。该方法只特异性检测PLRV,不与马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯S病毒(PVS)、马铃薯A病毒(PVA)和马铃薯M病毒(PVM)等其他5种马铃薯主要病毒发生交叉反应。此外,建立的PLRV RT-LAMP检测方法的灵敏度较反转录PCR(RT-PCR)方法高100倍。田间样品检测验证,该方法与标准RT-PCR方法符合率达100%。本研究建立的以SYBR GreenΙ为颜色指示的PLRV可视化检测RT-LAMP方法,特异、灵敏、便捷,成本低,可满足科研、基层单位对该病毒快速诊断和检测的需要。 展开更多
关键词 马铃薯卷叶病毒 反转录环介导等温扩增 反转录聚合酶链式扩增 检测
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马铃薯卷叶病毒PLRV RT-LAMP检测方法优化 被引量：8
2
作者 高彦萍 张武 +4 位作者 王国祥 席春艳 吴雁斌 梁宏杰 吕和平 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期259-264,306,共7页
马铃薯卷叶病毒Potato leafroll virus(PLRV)是目前严重影响马铃薯产量与品质的主要病毒之一,给马铃薯产业造成巨大损失。本研究采用环介导等温核酸扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)技术建立PLRV的RT-LAMP检测方法... 马铃薯卷叶病毒Potato leafroll virus(PLRV)是目前严重影响马铃薯产量与品质的主要病毒之一,给马铃薯产业造成巨大损失。本研究采用环介导等温核酸扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)技术建立PLRV的RT-LAMP检测方法。采取单因素变化试验,对RT-LAMP反应体系中多个因素包括引物组合、温度条件及Mg2+、betaine、Bst 3.0 DNA聚合酶、dNTPs、UNG、SYBR GreenⅠ和引物组合的浓度进行一系列试验和优化。采用RT-PCR检测方法进行平行比对试验,对优化后的RT-LAMP反应体系进行了验证。结果表明,最佳引物组合为P3,最适反应温度62℃,25μL反应体系中,Mg2+、betaine、Bst 3.0 DNA聚合酶和UNG的最佳终浓度分别为4 mmol/L、0 mmol/L、0.64 U/μL和0.08 U/μL,dNTPs的最佳用量为1μL(dATP、dGTP、dCTP各0.4 mmol/L,dUTP 1.2 mmol/L),SYBR GreenⅠ(20×)的最佳用量1μL,primer mix的最佳用量2.5μL(PLRV-FIP/BIP、PLRV-F3/B3和PLRV-LF/LB的浓度分别为0.8、0.2μmol/L和0.6μmol/L),RNA模板1μL(2 ng/μL),加DEPC-H2O至25μL,反应时间50 min。优化后的RT-LAMP检测结果与RT-PCR一致,且可视化判读结果。因此,建立的PLRV RT-LAMP检测方法为进一步开发RT-LAMP检测试剂盒及其实际应用奠定了基础。 展开更多
关键词 马铃薯卷叶病毒(PLRV) 反转录环介导等温扩增(RT-LAMP) 检测方法
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甘肃省辣椒斑萎病毒的检测 被引量：3
3
作者 陈灵芝 王兰兰 +2 位作者 张茹 张玉鑫 高彦萍 《中国蔬菜》 北大核心 2023年第3期73-77,共5页
在甘肃省兰州、白银、庆阳采集发病症状表现为植株矮化、叶片黄化、生长点坏死的辣椒病样,采用RT-PCR法和简易试纸条进行病毒检测。结果表明:通过RT-PCR法共检测出了6种病毒:辣椒环斑病毒(ChiRSV)、辣椒轻斑驳病毒(PMMoV)、辣椒斑驳病毒... 在甘肃省兰州、白银、庆阳采集发病症状表现为植株矮化、叶片黄化、生长点坏死的辣椒病样,采用RT-PCR法和简易试纸条进行病毒检测。结果表明:通过RT-PCR法共检测出了6种病毒:辣椒环斑病毒(ChiRSV)、辣椒轻斑驳病毒(PMMoV)、辣椒斑驳病毒(PepMoV)、辣椒叶脉黄化病毒(PeVYV)、烟草轻绿花叶病毒(TMGMV)、番茄斑萎病毒(TSWV);且在同一个病样上,存在多种病毒复合侵染的状况。利用简易试纸条进行检测,只检测出了TSWV,但检出率较高。表明,甘肃地区辣椒生产上侵染的病毒种类多,TSWV的发生越来越普遍和严重。 展开更多
关键词 辣椒 番茄斑萎病毒 RT-PCR检测 简易试纸条检测
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马铃薯原原种椰糠基质繁育技术规程 被引量：3
4
作者 高彦萍 吕和平 +2 位作者 张武 梁宏杰 吴雁斌 《甘肃农业科技》 2021年第1期91-94,共4页
从范围、规范性引用文件、术语和定义、栽培设施、繁育技术、基质重复利用等方面规范了马铃薯原原种椰糠基质繁育技术。
关键词 马铃薯原原种 椰糠基质 繁育技术 规程
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马铃薯试管薯无土基质繁育原原种技术规程 被引量：1
5
作者 高彦萍 张武 +2 位作者 吕和平 吴雁斌 梁宏杰 《甘肃农业科技》 2021年第2期83-86,共4页
从范围、规范性引用文件、术语和定义、试管薯规格、繁育的种薯级别、基本要求、繁育原原种等方面制定了马铃薯试管薯无土基质繁育原原种技术规程。
关键词 马铃薯试管薯 无土基质 繁育 原原种
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辣椒抗烟草花叶病毒L^(3)基因的KASP标记转化及应用
6
作者 陈灵芝 王兰兰 +1 位作者 高彦萍 余海涛 《中国蔬菜》 北大核心 2025年第4期66-71,共6页
辣椒中存在抗烟草花叶病毒属的基因位点L,本研究将与抗烟草花叶病毒L^(3)基因紧密连锁的SCAR标记PMFR11转化为KASP标记LJK,利用BC_(1)P_(1)群体进行有效性验证,基因型和抗、感病表型之间的一致率为92.4%。对标记LJK和与抗烟草花叶病毒L^... 辣椒中存在抗烟草花叶病毒属的基因位点L,本研究将与抗烟草花叶病毒L^(3)基因紧密连锁的SCAR标记PMFR11转化为KASP标记LJK,利用BC_(1)P_(1)群体进行有效性验证,基因型和抗、感病表型之间的一致率为92.4%。对标记LJK和与抗烟草花叶病毒L^(3)基因紧密连锁的SCAR标记PMFR21检测结果进行比较,LJK与PMFR21 PCR分型结果完全一致。研究表明LJK可以快捷、高效应用于辣椒抗烟草花叶病毒L^(3)基因的分子标记辅助选择。实际育种过程中,在辣椒苗期利用LJK淘汰纯合感病基因型单株,保留杂合抗性基因型单株继续进行L^(3)基因的回交转育,创制出了含有纯合L^(3)基因的抗性种质。 展开更多
关键词 辣椒 抗烟草花叶病毒 L^(3)基因 KASP标记LJK
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高寒阴湿区不同覆膜马铃薯微型薯的土壤水热效应及产量表现 被引量：10
7
作者 高彦萍 胡新元 +3 位作者 李掌 吴雁斌 张武 齐恩芳 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期2426-2433,共8页
为探究适用于高寒阴湿区马铃薯微型薯原种繁育的地膜覆盖方式,本研究以小于2 g的微型薯为试验材料,通过设置垄作白膜覆盖(RSWPF)、垄作黑膜覆盖(RSBPF)和传统露地平播(CFS)3个处理,研究了不同处理的土壤温度和水分动态特征以及对马铃薯... 为探究适用于高寒阴湿区马铃薯微型薯原种繁育的地膜覆盖方式,本研究以小于2 g的微型薯为试验材料,通过设置垄作白膜覆盖(RSWPF)、垄作黑膜覆盖(RSBPF)和传统露地平播(CFS)3个处理,研究了不同处理的土壤温度和水分动态特征以及对马铃薯生长发育和产量的影响。结果表明,RSBPF种植方式可有效增加马铃薯生育前期耕层0~25 cm土壤的热量条件,在4月20日-8月3日(播种到末花期),RSBPF较CFS增加土壤温度2.33~4.64℃,增加土壤积温327.88℃;在日变化8:00、18:00低温时,RSBPF较RSWPF具有几乎同等的保温作用,在14:00高温时,RSBPF较RSWPF温度低1.26℃,增温、降温较平缓,稳温效应明显;在地温垂直变化中,RSBPF同样具有稳温效应。RSBPF较CFS,表现出旱季蓄水保墒和雨季防涝,能显著优化耕层土壤水分环境;提前出苗期至成熟期各生育时期10~15 d,促进生育前期营养生长效果明显。RSBPF较RSWPF和CFS,增加单株结薯重差异显著(P<0.05)。不同处理间产量差异显著(P<0.05),RSBPF产量最高,达到46 612.35 kg·hm^(-2),较CFS增产16.56%。因此,垄作黑膜覆盖(RSBPF)是该试验区域利用小于2g微型薯进行原种繁育的有效栽培措施。本研究为西北高寒阴湿区利用小于2 g的微型薯进行马铃薯原种高效栽培提供了理论依据。 展开更多
关键词 高寒阴湿区 马铃薯微型薯 垄作覆膜栽培 水热效应 产量
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与辣椒抗TMV L^(3)基因连锁的分子标记的筛选及种质资源抗TMV鉴定 被引量：2
8
作者 陈灵芝 张茹 +1 位作者 王兰兰 高彦萍 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期585-592,共8页
以含抗辣椒TMV的L^(3)基因的材料L15为基础,利用与L^(3)基因连锁的3个分子标记189D23MF、PMFR11和PMFR21对种质资源进行鉴定.对L15、3份感病材料H8/H9/H11×L15 F_(1)、46份辣椒种质资源进行室内人工TMV接种并对其进行表型抗性鉴定... 以含抗辣椒TMV的L^(3)基因的材料L15为基础,利用与L^(3)基因连锁的3个分子标记189D23MF、PMFR11和PMFR21对种质资源进行鉴定.对L15、3份感病材料H8/H9/H11×L15 F_(1)、46份辣椒种质资源进行室内人工TMV接种并对其进行表型抗性鉴定和RT-PCR检测.对筛选出的标记在F_(1)及BC_(1)P_(1)群体中进行验证.结果表明:分子标记189D23MF在L15和12份辣椒种质上均未扩增出条带;SCAR标记PMFR11在L15和46份辣椒种质上呈现共显性分离,SCAR标记PMFR21为显性标记.通过室内人工接种鉴定方式,2份材料L15、H11×L15表现为高抗.H9×L15表现为抗,H8×L15及5份材料A1、A35、A39、A55、L16表现为中抗,11份材料表现为感病,30份材料表现为高感.在F1及BC1P1群体中PCR扩增结果表明SCAR标记PMFR21可用于辣椒抗TMV分子标记辅助选择. 展开更多
关键词 辣椒 L^(3)基因 分子标记 种质资源 TMV
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辣椒ToMMV的分子鉴定 被引量：10
9
作者 陈灵芝 张茹 +3 位作者 魏兵强 王兰兰 高彦萍 张武 《中国蔬菜》 北大核心 2018年第6期39-43,共5页
采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)和RT-PCR法,对甘肃省农业科学院蔬菜研究所试验地的辣椒病毒病病原进行检测。结果表明:在72份病样中,烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的总检出率为66.7%,没有检出黄瓜花叶病毒(Cucumber... 采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)和RT-PCR法,对甘肃省农业科学院蔬菜研究所试验地的辣椒病毒病病原进行检测。结果表明:在72份病样中,烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的总检出率为66.7%,没有检出黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)。设计3对TMV引物对阳性样品进行扩增,其中引物TMV1扩增出相似片段目的条带,经BLASTN比对与番茄斑驳花叶病毒(Tomato mottle mosaic virus,To MMV)的序列一致性为97%。针对To MMV设计3对引物进行扩增,均扩增出单一且与预期大小相同的目标条带,经测序后与To MMV的序列一致性为98%以上,证明发生在甘肃省农业科学院蔬菜研究所试验地的辣椒病毒病病原为番茄斑驳花叶病毒。 展开更多
关键词 辣椒 病毒病 DAS-ELISA 番茄斑驳花叶病毒(ToMMV) RT-PCR
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