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魔芋花叶病毒衣壳蛋白的原核表达和多克隆抗体制备
被引量：
3
1
作者
唐国亮
张玉宝
+4 位作者
王若愚
王亚军
赵霞
苏学思
金卫杰
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2022年第11期2471-2481,共11页
采用小RNA测序技术对甘肃省榆中县疑似感染病毒病的当归[(Angelica sinensis(Oliv.)Diels]样品进行测序鉴定,发现样品中含有魔芋花叶病毒(Konjac mosaic virus,KoMV),通过反转录PCR(RT-PCR)扩增KoMV衣壳蛋白(capsid protein,CP)的cp基因...
采用小RNA测序技术对甘肃省榆中县疑似感染病毒病的当归[(Angelica sinensis(Oliv.)Diels]样品进行测序鉴定,发现样品中含有魔芋花叶病毒(Konjac mosaic virus,KoMV),通过反转录PCR(RT-PCR)扩增KoMV衣壳蛋白(capsid protein,CP)的cp基因,克隆的KoMV cp基因连接原核表达载体pET-28a(+),导入E.coli Rosetta ^(TM)(DE3)诱导表达蛋白,在Ni-NTA重力柱层析作用下纯化CP融合蛋白,并以此作为抗原免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体。序列分析表明:KoMV cp基因片段大小为840 bp,编码280个氨基酸的外壳蛋白;与GenBank已注册同源性较高的KoMV分离物相比,核苷酸序列相似性为85.58%~99.41%,氨基酸序列相似性为89.32%~99.29%;KoMV的病毒种群分布存在明显的区域性和寄主差异。SDS-PAGE显示,不同温度诱导下KoMV CP融合蛋白在E.coli Rosetta ^(TM)(DE3)中均以包涵体的形式大量表达,融合蛋白分子量为36 ku。间接ELISA和Western blot检测结果显示,制备的多克隆抗体效价达到32000,能够与感染KoMV的当归叶片和纯化蛋白特异性结合,具有良好的特异性。本研究成功制备了当归KoMV CP融合蛋白的多克隆抗体IgG,为开发KoMV的血清学检测技术及CP蛋白的功能研究奠定了基础。
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关键词
当归
魔芋花叶病毒
外壳蛋白
原核表达
多克隆抗体
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职称材料
题名
魔芋花叶病毒衣壳蛋白的原核表达和多克隆抗体制备
被引量：
3
1
作者
唐国亮
张玉宝
王若愚
王亚军
赵霞
苏学思
金卫杰
机构
中国
科学
院西北
生态
环境资源
研究
院皋兰
生态
与
农业
综合
试验
站
甘肃省生态农业综合试验野外科学观测研究站
中国
科学
院大学
出处
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2022年第11期2471-2481,共11页
基金
国家重点研发计划(2018YFE0127200)
甘肃省知识产权计划(20ZSCQ033)
+1 种基金
国防科工局核能开发项目(E19005040)
兰州市人才创新创业项目(2019-HLJC-9)。
文摘
采用小RNA测序技术对甘肃省榆中县疑似感染病毒病的当归[(Angelica sinensis(Oliv.)Diels]样品进行测序鉴定,发现样品中含有魔芋花叶病毒(Konjac mosaic virus,KoMV),通过反转录PCR(RT-PCR)扩增KoMV衣壳蛋白(capsid protein,CP)的cp基因,克隆的KoMV cp基因连接原核表达载体pET-28a(+),导入E.coli Rosetta ^(TM)(DE3)诱导表达蛋白,在Ni-NTA重力柱层析作用下纯化CP融合蛋白,并以此作为抗原免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体。序列分析表明:KoMV cp基因片段大小为840 bp,编码280个氨基酸的外壳蛋白;与GenBank已注册同源性较高的KoMV分离物相比,核苷酸序列相似性为85.58%~99.41%,氨基酸序列相似性为89.32%~99.29%;KoMV的病毒种群分布存在明显的区域性和寄主差异。SDS-PAGE显示,不同温度诱导下KoMV CP融合蛋白在E.coli Rosetta ^(TM)(DE3)中均以包涵体的形式大量表达,融合蛋白分子量为36 ku。间接ELISA和Western blot检测结果显示,制备的多克隆抗体效价达到32000,能够与感染KoMV的当归叶片和纯化蛋白特异性结合,具有良好的特异性。本研究成功制备了当归KoMV CP融合蛋白的多克隆抗体IgG,为开发KoMV的血清学检测技术及CP蛋白的功能研究奠定了基础。
关键词
当归
魔芋花叶病毒
外壳蛋白
原核表达
多克隆抗体
Keywords
Angelica sinensis
Konjac mosaic virus
capsid protein
prokaryotic expression
polyclonal antibody
分类号
S435.67 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
魔芋花叶病毒衣壳蛋白的原核表达和多克隆抗体制备
唐国亮
张玉宝
王若愚
王亚军
赵霞
苏学思
金卫杰
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2022
3
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