基于TMT技术的牦牛妊娠期血清蛋白质组学分析 被引量：2

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作者 姚颖 周应聪 +7 位作者 杜培岩 李一娟 钱文洁 李柳杨 余志鹏 崔燕 余四九 樊江峰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期192-206,共15页

为了探究妊娠期内牦牛血清的蛋白质组特征,筛选并分析差异表达蛋白质(DEPs)在牦牛妊娠维持中的作用。本研究选择9头4岁半至6岁龄健康状况良好且当年未产犊的自然发情母牦牛进行人工授精(AI)。在AI后第30、60及90天采集其血清样品,并对... 为了探究妊娠期内牦牛血清的蛋白质组特征,筛选并分析差异表达蛋白质(DEPs)在牦牛妊娠维持中的作用。本研究选择9头4岁半至6岁龄健康状况良好且当年未产犊的自然发情母牦牛进行人工授精(AI)。在AI后第30、60及90天采集其血清样品,并对授配母牦牛进行妊娠诊断。依据诊断结果将采集的样品进行回顾性分组,即妊娠第1、2、3月组及未妊娠组(未妊娠组样品来自AI后90天经妊娠诊断确诊为未孕的牦牛个体),每组样品3个生物学重复。利用串联质谱标签(TMT)技术对牦牛血清样品的蛋白表达情况进行定量分析,筛选差异表达蛋白,并对其进行GO功能富集和KEGG通路等生物信息学分析,进一步筛选与牦牛妊娠维持相关的潜在蛋白。结果显示,在4组牦牛血清蛋白样品中共获得497个蛋白,以差异倍数≥1.2或≤0.83,且P<0.05为条件筛选,共筛选到68个差异蛋白。GO功能富集和KEGG通路分析显示,这些DEPs在代谢、免疫系统、粘附、生物调节等生物学过程以及补体与凝血级联、金黄色葡萄球菌感染等与炎症和免疫途径相关的通路有明显富集。值得注意的是,妊娠期各组间差异蛋白富集通路中均包含有PI3K-Akt、Rap1、MAPK等与生殖相关的信号通路。DEPs中IGFBP2、FGG、B2M、PDIA4、AZGP1的表达具有随妊娠时间的延长而连续上调的趋势,且这些蛋白在妊娠第3月表达量显著高于未妊娠状态。研究结果表明,牦牛妊娠早期存在明显的血清蛋白组的变化。这些DEPs分别在促进细胞粘附与增殖、母胎血管生成、维持母体代谢与免疫平衡等过程中起到重要作用。尤其是IGFBP2、FGG、B2M、PDIA4、AZGP1可能通过参与调节胎盘生长发育、免疫应答和脂质代谢等过程,在牦牛妊娠维持中发挥着重要作用。研究结果为进一步探明牦牛维持妊娠过程的调控机制提供了基础资料。 展开更多

关键词 TMT 蛋白质组学 牦牛 血清 差异表达蛋白 妊娠维持

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连翘酯苷A通过HIF-1α调控牦牛卵丘细胞雌激素合成与分泌

2

作者 杨娟 潘阳阳 +7 位作者 王萌 杨晓晴 李天昊 马鑫 张小坤 常剑英 王立斌 樊江峰 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第9期4205-4215,共11页

【目的】以健康成年(5~8岁)雌牦牛卵丘细胞为研究对象,探究连翘酯苷A(forsythiaside A,FA)对卵丘细胞雌激素合成酶的影响及作用机制,为FA应用于牦牛繁殖管理提供科学依据。【方法】取对数生长期牦牛卵丘细胞,通过设置浓度梯度(0、5、10... 【目的】以健康成年(5~8岁)雌牦牛卵丘细胞为研究对象,探究连翘酯苷A(forsythiaside A,FA)对卵丘细胞雌激素合成酶的影响及作用机制,为FA应用于牦牛繁殖管理提供科学依据。【方法】取对数生长期牦牛卵丘细胞,通过设置浓度梯度(0、5、10、20、30和40μmol/L)和时间梯度(12、24、36和48 h)进行细胞毒性试验,筛选FA最佳作用条件。采用实时荧光定量PCR和Western blotting技术检测FA对卵丘细胞低氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)、雌激素合成酶(CYP11A1、CYP17A1和CYP19A1)基因及蛋白表达的影响。通过HIF-1α特异性抑制剂LW6干扰HIF-1α的合成,将卵母细胞分为对照组、FA组及FA+LW6组,体外培养12 h后检测卵丘细胞中HIF-1α、CYP11A1、CYP17A1和CYP19A1基因及蛋白的表达量,并检测细胞上清液中雌二醇浓度。【结果】细胞毒性试验结果显示,与0μmol/L FA处理组相比,5μmol/L FA孵育牦牛卵丘细胞12 h后细胞活性提升最为显著(P<0.05),且对HIF-1α、CYP11A1、CYP17A1和CYP19A1基因和蛋白表达量具有显著促进作用(P<0.05)。LW6抑制试验结果显示,与对照组相比,FA组牦牛卵丘细胞中HIF-1α、CYP11A1、CYP17A1和CYP19A1基因和蛋白(除CYP19A1外)相对表达量均显著升高(P<0.05),HIF-1α荧光强度明显增强,雌二醇浓度显著升高(P<0.05);FA+LW6组牦牛卵丘细胞中HIF-1α、CYP11A1、CYP17A1和CYP19A1基因和蛋白相对表达量均显著降低(P<0.05),雌二醇浓度显著降低(P<0.05)。【结论】FA可通过HIF-1α的表达来调控雌激素合成酶的合成,从而促进牦牛卵丘细胞雌激素分泌。本研究结果为FA作为天然生殖调控剂改善牦牛繁殖性能提供了试验依据。 展开更多

关键词 牦牛 卵丘细胞 连翘酯苷A(FA) 低氧诱导因子-1α(HIF-1α) 雌激素

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不同年龄牦牛肺脏中JAK2、STAT3、P-JAK2/STAT3及PCNA蛋白的表达分析

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作者 牛悦悦 崔燕 +6 位作者 余四九 何俊峰 杨珊珊 祁正满 豆婉婉 陈春燕 邓演江 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第6期2957-2967,共11页

本研究旨在探究JAK2/STAT3信号通路及其调节的细胞增殖关键蛋白PCNA在不同年龄牦牛肺脏中的表达分布及可能发挥的作用。本试验以初生、幼年、成年和老年健康牦牛肺脏为研究对象,利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR... 本研究旨在探究JAK2/STAT3信号通路及其调节的细胞增殖关键蛋白PCNA在不同年龄牦牛肺脏中的表达分布及可能发挥的作用。本试验以初生、幼年、成年和老年健康牦牛肺脏为研究对象,利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测JAK2、STAT3和PCNA mRNA在不同年龄牦牛肺脏中的表达情况,采用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)和免疫蛋白印迹(Western blot)方法检测JAK2、STAT3、P-JAK2/STAT3及PCNA蛋白在不同年龄牦牛肺脏中的表达分布情况。结果显示:JAK2、STAT3、P-JAK2/STAT3和PCNA的表达分布基本一致,主要分布在支气管上皮与血管内皮,支气管壁平滑肌层、血管平滑肌以及肺泡细胞等部位。JAK 2 mRNA的表达量在不同年龄牦牛肺脏中呈现先升高后降低趋势,成年组表达最高;STAT 3 mRNA在肺脏中的表达量随牦牛年龄的增加而增加,老年组表达最高;PCNA mRNA在成年组和老年组的表达量明显高于初生组及幼年组。此外,JAK2、STAT3、P-JAK2/STAT3及PCNA蛋白在不同年龄牦牛肺脏中表达不同,P-JAK2/STAT3与JAK2/STAT3趋势基本一致,JAK2、P-JAK2蛋白在幼年组表达量最高,STAT3、P-STAT3蛋白在初生组和成年组表达量显著高于幼年组及老年组,其中初生组高于成年组;PCNA蛋白在初生组表达量明显高于幼年、成年和老年三组。综上,JAK2/STAT3信号通路及其调节的PCNA在不同年龄牦牛肺脏中的表达分布存在差异,提示JAK2/STAT3信号通路参与了牦牛肺脏发育过程。研究结果为进一步明确JAK2/STAT3信号通路及其靶向调节的PCNA在牦牛肺脏对高原低氧适应过程中发挥的作用提供研究依据。 展开更多

关键词 牦牛 肺脏 JAK2/STAT3信号通路 低氧性肺动脉高压

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牦牛水通道蛋白11基因克隆分析及其在不同发育阶段睾丸中的表达

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作者 刘敏清 陈文东 +4 位作者 何玉鹏 苏满春 潘阳阳 崔燕 余四九 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第5期1-8,17,共9页

【目的】克隆牦牛(Bos grunniens)水通道蛋白11(Aquaporin-11,AQP11)的基因序列,研究AQP11在不同发育阶段牦牛睾丸组织中的表达水平。【方法】采集初生(出生3 d)、青年(1岁)、成年(4岁)和老年(8岁)牦牛睾丸样品,通过RT-PCR技术扩增得到A... 【目的】克隆牦牛(Bos grunniens)水通道蛋白11(Aquaporin-11,AQP11)的基因序列,研究AQP11在不同发育阶段牦牛睾丸组织中的表达水平。【方法】采集初生(出生3 d)、青年(1岁)、成年(4岁)和老年(8岁)牦牛睾丸样品,通过RT-PCR技术扩增得到AQP11基因的cDNA全长序列,对其进行生物信息学分析。采用qRT-PCR、Western blot方法对不同发育阶段牦牛睾丸中AQP11基因及蛋白的表达水平进行检测,采用免疫组织化学法对AQP11在不同发育阶段牦牛睾丸中的表达进行定位。【结果】成功克隆了牦牛AQP11基因cDNA全长序列,其长度为460 bp,共编码144个氨基酸。AQP11分子式:C_(710)H_(1135)N_(187)O_(191)S_(12),为稳定性蛋白,保守性较高。qRT-PCR结果显示,随着年龄的增长,AQP11基因在牦牛睾丸中的表达水平呈先上升后略下降并趋于平稳的趋势,在青年牦牛睾丸中的表达水平显著高于其他年龄组(P<0.05),其他年龄组间差异不显著(P>0.05)。Western blot结果显示,随着牦牛年龄的增长,AQP11蛋白表达水平也呈先上升后略下降并趋于平稳的趋势,在青年牦牛睾丸中的表达水平最高,在初生牦牛睾丸中的表达水平显著低于其他年龄组(P<0.05)。免疫组织化学试验结果显示,AQP11蛋白在睾丸中主要表达于精子、精子细胞、间质细胞、支持细胞和管周肌样细胞,各年龄段表达位置基本一致。【结论】克隆了牦牛AQP11基因cDNA全长序列,明确了其生物信息学特征。AQP11基因在青年牦牛睾丸中的表达水平显著高于其他年龄组(P<0.05),AQP11蛋白在青年牦牛中的表达水平显著高于初生牦牛(P<0.05)。推测AQP11在牦牛精子发育、成熟及膜的完整性方面发挥着重要作用。 展开更多

关键词 牦牛 睾丸 水通道蛋白11基因 繁殖能力 高寒牧区

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Oct 4在牦牛卵母细胞及早期胚胎发育过程中的表达 被引量：11

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作者 赵天 李谷月 +5 位作者 潘阳阳 李月琴 陈平 温泽星 崔燕 余四九 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期577-584,共8页

旨在通过检测转录因子Oct 4(Octamer-binding transcription factor 4)在牦牛(Bos grunneins)卵母细胞成熟及早期胚胎发育过程中的表达,分析Oct 4在卵母细胞与体外受精胚胎发育过程中的作用。本研究收集牦牛卵丘-卵母细胞复合体(Cumulus... 旨在通过检测转录因子Oct 4(Octamer-binding transcription factor 4)在牦牛(Bos grunneins)卵母细胞成熟及早期胚胎发育过程中的表达,分析Oct 4在卵母细胞与体外受精胚胎发育过程中的作用。本研究收集牦牛卵丘-卵母细胞复合体(Cumulus-oocyte complexes,COCs)对其进行体外成熟培养,生产体外受精(In vitro fertilization,IVF)胚胎,评估各时期胚胎发育能力。采用实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和间接免疫荧光染色方法从基因和蛋白水平检测COCs和胚胎各时期Oct 4的表达与分布。结果表明,1)2~4-细胞胚胎、5~8-细胞胚胎、9~16-细胞胚胎和囊胚的发育率分别为(64.66±1.76)%、(43.33±1.76)%、(24.66±2.40)%和(9.33±0.67)%。2)COCs和胚胎各发育时期均可检测到Oct 4基因,其中9~16-细胞胚胎表达最高,依次为囊胚、2~4-细胞胚胎和5~8-细胞胚胎,未成熟COCs和成熟COCs中表达最低。3)免疫荧光染色结果显示,OCT 4蛋白主要分布在COCs和体外受精胚胎的细胞质中,在细胞核中表达较弱。免疫荧光IOD值分析可得,9~16-细胞胚胎IOD值最高,依次为囊胚、2~4-细胞胚胎,5~8-细胞胚胎最低。综上表明,Oct 4在牦牛卵母细胞和早期胚胎发育过程中的各个时期均有表达,且不同时期该基因的表达量存在差异。由此说明Oct 4在9~16-细胞胚胎时期可能参与胚胎合子型基因转录激活的调控过程,在囊胚时期可能参与维持内细胞团全能性的过程。 展开更多

关键词 OCT 4 牦牛 体外受精 胚胎发育

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EGF对牦牛冻精运动性能、细胞凋亡和IVF胚胎发育潜力的影响 被引量：7

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作者 潘阳阳 王萌 +2 位作者 余四九 崔燕 何俊峰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期854-862,共9页

本研究旨在探明牦牛冻精体外获能过程中,EGF是否调控精子的细胞凋亡、运动性能及其对后续胚胎发育的影响。在牦牛冻精体外获能过程中,加入不同浓度EGF(0、50、75、100、150和200ng·mL-1),应用精子分析仪分析不同处理组精子活性;运... 本研究旨在探明牦牛冻精体外获能过程中,EGF是否调控精子的细胞凋亡、运动性能及其对后续胚胎发育的影响。在牦牛冻精体外获能过程中,加入不同浓度EGF(0、50、75、100、150和200ng·mL-1),应用精子分析仪分析不同处理组精子活性;运用qRT-RCR、Western blot检测Bax和Bcl-2的表达;评估IVF后受精胚的发育能力。结果表明:1)EGF可显著提高牦牛冻精运动性能、胚胎卵裂率(P<0.05),且这种调控具有一定的浓度依赖性。2)75~150ng·mL^(-1) EGF可以显著提高获能冻精Bcl-2基因和蛋白表达,降低Bax表达(P<0.05)。综上表明,牦牛冻精体外获能过程中,EGF不仅降低牦牛冷冻精子的细胞凋亡和提高牦牛精子运动性能,而且能够提高IVF后胚胎发育潜力,且其最佳作用浓度为75~150ng·mL^(-1)。本研究为通过生长因子作用提高牦牛体外胚胎生产提供重要参考信息。 展开更多

关键词 EGF 牦牛 精子 胚胎 细胞凋亡

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Caspase-9在肉用绵羊主要生殖器官中的分布研究

7

作者 张涛杰 崔燕 +3 位作者 余四九 樊江峰 刘犇 郑凯 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1526-1531,共6页

通过试验研究凋亡因子Caspase-9在肉用绵羊主要生殖器官中的表达,并探讨其生理意义。利用免疫组织化学的方法对Caspase-9在肉用绵羊主要生殖器官中的表达进行研究。研究结果显示,Caspase-9只在细胞质中表达,其在卵巢中主要分布于原始卵... 通过试验研究凋亡因子Caspase-9在肉用绵羊主要生殖器官中的表达,并探讨其生理意义。利用免疫组织化学的方法对Caspase-9在肉用绵羊主要生殖器官中的表达进行研究。研究结果显示,Caspase-9只在细胞质中表达,其在卵巢中主要分布于原始卵泡、初级卵泡及颗粒性黄体细胞,而卵泡膜性黄体细胞中未见表达;黄体期,主要表达于子宫的浅层腺体腺上皮细胞、子宫内膜上皮细胞、子宫颈黏膜固有层的淋巴小结、输卵管黏膜上皮分泌细胞和纤毛细胞、峡部的浆液性腺的腺上皮细胞;卵泡期,子宫和输卵管各个部位阳性反应不明显。在正常生理情况下,Caspase-9参与了肉用绵羊主要生殖器官周期性变化的调控和子宫黏膜免疫,对生殖器官功能的稳定发挥起着重要作用。 展开更多

关键词 细胞凋亡 CASPASE-9 免疫组织化学 生殖器官 肉用绵羊

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奶牛乳源外泌体提取方法的优化及效果评价 被引量：4

8

作者 赵莹 王靖雷 +6 位作者 王萌 王立斌 张倩 李志杰 马鑫 余四九 潘阳阳 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期1265-1276,共12页

乳源外泌体在疾病治疗及载体效应等领域应用颇为广泛,但目前乳源外泌体的提取方法仍步骤繁琐,耗时长,难以推广应用。为建立省时、高效和稳定的乳源外泌体提取方法,本试验在前期已建立的差速超速离心法、凝乳酶法、乙酸法及蔗糖密度梯度... 乳源外泌体在疾病治疗及载体效应等领域应用颇为广泛,但目前乳源外泌体的提取方法仍步骤繁琐,耗时长,难以推广应用。为建立省时、高效和稳定的乳源外泌体提取方法,本试验在前期已建立的差速超速离心法、凝乳酶法、乙酸法及蔗糖密度梯度离心法的基础上,通过增加离心速度、改变乙酸或凝乳酶用量、调整蔗糖密度梯度、减少离心步骤进行逐一优化。通过透射电子显微镜、纳米粒子跟踪分析、蛋白浓度检测、免疫印迹鉴定比较乳源外泌体形态结构、粒径大小、蛋白浓度、粒子浓度、特异性标记蛋白的差异,筛选出最优提取方法。结果显示:4种优化后提取方法均可分离获得具有典型“茶托”形状,介于30~200 nm的细胞外囊泡,但优化后的乙酸法提取乳源外泌体最多,视野密度高达80%以上,粒径大小为(151.0±47.2)nm,粒子浓度为6.2×10^(12)个/mL,均高于其他优化方法;优化后的乙酸法提取乳源外泌体的特异性标记蛋白[肿瘤易感基因101(TSG101)、热休克蛋白70(HSP70)、CD81和CD9]均表达量较高,其他3种优化方法提取到的乳源外泌体特异性标记蛋白发生不同程度降解,且提取乳源外泌体所得样品蛋白浓度均显著高于优化的乙酸法(P<0.05)。结果表明,优化后奶牛乳源外泌体乙酸提取法具有方法简单、耗时短、纯度高、特异性标记蛋白稳定等优点,该方法为外泌体需求量大的试验、医疗、工业生产等奠定一定基础。 展开更多

关键词 乳源外泌体 差速超速离心法 乙酸 凝乳酶 提取鉴定

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HSP27基因在牦牛卵母细胞和体外早期胚胎中的表达 被引量：3

9

作者 刘敏清 何翃闳 +5 位作者 潘阳阳 张慧珠 王亚营 杨珊珊 崔燕 余四九 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期2716-2723,共8页

为了探讨牦牛HSP27(heat shock proteins27,HSP27)基因在牦牛卵母细胞和早期孤雌激活胚胎中的表达情况及定位,本试验通过实时荧光定量PCR检测牦牛HSP27基因在未成熟卵母细胞和成熟卵母细胞以及孤雌激活不同时期胚胎中的相对表达量,用免... 为了探讨牦牛HSP27(heat shock proteins27,HSP27)基因在牦牛卵母细胞和早期孤雌激活胚胎中的表达情况及定位,本试验通过实时荧光定量PCR检测牦牛HSP27基因在未成熟卵母细胞和成熟卵母细胞以及孤雌激活不同时期胚胎中的相对表达量,用免疫荧光染色法检测HSP27蛋白在未成熟卵母细胞和成熟卵母细胞以及孤雌激活不同时期胚胎中的表达与定位情况。结果显示,HSP27基因在牦牛未成熟卵母细胞和成熟卵母细胞以及体外培养孤雌激活不同时期胚胎中均可表达,其中在未成熟卵母细胞中的表达量显著高于成熟卵母细胞;在孤雌激活胚胎中,2~4细胞期表达量最高,囊胚期胚胎表达量最低,随着胚胎的发育,HSP27的表达量呈现逐渐降低的趋势;在2~4细胞期和囊胚期胚胎中的表达与其他组表达存在显著差异性,在5~8细胞期和桑椹胚中的表达无显著差异。免疫荧光染色结果表明,HSP27蛋白在牦牛卵丘细胞和卵母细胞中均有表达,在牦牛孤雌激活2~4细胞期、5~8细胞期和桑椹期胚胎中主要表达于细胞核内和细胞质中,在囊胚期主要表达于细胞核中;而HSP27蛋白的表达水平与基因表达水平基本一致。本研究为后续研究HSP27基因在牦牛生殖生理过程中的作用机制提供了参考。 展开更多

关键词 HSP27 牦牛 卵母细胞 孤雌激活 胚胎

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TNF-α对牦牛卵母细胞HIF-1α和HSP70的表达及后续胚胎发育能力的影响 被引量：2

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作者 许涛 潘阳阳 +5 位作者 何翃闳 李谷月 张慧珠 赵凌 崔燕 余四九 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1198-1207,共10页

旨在研究肿瘤坏死因子(TNF-α)对牦牛卵母细胞体外成熟和对低氧诱导因子1α(HIF-1α)、热休克蛋白70(HSP70)的表达以及后续胚胎发育能力的影响。在牦牛卵母细胞体外成熟培养液中添加不同浓度的TNF-α(最终浓度分别为0、10、25、50 ng
... 旨在研究肿瘤坏死因子(TNF-α)对牦牛卵母细胞体外成熟和对低氧诱导因子1α(HIF-1α)、热休克蛋白70(HSP70)的表达以及后续胚胎发育能力的影响。在牦牛卵母细胞体外成熟培养液中添加不同浓度的TNF-α(最终浓度分别为0、10、25、50 ng·mL^-1),牦牛卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes,COCs)培养成熟后,统计其卵母细胞成熟率及体外受精后早期胚胎的发育率,采用RT-PCR扩增牦牛 HIF-1α、 HSP 70基因,采用实时荧光定量PCR(qRT-RCR)、蛋白免疫印迹法(Western blotting)和免疫荧光染色技术检测HIF-1α、HSP70在基因和蛋白水平的表达情况。结果发现:1)成熟液中加入TNF-α,卵母细胞的成熟率提高,且随着TNF-α浓度的升高,卵母细胞的成熟率、卵裂率和囊胚率逐渐升高,当TNF-α浓度为 25 ng·mL^-1 时,卵母细胞的成熟率和卵裂率达到最高,分别为84.98%和66.85%,而囊胚率也达到了21.48%,均显著高于对照组( P <0.05);2)随着TNF-α浓度的升高, HIF-1α的表达量逐渐降低,对照组 HIF-1α的表达量极显著高于其他组(P <0.01),50 ng·mL^-1 TNF-α组 HIF-1α的表达量极显著低于其他组(P <0.01),HIF-1α在卵丘细胞和卵母细胞上均有表达;3)25 ng·mL^-1 TNF-α组的HSP 70表达量最高,极显著高于其他组(P <0.01),而当TNF-α达到50 ng·mL^-1 时,HSP 70的表达量最低。综上表明,在牦牛卵母细胞体外成熟过程中,TNF-α明显提高了卵母细胞的发育能力,同时还诱导了HSP 70的表达,抑制了HIF-1α的表达,为今后探讨TNF-α、 HIF-1α和HSP70在牦牛生殖过程中发挥的作用以及对胚胎发育的影响提供理论依据。 展开更多

关键词 牦牛 卵母细胞 肿瘤坏死因子(TNF-α) 低氧诱导因子1α(HIF-1α) 热休克蛋白70(HSP70) 表达

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IL-1β及其受体在雌牦牛主要生殖器官和孤雌激活胚胎中的表达定位 被引量：3

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作者 王靖雷 王萌 +7 位作者 潘阳阳 李秦 何翃闳 黄玉风 赵凌 樊江峰 崔燕 余四九 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1395-1404,共10页

为探索正常生理条件下IL-1β和IL1R1参与雌性牦牛生殖调控及早期胚胎发育的生物学作用,试验采集雌性牦牛主要生殖器官(卵泡期:输卵管、卵巢、子宫;黄体期:输卵管、卵巢、子宫;妊娠期:输卵管、卵巢、子宫),并生产孤雌激活胚胎。实时荧光... 为探索正常生理条件下IL-1β和IL1R1参与雌性牦牛生殖调控及早期胚胎发育的生物学作用,试验采集雌性牦牛主要生殖器官(卵泡期:输卵管、卵巢、子宫;黄体期:输卵管、卵巢、子宫;妊娠期:输卵管、卵巢、子宫),并生产孤雌激活胚胎。实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测IL-1β和IL1R1 mRNA在组织和胚胎发育过程中的表达;并采用蛋白质免疫印迹(Western-blot,WB)和免疫组织化学方法从蛋白水平分析IL-1β和IL1R1在各生殖器官的表达水平与定位。结果显示IL-1β和IL1R1在牦牛主要生殖器官和孤雌激活胚胎中均有表达。其中卵泡期输卵管中IL-1β和IL1R1表达均高于黄体期和妊娠期,卵泡期卵巢和妊娠期卵巢中IL-1β和IL1R1的表达高于黄体期,妊娠期子宫中IL-1β和IL1R1的表达高于卵泡期和黄体期,孤雌激活胚胎中IL-1β和IL1R1的表达桑椹胚最高,8细胞次之,2细胞和囊胚期最低。免疫组织化学结果显示IL-1β和IL1R1在输卵管黏膜上皮、卵泡颗粒层、黄体细胞、子宫上皮和子宫腺体均有表达。研究结果表明IL-1β和IL1R1参与牦牛生殖周期和胚胎发育的调控作用,为进一步探究IL-1β和IL1R1的作用机制提供了理论基础,有助于牦牛胚胎体外培养技术的改进。 展开更多

关键词 牦牛 IL-1Β IL1R1 孤雌胚胎

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整合素β3在牦牛繁殖周期各阶段输卵管不同部位中的表达研究 被引量：2

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作者 钟董兰 何翃闳 +5 位作者 潘阳阳 杨珊珊 王军乾 杨贻 余四九 徐庚全 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期2535-2541,共7页

整合素β3作为整合素超家族的一员,在早期胚胎发育和胚胎附植中发挥着重要作用。为探究牦牛繁殖周期各阶段输卵管不同部位中整合素β3的表达情况,本研究采集繁殖周期不同阶段(卵泡期、黄体期和妊娠期)雌性牦牛的输卵管组织,按照输卵管... 整合素β3作为整合素超家族的一员,在早期胚胎发育和胚胎附植中发挥着重要作用。为探究牦牛繁殖周期各阶段输卵管不同部位中整合素β3的表达情况,本研究采集繁殖周期不同阶段(卵泡期、黄体期和妊娠期)雌性牦牛的输卵管组织,按照输卵管不同部位(峡部、壶腹部和漏斗部)将试验材料分为九组,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(WB)检测整合素β3基因和蛋白在繁殖周期各阶段输卵管不同部位中的表达水平,运用免疫组织化学法对整合素β3进行定位。结果显示,在繁殖周期各阶段中,输卵管峡部的整合素β3表达量均显著高于壶腹部和漏斗部。在峡部中,整合素β3的表达量在妊娠期最高,黄体期最低;而在壶腹部和漏斗部中,整合素β3的表达量在卵泡期最高。免疫组织化学结果显示,整合素β3主要分布于牦牛输卵管的肌层、浆液腺、基细胞、黏膜上皮的分泌细胞、纤毛细胞中。综上所述,整合素β3在牦牛繁殖周期各阶段输卵管的不同部位均有表达,且存在表达差异,由此推测整合素β3对牦牛受精以及早期胚胎的发育发挥着重要作用。本研究结果为进一步探索整合素β3对牦牛生殖繁育的作用提供了理论依据。 展开更多

关键词 整合素Β3 输卵管 繁殖周期 表达

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牦牛HMGN1多克隆抗体制备及应用

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作者 李玉平 王立斌 +5 位作者 潘阳阳 王萌 张晖 张瑞 贾利毅 余四九 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期2106-2115,共10页

为了克隆牦牛高迁移率族核小体结合蛋白1(HMGN1)基因并制备牦牛HMGN1多克隆抗体,探究HMGN1在牦牛生殖生理研究过程中的作用,本研究通过基因克隆获得牦牛HMGN1基因序列并对其进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测HMGN1... 为了克隆牦牛高迁移率族核小体结合蛋白1(HMGN1)基因并制备牦牛HMGN1多克隆抗体,探究HMGN1在牦牛生殖生理研究过程中的作用,本研究通过基因克隆获得牦牛HMGN1基因序列并对其进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测HMGN1在牦牛子宫、卵巢、输卵管中的相对表达量。利用原核表达、亲和层析法纯化牦牛HMGN1重组蛋白,免疫10月龄新西兰大白兔,亲和层析法纯化所制备的牦牛HMGN1多克隆抗体;分别利用蛋白免疫印迹(WB)、免疫组织化学技术(IHC)检测HMGN1在牦牛生殖器官中的表达和定位;利用免疫荧光技术(IF)检测HMGN1蛋白在颗粒细胞中的表达。本试验成功克隆了牦牛HMGN1基因并制备了牦牛HMGN1多克隆抗体。WB结果显示,HMGN1蛋白在黄体期和卵泡期牦牛子宫的表达量高,妊娠期的表达量最低(P<0.05);卵巢组织中,妊娠期的表达量最高,卵泡期的表达量最低(P<0.05);输卵管中妊娠期的表达量最高,黄体期和卵泡期的表达量较低(P<0.05)。IHC结果显示,HMGN1主要分布在子宫内膜和子宫腺、卵泡膜和卵泡颗粒层、输卵管黏膜上皮等部位。IF结果显示,HMGN1主要表达在卵巢颗粒细胞的细胞质中。综上,HMGN1在牦牛发情周期和妊娠过程中均参与调节。本研究结果为进一步研究HMGN1蛋白在调节牦牛生殖生理机制提供了基础资料。 展开更多

关键词 牦牛 HMGN1 原核表达 多克隆抗体

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促红细胞生成素对牦牛肾间质成纤维细胞凋亡因子表达的影响

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作者 卢增华 崔燕 +6 位作者 余四九 白雪峰 卢鸿琴 何俊峰 卢凯 翟国亮 祁正满 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期3460-3471,共12页

旨在探讨促红细胞生成素(EPO)对牦牛肾间质成纤维细胞(RIFs)中凋亡因子的影响。本研究首先分别采集3头4岁龄的健康牦牛和黄牛的肾脏组织,采用免疫组织化学方法和Western blot检测牦牛和黄牛肾脏中EPO的准确分布及其表达量。同时对牦牛R... 旨在探讨促红细胞生成素(EPO)对牦牛肾间质成纤维细胞(RIFs)中凋亡因子的影响。本研究首先分别采集3头4岁龄的健康牦牛和黄牛的肾脏组织,采用免疫组织化学方法和Western blot检测牦牛和黄牛肾脏中EPO的准确分布及其表达量。同时对牦牛RIFs进行原代培养鉴定,并对其进行不同药物处理来调控RIFs中EPO表达水平,检测EPO对凋亡相关基因Bax,Bcl-2,PCNA在mRNA和蛋白表达水平的影响。免疫组化学检测结果显示,EPO在牦牛和黄牛肾脏中集合管上皮细胞、肾小管上皮细胞和小管周间质成纤维样细胞中均呈阳性表达。qRT-PCR和Western blot结果显示,EPO在牦牛肾脏中的表达量显著高于黄牛(P<0.001)。随后对生成EPO的RIFs进行原代培养并调控EPO的表达,结果表明:激活组显著升高RIFs中Bcl-2和PCNA的表达,降低Bax的表达(P<0.001)。EPO抑制组显著降低RIFs中Bcl-2、PCNA的表达,上调Bax的表达(P<0.001)。综上表明,EPO在牦牛和黄牛肾脏中集合管上皮细胞、肾小管上皮细胞和小管周间质成纤维样细胞中均呈阳性表达,牦牛肾脏中的EPO高表达能够促进RIFs中Bcl-2和PCNA的表达,并降低Bax的表达,说明EPO可以在牦牛肾脏中起到抗凋亡的作用。 展开更多

关键词 牦牛 促红细胞生成素(EPO) 肾间质成纤维细胞(RIFs) 凋亡

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FSH、LH对体外培养的牦牛卵泡颗粒细胞凋亡及E_2、P分泌功能的影响 被引量：14

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作者 徐庚全 樊江峰 +3 位作者 杨世华 李谷月 赵华山 余四九 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期932-939,共8页

为了探明促卵泡素(Follicle stimulating hormone,FSH)和促黄体素(Luteinizing hormone,LH)对体外培养的牦牛卵泡颗粒细胞凋亡及甾体激素分泌的影响,揭示促性腺激素调控卵泡发育的机理,采用细胞培养和显微观察技术,建立了牦牛卵泡颗粒... 为了探明促卵泡素(Follicle stimulating hormone,FSH)和促黄体素(Luteinizing hormone,LH)对体外培养的牦牛卵泡颗粒细胞凋亡及甾体激素分泌的影响,揭示促性腺激素调控卵泡发育的机理,采用细胞培养和显微观察技术,建立了牦牛卵泡颗粒细胞体外培养体系,观察分析牦牛卵泡颗粒细胞体外培养的生长特征和凋亡的形态特征;采用流式细胞技术(Flow cytometry,FCM)和放射免疫测定技术(Radioimmunoassay,RIA),分析了添加不同浓度的FSH和LH对牦牛卵泡颗粒细胞凋亡和雌二醇(Estradiol,E2)、孕酮(Progesterone,P)分泌的影响。结果显示,体外培养的牦牛卵泡颗粒细胞呈现出典型的上皮样细胞生长特性,具有典型的'S'形生长曲线,体外培养的牦牛颗粒细胞偶尔可见细胞核浓缩、边集化、染色质固缩、内质网疏松等凋亡的形态特征。在添加0.050~5.000IU·mL-1FSH,随着浓度的增加,凋亡细胞比例逐渐降低,E2和P水平呈上升趋势;在添加浓度达到5.000IU·mL-1时,凋亡细胞比例最低降到7.3%,与对照组差异极显著(P<0.01)。低浓度的LH(0.050~0.500IU·mL-1),可以抑制颗粒细胞凋亡,促使E2和P分泌增加;高浓度的LH(5.000IU·mL-1)则促使颗粒细胞凋亡,对颗粒细胞分泌E2和P的影响不明显。这一结果表明,FSH和LH可通过调节牦牛颗粒细胞的凋亡及分泌功能,在调控卵泡发育及排卵的过程中发挥重要作用。 展开更多

关键词 牦牛 促性腺激素 颗粒细胞 细胞凋亡 激素分泌

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乳源外泌体包载连翘酯苷A和山奈酚的制备、表征及体外抗炎效果评价

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作者 赵莹 王靖雷 +6 位作者 王萌 王立斌 张倩 李志杰 马鑫 余四九 潘阳阳 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第5期2481-2495,共15页

本试验旨在制备负载连翘酯苷A(forsythoside A,FTA)和山奈酚(kaempferol,KPF)的乳源外泌体(milk-derived EVs,miEVs)递药系统,并体外评价其对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导牛乳腺上皮细胞(mammary alveolar cells-large T,MAC-T... 本试验旨在制备负载连翘酯苷A(forsythoside A,FTA)和山奈酚(kaempferol,KPF)的乳源外泌体(milk-derived EVs,miEVs)递药系统,并体外评价其对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导牛乳腺上皮细胞(mammary alveolar cells-large T,MAC-T)炎症模型的细胞迁移效果及相关炎性因子的影响。利用前期已建立并优化的乙酸法提取乳源外泌体,低温超声共孵育的方法制备负载FTA乳源外泌体(FTA-miEVs)和负载KPF乳源外泌体(KPF-miEVs),以及建立炎症模型,并通过透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)和免疫印迹(Western blot)方法评估制备效果,液质联用方法进行载药量测定,免疫荧光和划痕试验观察炎症模型对负载抗炎药物的乳源外泌体摄取,及炎症模型的细胞迁移效果的影响,酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)方法验证负载抗炎药物的乳源外泌体对炎症模型中相关炎性因子分泌及基因表达水平的影响。结果表明:FTA-miEVs和KPF-miEVs均具有外泌体典型结构,外形呈圆形,有部分凹陷,似“茶托”形结构;均可表达表面及内部特异性标记蛋白白细胞分化抗原81(cluster of differentiation 81,CD-81)和热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70);载药量分别为0.78%和9.79%;在8 h内,LPS诱导的MAC-T炎症模型对其摄取效果良好;且在24 h时,FTA-miEVs和KPF-miEVs对炎症模型细胞迁移的抑制率分别为608.48%和522.88%,显著高于单独使用miEVs、FTA和KPF的效果;其对炎症模型中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)的分泌及基因表达水平均优于单独使用miEVs、FTA和KPF。综上所述,本试验成功制备FTA-miEVs和KPF-miEVs递药系统,综合结果发现在同等药量下可提高FTA和KPF的抗炎效果,为外泌体在药物递送系统的制备及临床应用提供新的思路。 展开更多

关键词 乳源外泌体 连翘酯苷A 山奈酚 牛乳腺上皮细胞 炎性因子

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表皮生长因子对牦牛卵丘细胞低氧诱导因子-1α表达的影响及与凋亡的关联性分析 被引量：5

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作者 张译夫 潘阳阳 +1 位作者 温泽星 余四九 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1154-1161,共8页

旨在研究EGF是否通过调控HIF-1α抑制牦牛卵丘细胞凋亡。本研究在牦牛卵丘细胞体外培养时加入不同浓度的EGF,运用qRT-PCR和免疫荧光技术检测HIF-1α、Bcl-2和Bax的表达,用一步法TUNEL检测不同处理组卵丘细胞的凋亡情况。结果表明:(1)牦... 旨在研究EGF是否通过调控HIF-1α抑制牦牛卵丘细胞凋亡。本研究在牦牛卵丘细胞体外培养时加入不同浓度的EGF,运用qRT-PCR和免疫荧光技术检测HIF-1α、Bcl-2和Bax的表达,用一步法TUNEL检测不同处理组卵丘细胞的凋亡情况。结果表明:(1)牦牛卵丘细胞体外培养液中添加不同浓度的EGF后,卵丘细胞HIF-1α和Bax mRNA的相对表达量降低,Bcl-2 mRNA的相对表达量增加,且具有浓度依赖性;当EGF浓度为50ng·mL^(-1)时,HIF-1α和Bax mRNA的相对表达量最低,Bcl-2mRNA的相对表达量最高。(2)向其体外培养液中添加不同浓度的EGF后,卵丘细胞HIF-1α和Bax蛋白的相对表达量降低,Bcl-2蛋白的相对表达量增加,且具有浓度依赖性;当EGF浓度为50ng·mL^(-1)时,HIF-1α和Bax蛋白的相对表达量最低,Bcl-2蛋白的相对表达量最高。(3)TUNEL凋亡检测表明,对照组中卵丘细胞凋亡率最高,当EGF浓度为25ng·mL^(-1)时,细胞凋亡率显著降低(P<0.05);当EGF浓度为50ng·mL^(-1)时,细胞凋亡率最低(P<0.05),但随着EGF浓度的增加,卵丘细胞的凋亡率又升高。本研究结果表明,EGF可通过调控HIF-1α抑制卵丘细胞凋亡,其作用可能与线粒体介导的Bax和Bcl-2凋亡途径相关。 展开更多

关键词 表皮生长因子(EGF) 低氧诱导因子-1α(HIF-1α) 凋亡 卵丘细胞 牦牛

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CYP19A1调控内源性雌激素合成促进牦牛COCs细胞自噬和早期发育能力 被引量：5

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作者 王立斌 王萌 +6 位作者 孙莹 陈睿 张甜甜 黄振华 张倩 余四九 潘阳阳 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期4283-4295,共13页

旨在探索牦牛卵母细胞成熟过程中细胞色素P450芳香化酶(cytochrome P450arom,CYP19A1)对内源性雌激素(17β-estradiol,E_(2))分泌、卵母细胞自噬和后续胚胎发育能力的影响。本研究在牦牛卵丘卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes,CO... 旨在探索牦牛卵母细胞成熟过程中细胞色素P450芳香化酶(cytochrome P450arom,CYP19A1)对内源性雌激素(17β-estradiol,E_(2))分泌、卵母细胞自噬和后续胚胎发育能力的影响。本研究在牦牛卵丘卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes,COCs)体外成熟过程中,分别用等体积生理盐水、最佳浓度E_(2)(10^(-7)mol·L^(-1))、CYP19A1诱导剂黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)、CYP19A1抑制剂双酚A(bisphenol A,BPA)处理,实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)、Western blot和免疫荧光技术检测各组成熟COCs中CYP19A1表达水平,酶联免疫吸附方法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测诱导和抑制CYP19A1处理组牦牛成熟COCs培养液中E_(2)水平;分析不同处理组COCs细胞自噬调控关键因子:自噬相关基因5(autophagy related gene 5,ATG5)、微管相关蛋白轻链3(microtubule associated protein light chain 3,LC3)和Bcl-2同源结构域蛋白(Bcl-2 homologous domain protein,BECLIN1)表达,比较不同处理组卵母细胞成熟率、孤雌激活胚胎卵裂率、以卵裂胚胎数为基数的囊胚率。结果显示,AFB1处理组COCs中CYP19A1的表达水平上调,内源性E_(2)分泌增加,自噬相关因子ATG5、BECLIN1和LC3表达水平增加,且与对照组差异均显著(P<0.05);E_(2)处理组CYP19A1水平显著降低,但COCs细胞自噬相关因子表达水平显著升高(P<0.05);BPA处理组CYP19A1的表达显著下调,内源性E_(2)和COCs细胞自噬相关因子均显著降低(P<0.05);与对照组相比,卵母细胞成熟率与胚胎卵裂率在E_(2)和AFB1处理组显著增加(P<0.05),而在BPA处理组显著降低(P<0.05),以卵裂胚胎数为基数的囊胚率在各组间差异不显著(P>0.05)。研究表明,牦牛COCs成熟过程中CYP19A1上调内源性E_(2)水平,其上调的E_(2)与外源性E_(2)生理功能具有相似性,均可诱导细胞自噬发生,提升早期卵母细胞发育能力,结果为深入探索生殖激素调控哺乳动物卵母细胞成熟的分子机制提供了理论依据。 展开更多

关键词 雌激素 细胞自噬 细胞色素酶 卵母细胞成熟 胚胎发育

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牦牛Fas和FasL基因克隆及其在主要组织器官中的表达 被引量：3

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作者 樊江峰 陈鹏 +1 位作者 崔燕 余四九 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期228-238,共11页

为了进一步理解Fas/FasL系统,本研究拟克隆牦牛Fas和FasL基因,并对2个基因在各组织器官中的表达进行检测。采用RT-PCR方法克隆牦牛Fas和FasL基因,并利用相关软件进行生物信息学分析,结合RTPCR方法及免疫组织化学方法对2个基因在牦牛主... 为了进一步理解Fas/FasL系统,本研究拟克隆牦牛Fas和FasL基因,并对2个基因在各组织器官中的表达进行检测。采用RT-PCR方法克隆牦牛Fas和FasL基因,并利用相关软件进行生物信息学分析,结合RTPCR方法及免疫组织化学方法对2个基因在牦牛主要组织器官中的表达进行检测。克隆得到了2 605bp的牦牛Fas基因cDNA和1 572bp的FasL基因cDNA序列,与黄牛的相应序列有很高的同源性(分别为99.1%和99.4%)。除了在心中只检测到Fas mRNA外,Fas和FasL mRNA共同表达于所有检测的组织中,且2个基因均在肝、脾、肾、淋巴结、胸腺和睾丸中强表达。免疫组化检测发现FasL蛋白存在于多种体细胞的胞浆中。结果表明,除了在淋巴器官和免疫赦免位点外,Fas和FasL还强表达于其他器官如肾和肝,表明Fas/FasL系统比以前所了解的要复杂。 展开更多

关键词 FAS FASL 基因克隆 表达 牦牛

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抑制素A对牦牛颗粒细胞FSH、LH及其受体表达的影响 被引量：2

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作者 王立斌 王军乾 +5 位作者 赵凌 黄振华 王萌 王靖雷 余四九 潘阳阳 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期51-59,共9页

为了探明抑制素A(INHA)对牦牛卵泡颗粒细胞中促卵泡素(FSH)和促黄体素(LH)与其受体结合发挥的作用,通过体外培养牦牛卵泡颗粒细胞,采用免疫荧光技术(IF)检测促卵泡素受体(FSHR)和促黄体素受体(LHR)在颗粒细胞中的分布情况,用不同浓度外... 为了探明抑制素A(INHA)对牦牛卵泡颗粒细胞中促卵泡素(FSH)和促黄体素(LH)与其受体结合发挥的作用,通过体外培养牦牛卵泡颗粒细胞,采用免疫荧光技术(IF)检测促卵泡素受体(FSHR)和促黄体素受体(LHR)在颗粒细胞中的分布情况,用不同浓度外源性INHA(0、1.25、2.5、5、10、20 ng·mL^(-1))作用12 h后,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测颗粒细胞中FSHβ、LHβ、FSHR、LHR基因的表达情况,采用酶联免疫分析试验(ELISA)检测细胞内外FSH、LH的含量。结果显示,FSHR和LHR在颗粒细胞质与细胞核中均有表达。FSHβ和LHβ基因在颗粒细胞中的表达随INHA浓度的增大呈先降后升的趋势;INHA浓度接近5 ng·mL^(-1)时,FSHβ表达最低;INHA浓度接近10 ng·mL^(-1)时,LHβ表达最低;FSHR和LHR基因的表达与INHA浓度呈负相关。INHA浓度接近5 ng·mL^(-1)时,颗粒细胞内外FSH含量最低;INHA浓度接近10 ng·mL^(-1)时,颗粒细胞内外LH含量最低;其他INHA浓度下,当颗粒细胞内容物中FSH和LH含量降低时,细胞上清中含量升高。综上所述,INHA对FSHR和LHR基因在颗粒细胞中的表达存在明显的抑制作用,并且影响FSHβ和LHβ基因在颗粒细胞中的表达。研究表明INHA可以抑制牦牛卵泡颗粒细胞中FSH、LH与其受体的结合;同时,INHA对颗粒细胞内外FSH和LH的含量具有重要调节作用。本研究为进一步探索抑制素对雌性牦牛生殖调控的影响提供了理论依据。 展开更多

关键词 颗粒细胞 抑制素A(INHA) 促卵泡素(FSH) 促黄体素(LH) 受体

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