HSP60在双峰驼不同发育阶段睾丸及排卵前后生殖器官中的表达与定位

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作者 成力童 南京宏 +4 位作者 李天安 颜秋 王琪 赵兴绪 张勇 《华北农学报》 北大核心 2025年第2期230-238,共9页

为探究热休克蛋白60(HSP60)对双峰驼不同发育阶段睾丸及排卵前后卵巢、子宫及输卵管的影响及调控作用,以双峰驼睾丸为材料,克隆HSP60的CDS区序列,利用ProParam及MEGA 7.0等软件对其进行生物信息学分析,利用聚合酶链式反应(PCR)、苏木精... 为探究热休克蛋白60(HSP60)对双峰驼不同发育阶段睾丸及排卵前后卵巢、子宫及输卵管的影响及调控作用,以双峰驼睾丸为材料,克隆HSP60的CDS区序列,利用ProParam及MEGA 7.0等软件对其进行生物信息学分析,利用聚合酶链式反应(PCR)、苏木精和伊红(H&E)染色、免疫组织化学法(IHC)、实时荧光定量PCR(qPCR)及蛋白免疫印迹(Western Blot)等探究其表达规律。克隆结果显示:HSP60的编码区(CDS)长度为1722 bp,编码537个氨基酸,双峰驼HSP60基因与单峰驼及羊驼的核苷酸和氨基酸序列同源性较近。qPCR结果显示:HSP60在双峰驼不同发育阶段睾丸中均有表达,且性成熟后(3,5,7岁)睾丸中的表达水平显著高于3月龄;排卵前后卵巢、子宫及输卵管中均有HSP60的mRNA表达,且排卵后卵巢和子宫中的mRNA水平显著高于排卵前,而在输卵管中排卵前后无显著差异。Western Blot结果表明:HSP60在不同发育阶段睾丸中的表达趋势与mRNA水平相似,随着年龄的递增蛋白表达水平升高;而排卵后卵巢、子宫及输卵管中HSP60的蛋白水平显著高于排卵前。免疫组织化学法显示:HSP60蛋白主要定位于双峰驼的睾丸支持细胞、间质细胞及部分生精细胞,卵巢的颗粒细胞,子宫内膜的腺细胞以及肌细胞等。结果表明,HSP60参与双峰驼睾丸发育及精子生成过程,同时参与诱导排卵及减数分裂的调控过程。 展开更多

关键词 双峰驼 HSP60 睾丸 诱导排卵 表达定位

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胆囊收缩素介导胰岛素通路调控双峰驼卵泡颗粒细胞凋亡因子的表达

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作者 郭潞莎 王琪 +3 位作者 吕琛 马密兰 成力童 张勇 《东北农业大学学报》 北大核心 2025年第2期100-109,117,共11页

文章旨在探究胆囊收缩素(CCK)介导胰岛素通路调控双峰驼卵泡颗粒细胞(fGCs)凋亡的机制,以排卵前后的双峰驼卵巢组织和原代培养的fGCs为试验材料,通过构建p IRES2-EGFP-CCK过表达载体和si-CCK沉默序列,对fGCs中CCK表达水平进行外源性调控... 文章旨在探究胆囊收缩素(CCK)介导胰岛素通路调控双峰驼卵泡颗粒细胞(fGCs)凋亡的机制,以排卵前后的双峰驼卵巢组织和原代培养的fGCs为试验材料,通过构建p IRES2-EGFP-CCK过表达载体和si-CCK沉默序列,对fGCs中CCK表达水平进行外源性调控,利用实时荧光定量PCR、Western blot等探究其调控机制。结果表明:排卵前后的卵巢组织中CCK mRNA和蛋白水平均存在极显著差异(P<0.01)。过表达CCK后,INS、INSR、IGF1和IGF1R的蛋白水平均极显著上调(P<0.01),同时,Bcl-2 mRNA和蛋白水平均极显著上调(P<0.01),BAX、Caspase-3 mRNA和蛋白水平均极显著下调(P<0.01);反之,敲低CCK后,INS、INSR、IGF1和IGF1R的蛋白水平均显著下调(P<0.01),Bcl-2 mRNA水平呈显著下调(P<0.05), Bcl-2蛋白水平呈极显著下调(P<0.01),Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白水平均极显著上调(P<0.01)。CCK可调控胰岛素信号通路相关蛋白表达,进而抑制fGCs细胞凋亡。 展开更多

关键词 双峰驼 胆囊收缩素 卵泡颗粒细胞 胰岛素 细胞凋亡

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藏绵羊睾丸-附睾轴转录组区域化调控精子成熟的信号通路解析

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作者 李讨讨 王慧慧 +3 位作者 刘子龙 李旭杰 施小丹 马友记 《黑龙江动物繁殖》 2025年第4期1-10,共10页

试验旨在解析藏绵羊睾丸-附睾轴协同调控精子发育的分子机制。以8只健康雄性藏绵羊(3月龄性成熟前和1岁性成熟后各4只)为研究对象,采集其睾丸及附睾头、体、尾区段组织,通过转录组测序、差异表达基因分析及功能富集分析,系统比较性成熟... 试验旨在解析藏绵羊睾丸-附睾轴协同调控精子发育的分子机制。以8只健康雄性藏绵羊(3月龄性成熟前和1岁性成熟后各4只)为研究对象,采集其睾丸及附睾头、体、尾区段组织,通过转录组测序、差异表达基因分析及功能富集分析,系统比较性成熟前后睾丸-附睾轴的基因表达特征及其潜在功能差异。结果显示:性成熟明显重塑了转录组图谱,与性成熟前相比,性成熟后睾丸与附睾头的差异mRNA数量从6304个增加至11056个,附睾头与体之间、体与尾之间的差异mRNA数量也分别从19个增至2170个、163个增至1553个,驱动附睾功能分区化形成;功能富集分析解析了阶段特异性的调控信号:在睾丸至附睾头阶段,差异基因富集于AMPK/mTOR/HIF-1信号通路,提示其协调能量代谢重编程与低氧适应过程;在附睾头至体阶段,差异基因主要富集于鞘脂代谢、视黄醇代谢及Wnt信号通路,主导精子膜成熟与附睾微环境重塑;而在附睾体至尾阶段,差异基因则在脂代谢、免疫豁免及离子稳态相关通路中富集,协同维持精子的静息贮存状态。以上结果提示,性成熟通过诱导睾丸-附睾轴转录组呈现显著的区域化差异表达,进而精准调控并保障藏绵羊精子的发育成熟与贮存。 展开更多

关键词 藏绵羊 睾丸 附睾 转录组 精子成熟

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甘肃省部分地区养殖场饲料中玉米赤霉烯酮的检测及分析 被引量：3

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作者 马甜 李宗帅 +2 位作者 张启冉 赵兴绪 张勇 《甘肃畜牧兽医》 2023年第6期67-72,共6页

【目的】了解甘肃省定西、张掖等地养殖场饲料中玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEA)的污染状况,为改善养殖场饲料存储方法提供基础数据。【方法】随机采集甘肃不同地区6个养殖场的饲料,通过超高效液相色谱法测定饲料中玉米赤霉烯酮的含量并... 【目的】了解甘肃省定西、张掖等地养殖场饲料中玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEA)的污染状况,为改善养殖场饲料存储方法提供基础数据。【方法】随机采集甘肃不同地区6个养殖场的饲料,通过超高效液相色谱法测定饲料中玉米赤霉烯酮的含量并进行分析。【结果】6个养殖场共计48份饲料中,玉米赤霉烯酮的总检出率为75.00%,其中21份饲料中的玉米赤霉烯酮含量超出国家标准(500μg/kg),12份饲料中未测出玉米赤霉烯酮。【结论】对定西、张掖等地养殖场饲料中存在的霉菌毒素应引起高度重视,在污染源头和存储方法上应加以甄别,从而保障养殖场经济效益。 展开更多

关键词 饲料 玉米赤霉烯酮 超高效液相色谱法 贮存

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甘肃省庆阳地区湖羊皮下脓肿病的流行病学调查及病原体分析

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作者 杨帅 段宏伟 +5 位作者 吕建树 曾建林 闫振兴 胡俊杰 张勇 赵兴绪 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期2510-2517,共8页

2019—2022年,甘肃省庆阳地区湖羊皮下脓肿病呈爆发趋势,为指导疾病防控和合理用药,本研究随机选取6个千头以上湖羊养殖场进行流行病学和致病病原调查,采用16S微生物多样性测序检测病料菌种差异;常规细菌分离培养鉴定致病病原;动物感染... 2019—2022年,甘肃省庆阳地区湖羊皮下脓肿病呈爆发趋势,为指导疾病防控和合理用药,本研究随机选取6个千头以上湖羊养殖场进行流行病学和致病病原调查,采用16S微生物多样性测序检测病料菌种差异;常规细菌分离培养鉴定致病病原;动物感染试验测定分离菌致病性及试验动物组织病理变化;纸片扩散法进行药敏试验。结果表明,该病以断奶后育成公羊多发,发病率2.3%~18.4%;6份脓肿样本均以金黄色葡萄球菌为优势菌种,临床分离得到6株金黄色葡萄球菌和3株大肠杆菌;分离菌感染小鼠出现皮下脓肿症状;组织病理观察结果可见,小鼠内脏器官以充血、出血、坏死和炎性细胞浸润等病变为主,皮肤组织结构被破坏;金黄色葡萄球菌和大肠杆菌对常用抗生素敏感性良好,大肠杆菌对头孢噻吩耐药。本研究结果为该地区湖羊皮下脓肿病的防制及合理用药提供了理论依据,为全国湖羊皮下脓肿病流行规律研究提供了参考。 展开更多

关键词 皮下脓肿 流行病学调查 金黄色葡萄球菌 16SrRNA

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缺氧诱导基因1C在牦牛隐睾中的表达及其调控机制研究

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作者 马密兰 王琪 +3 位作者 颜秋 李天安 赵兴绪 张勇 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期2983-2994,共12页

旨在探究缺氧诱导基因1C(HIG1 hypoxia inducible domain family member 1C,HIGD1C)对牦牛睾丸支持细胞凋亡的影响。本研究分别选择3头3~6岁龄健康状况良好的公牦牛和隐睾症公牦牛,以其睾丸组织作为研究材料。通过HE染色、牦牛睾丸支持... 旨在探究缺氧诱导基因1C(HIG1 hypoxia inducible domain family member 1C,HIGD1C)对牦牛睾丸支持细胞凋亡的影响。本研究分别选择3头3~6岁龄健康状况良好的公牦牛和隐睾症公牦牛,以其睾丸组织作为研究材料。通过HE染色、牦牛睾丸支持细胞分离培养、间接免疫荧光、RT-qPCR、Western blot、HIGD1C过表达与干扰载体构建及体外细胞转染等技术,探究HIGD1C对牦牛睾丸支持细胞凋亡的调控机制。结果显示:正常睾丸基底膜及间质组织完整,曲细精管、管周肌细胞及支持细胞等排列紧密,隐睾中曲细精管断裂萎缩且HIGD1C在牦牛隐睾组织中转录及蛋白的表达水平极显著于高于正常睾丸组织(P<0.01);HIGD1C蛋白主要分布在睾丸间质细胞和支持细胞;成功分离培养出牦牛睾丸支持细胞且HIGD1C蛋白定位于原代睾丸支持细胞胞核;HIGD1C过表达支持细胞后,Bcl-2 mRNA表达水平显著上调(P<0.05),蛋白表达水平极显著上调(P<0.01),Bax和Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平均极显著上调(P<0.01),流式细胞术结果显示过表达HIGD1C组支持细胞凋亡率极显著上升(P<0.01);反之,HIGD1C敲除后,Bax、Bcl-2和Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平均极显著下调(P<0.01),流式细胞术结果显示HIGD1C敲除组支持细胞凋亡率极显著下调(P<0.01)。本研究结果表明:正常睾丸组织结构完整,隐睾间质疏松,且HIGD1C在牦牛隐睾组织中高表达。体外细胞试验表明上调HIGD1C,可以激活促凋亡蛋白,促进牦牛支持细胞凋亡;反之,下调HIGD1C表达水平会抑制支持细胞凋亡。提示HIGD1C参与调控牦牛睾丸支持细胞的凋亡,为揭示牦牛隐睾的发生机制提供了参考。 展开更多

关键词 HIGD1C 隐睾症 支持细胞 凋亡 牦牛

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菊粉对巨噬细胞RAW 264.7免疫活性的影响 被引量：2

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作者 牛甜 杨帅 +3 位作者 段宏伟 成文婧 张丽鸿 胡俊杰 《天然产物研究与开发》 北大核心 2025年第1期10-17,共8页

菊粉(inulin,INU)作为一种植物多糖,因具有广泛的应用价值以及增强免疫、抗炎、抗肿瘤等生物学功能而备受关注,本研究旨在探究INU对巨噬细胞RAW 264.7免疫活性的影响。采用细胞增殖检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK8)、中性红试验检... 菊粉(inulin,INU)作为一种植物多糖,因具有广泛的应用价值以及增强免疫、抗炎、抗肿瘤等生物学功能而备受关注,本研究旨在探究INU对巨噬细胞RAW 264.7免疫活性的影响。采用细胞增殖检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK8)、中性红试验检测INU对巨噬细胞RAW 264.7增殖活性和吞噬活性的影响。采用格里斯试剂法和免疫酶联吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞中一氧化氮(nitric oxide,NO)和细胞因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的释放量。实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qPCR)检测细胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)的基因表达量以及免疫蛋白印迹(Western blotting,WB)检测INU对巨噬细胞RAW 264.7中环氧化酶2(cyclooxygenase 2,COX2)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和丝裂原蛋白活化激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)相关通路关键蛋白表达的影响。实验结果表明,INU显著增强RAW 264.7细胞的增殖活性、吞噬活性并促进NO的分泌及IL-1β、IL-6、TNF-α的表达水平(P<0.01)。此外,INU还以浓度依赖的方式显著上调了COX2、iNOS及MAPK通路中磷酸化细胞外调节蛋白激酶(phosphorylated extracellular regulatory protein kinase,p-ERK)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(phosphorylated p38 mitogen-activated protein kinase,p-p38)的蛋白表达(P<0.01)。综上所述,INU可通过ERK/p38MAPK通路调控巨噬细胞的免疫活性,具有良好的免疫调节能力。 展开更多

关键词 菊粉 巨噬细胞RAW 264.7 MAPK信号通路 免疫活性

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发情和非发情期雄性双峰驼尿液差异代谢物及其功能预测

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作者 袁宝 张博皓 +4 位作者 李建富 陈文丽 张勇 赵兴绪 张全伟 《兽类学报》 北大核心 2025年第3期399-408,共10页

为探究发情期雄性双峰驼(Camelus ferus)尿液的代谢差异,以期为双峰驼繁殖调控机制提供理论依据。本研究采集发情期(Breeding season,BS)(n=6)和非发情期(Non‑breeding season,NBS)(n=6)雄性双峰驼尿液,利用气相/液相色谱-质谱(Gas/Liqu... 为探究发情期雄性双峰驼(Camelus ferus)尿液的代谢差异,以期为双峰驼繁殖调控机制提供理论依据。本研究采集发情期(Breeding season,BS)(n=6)和非发情期(Non‑breeding season,NBS)(n=6)雄性双峰驼尿液,利用气相/液相色谱-质谱(Gas/Liquid chromatography‑mass spectrometry,GC/LC‑MS)技术,筛选尿液中差异表达代谢物(Differentially expressed metabolites,DEMs);基于人类代谢组数据库(Human Metabolome Database,HMDB)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)数据库鉴定尿液中影响双峰驼季节性发情的关键功效物质及其通路。结果显示,GC‑MS鉴定代谢物468个,LC‑MS鉴定代谢物6193个。以NBS为对照,BS组GC/LC‑MS分别鉴定到205个和601个DEMs(P<0.05),主要为苯及其取代衍生物、脂肪酰、吲哚及其衍生物和有机氮化合物等。GC/LC‑MS KEGG富集分析鉴定获得12条相同通路,GC/LC‑MS维恩鉴定获得L−组氨酸、5'−甲硫基腺苷、3−甲基组氨酸、L−蛋氨酸和三醋精5种共有DEMs。结果表明,L−组氨酸和L−蛋氨酸可通过氨基酸−tRNA的生物合成和组氨酸代谢通路,影响精子发生和生殖健康,从而进一步影响雄性双峰驼发情。此外,基于L−组氨酸和L−蛋氨酸在雌性动物中的作用,推测这两种DEMs可能作为信息素影响雌性双峰驼的性激素合成,进而诱导母驼发情。KEGG富集分析表明,雄性双峰驼发情还与TCA循环、精氨酸的生物合成途径、GABA能信号传导及丙酮酸代谢调控的精子活力和生殖健康有关。上述结果为深入解析双峰驼繁殖调控机制研究提供了重要参考。 展开更多

关键词 双峰驼 季节性发情 尿液 气相/液相色谱-质谱 差异代谢物 功能预测 信息素

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临床型奶牛乳房炎乳腺组织中LDHA和PFKP的表达定位及功能分析

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作者 霍王博 张博皓 +4 位作者 蔺婷 魏倩倩 赵兴绪 张勇 张全伟 《甘肃农业大学学报》 北大核心 2025年第1期10-18,共9页

【目的】探究临床型奶牛乳房炎乳腺组织中乳酸脱氢酶A(Lactate dehydrogenase A,LDHA)和血小板型磷酸果糖激酶(Platelet phosphofructose kinase,PFKP)的分布、表达规律及其潜在功能。【方法】采集泌乳期健康(Control,C,n=3)和患临床型... 【目的】探究临床型奶牛乳房炎乳腺组织中乳酸脱氢酶A(Lactate dehydrogenase A,LDHA)和血小板型磷酸果糖激酶(Platelet phosphofructose kinase,PFKP)的分布、表达规律及其潜在功能。【方法】采集泌乳期健康(Control,C,n=3)和患临床型乳房炎(clinical mastitis,CM,n=3)荷斯坦奶牛乳腺组织,通过苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,H&E)染色观察奶牛乳腺组织病理变化;免疫组织化学(immunohistochemical,IHC)染色、免疫荧光(Immunofluorescence,IF)染色和实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)分析奶牛乳腺组织中LDHA和PFKP的分布和表达规律;基于非依赖型模式(data-independent acquisition,DIA)蛋白质组学数据,通过生物信息学分析LDHA和PFKP潜在功能。【结果】H&E染色结果表明,C组乳腺结构完整,腺泡充盈,CM组乳腺结构模糊,腺泡塌陷,且有炎性细胞浸润;IHC和IF结果显示LDHA和PFKP蛋白主要定位于乳腺上皮细胞的胞质;qRT-PCR结果显示,与C组相比,CM组乳腺中LDHA和PFKP基因表达水平显著上调(P<0.01);生信预测分析发现LDHA和PFKP可能通过酸代谢、糖代谢等生物学途径参与奶牛临床型乳房炎的发生。【结论】LDHA与PFKP参与奶牛乳房炎的发病过程,其高表达可加剧乳房炎症反应,这为深入研究奶牛乳腺组织中LDHA和PFKP的功能及机制提供参考。 展开更多

关键词 临床型奶牛乳房炎 糖酵解途径 LDHA PFKP DIA蛋白质组学

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双峰驼发情期和乏情期CCKBR在睾丸及附睾中的差异表达特性分析

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作者 王文静 崔爱利 +5 位作者 颜秋 南京宏 黄雪 赵兴绪 张勇 王琪 《核农学报》 北大核心 2025年第8期1676-1687,共12页

胆囊收缩素Ⅱ型受体(CCKBR)是一种G蛋白偶联受体,不仅参与CCK神经递质调控食欲、情绪及行为节律过程,还参与细胞增殖、分化和代谢等多种生理过程。为探究CCKBR是否参与调控双峰驼季节性发情及其在繁殖调控中的作用,本试验选取健康的成... 胆囊收缩素Ⅱ型受体(CCKBR)是一种G蛋白偶联受体,不仅参与CCK神经递质调控食欲、情绪及行为节律过程,还参与细胞增殖、分化和代谢等多种生理过程。为探究CCKBR是否参与调控双峰驼季节性发情及其在繁殖调控中的作用,本试验选取健康的成年雄性发情期和乏情期双峰驼睾丸及附睾组织(Y=5,n=3),基于转录组学筛选目标基因,通过苏木精-伊红染色(H&E)、实时荧光定量PCR(qRTPCR)、免疫组织化学染色(IHC)和蛋白免疫印迹(Western blot)技术检测CCKBR在睾丸及附睾组织的表达情况。测序结果显示:CCKBR的mRNA水平在乏情期睾丸组织高表达,而且参与生殖及动物性行为过程;H&E染色结果显示,乏情期睾丸生精小管管腔小于发情期,而附睾组织中乏情期相比于发情期管壁较薄;qRT-PCR结果显示:CCKBR在乏情期睾丸、附睾头和附睾尾的mRNA表达水平极显著高于发情期(P<0.01),而乏情期的附睾体的表达量极显著低于发情期(P<0.01);Western blot结果显示,CCKBR蛋白在睾丸附睾表达趋势与qRT-PCR的表达趋势基本一致;IHC结果显示,CCKBR在睾丸支持细胞、间质细胞及附睾上皮及平滑肌细胞中均有阳性表达。本研究揭示了CCKBR参与调控不同繁殖期睾丸和附睾的发育及精子的成熟过程,为进一步研究双峰驼季节性发情的调控机制提供了参考。 展开更多

关键词 双峰驼 胆囊收缩素Ⅱ型受体(CCKBR) 睾丸 附睾

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基于转录组探究血小板衍生生长因子受体B在牦牛睾丸及隐睾中的功能

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作者 黄雪 李天安 +5 位作者 颜秋 崔爱利 王文静 张勇 赵兴绪 王琪 《核农学报》 北大核心 2025年第4期737-747,共11页

血小板衍生生长因子受体B(PDGFRB)是一种细胞表面的酪氨酸激酶受体,不仅调节细胞增殖、迁移和存活过程,还对组织修复、血管形成、生殖和氧化应激具有调控作用。为探究PDGFRB与牦牛隐睾发生及隐睾氧化应激的关系,在前期转录组测序的基础... 血小板衍生生长因子受体B(PDGFRB)是一种细胞表面的酪氨酸激酶受体,不仅调节细胞增殖、迁移和存活过程,还对组织修复、血管形成、生殖和氧化应激具有调控作用。为探究PDGFRB与牦牛隐睾发生及隐睾氧化应激的关系,在前期转录组测序的基础上,以健康牦牛的睾丸和隐睾组织为研究材料,通过苏木精-伊红(H&E)染色观察睾丸组织和隐睾组织的形态结构,通过生物信息学分析筛选出与生殖及氧化应激相关的候选基因PDGFRB。利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)和间接免疫荧光(IF)等方法检测PDGFRB的mRNA和蛋白表达及分布情况,探究PDGFRB与隐睾发生的关系。H&E结果显示,正常睾丸组织基底膜和间质组织结构完整,排列紧密,隐睾中生精小管断裂萎缩,间质细胞紧密连接受损。qRT-PCR结果显示,与正常睾丸相比,隐睾中PDGFRB mRNA的表达水平极显著升高(P<0.01)。Western blot结果显示,PDGFRB在睾丸和隐睾组织中均有表达,且隐睾中的蛋白表达水平显著高于正常睾丸组织(P<0.05)。IF结果显示,PDGFRB在睾丸支持细胞、间质细胞及生精细胞中均有表达。本研究揭示了PDGFRB可能参与隐睾的发生与氧化应激过程,为解析隐睾的发生过程提供了理论依据。 展开更多

关键词 牦牛 隐睾 氧化应激 血小板衍生生长因子受体B

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双氢睾酮通过调控孕酮、雌二醇和细胞凋亡参与绵羊子宫功能 被引量：3

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作者 丁自强 葛闻博 +7 位作者 段宏伟 吕建树 曾建林 王文娟 牛甜 张勇 赵兴绪 胡俊杰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期2993-3005,共13页

旨在探究双氢睾酮(dihydrotestosterone,DHT)是否通过调节孕酮(progesterone,P_(4))、雌二醇(oestrogen,E_(2))和细胞凋亡参与影响绵羊子宫功能,以揭示其在绵羊生殖生理中的潜在作用。本试验以1.5岁左右的雌性小尾寒羊为试验动物,检测... 旨在探究双氢睾酮(dihydrotestosterone,DHT)是否通过调节孕酮(progesterone,P_(4))、雌二醇(oestrogen,E_(2))和细胞凋亡参与影响绵羊子宫功能,以揭示其在绵羊生殖生理中的潜在作用。本试验以1.5岁左右的雌性小尾寒羊为试验动物,检测卵泡期、黄体期和妊娠期子宫中DHT合成酶和雄激素受体(androgen receptor,AR)的表达变化。随后,体外培养绵羊子宫内膜上皮细胞,并用DHT(10^(-10)~10^(-7) mol·L^(-1))和AR拮抗剂氟他胺(Flu,10^(-8) mol·L^(-1))处理(n=3)。通过酶联免疫吸附试验、细胞免疫荧光、蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR检测P_(4)和E_(2)水平、合成酶和受体表达。此外,还检测经DHT和Flu处理后,绵羊子宫内膜上皮细胞中凋亡因子Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)、B细胞淋巴瘤蛋白2(B cell lymphoma protein 2,Bcl-2)、半胱天冬酶3(caspase 3,CASP3)和活化半胱天冬酶3(active-caspase 3,Act-CASP3)的表达变化。结果表明,绵羊子宫不同时期DHT的合成和AR的表达存在差异,妊娠期子宫DHT合成及AR表达显著低于卵泡期和黄体期(P<0.05)。10^(-10)~10^(-7) mol·L^(-1) DHT处理后,P_(4)合成酶表达显著上调(P<0.05),在10^(-8)~10^(-7) mol·L^(-1) DHT时P_(4)合成显著增加(P<0.05),在10^(-10)~10^(-8) mol·L^(-1) DHT时孕酮受体蛋白表达显著增加(P<0.05),但10^(-7) mol·L^(-1) DHT时孕酮受体蛋白表达显著下降(P<0.05);在10^(-8)~10^(-7) mol·L^(-1) DHT时E_(2)相关合成酶显著减少,并且E_(2)水平显著下降(P<0.05),在10^(-9)和10^(-7) mol L^(-1) DHT时E_(2)受体ERα蛋白显著下调(P<0.05),在10^(-10)~10^(-7) mol·L^(-1) DHT时ERβ和GPER显著增加(P<0.05)。经Flu处理后部分解除DHT对P_(4)和E_(2)的调控。此外,10^(-10)~10^(-7) mol·L^(-1) DHT显著促进子宫内膜上皮细胞凋亡(P<0.05)。本研究证实DHT至少部分通过AR调节P_(4)和E_(2)合成及受体表达,影响细胞凋亡,参与调节子宫功能,这为进一步阐明雄激素参与调节子宫功能提供了新的基础和相关数据。 展开更多

关键词 双氢睾酮 孕酮 雌二醇 凋亡 子宫功能

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妊娠家兔生殖轴系KISS1和TrkA的分布特征和表达规律 被引量：3

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作者 安笑笑 张博皓 +6 位作者 戴丽君 白旭 石军 张霞 张勇 张全伟 赵兴绪 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2022年第5期213-221,共9页

为明确吻素(KISS1)和酪氨酸蛋白激酶A(TrkA)在诱导排卵动物生殖轴组织中的表达模式和生理功能,解析KISS1和TrkA对诱导排卵动物生殖的调控机制,以家兔为诱导排卵动物模型,采集妊娠中期(14~18 d)家兔生殖轴系组织(下丘脑、垂体、卵巢和子... 为明确吻素(KISS1)和酪氨酸蛋白激酶A(TrkA)在诱导排卵动物生殖轴组织中的表达模式和生理功能,解析KISS1和TrkA对诱导排卵动物生殖的调控机制,以家兔为诱导排卵动物模型,采集妊娠中期(14~18 d)家兔生殖轴系组织(下丘脑、垂体、卵巢和子宫),通过苏木精-伊红染色(H&E)、免疫组织化学染色(IHC)、半定量PCR(RT-PCR)、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫印迹(WB)分析妊娠家兔生殖轴组织中KISS1和TrkA的表达规律和分布特征。IHC结果表明,家兔垂体嗜碱性细胞和卵子透明带中KISS1蛋白的阳性反应较强;TrkA蛋白在下丘脑神经内分泌小细胞、垂体嗜碱性细胞、卵巢颗粒黄体细胞、子宫固有层呈阳性表达。RT-PCR结果显示,妊娠家兔生殖轴组织中均有KISS1表达,且两两比较组间差异显著;下丘脑、垂体、卵巢各组织中TrkA mRNA表达丰度组间差异极显著。KISS1和TrkA基因qRT-PCR结果与RT-PCR结果表达趋势一致。WB结果发现,KISS1蛋白仅在垂体组织表达;TrkA蛋白在生殖轴组织中均有表达,且表达量在子宫、卵巢、垂体、下丘脑各组织依次呈下降趋势。结果说明,KISS1和TrkA参与调控家兔妊娠过程,且TrkA的作用范围更为广泛。 展开更多

关键词 家兔 生殖轴 生殖激素 酪氨酸蛋白激酶A(TrkA) 吻素(KISS1)

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白藜芦醇对玉米赤霉烯酮所致雌性大鼠子宫和卵巢损伤的影响 被引量：2

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作者 姚丹 李怡娜 +4 位作者 成晓丽 何曾文 汪玥 马小军 张勇 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期3317-3328,共12页

本试验通过建立有效的玉米赤霉烯酮所致雌性大鼠毒性模型,探讨白藜芦醇对玉米赤霉烯酮所致雌性大鼠子宫和卵巢损伤的影响。1)将32只2月龄雌性大鼠随机分为4组,每组8个重复,每个重复1只。对照组大鼠每天腹腔注射玉米油,低、中、高浓度组... 本试验通过建立有效的玉米赤霉烯酮所致雌性大鼠毒性模型,探讨白藜芦醇对玉米赤霉烯酮所致雌性大鼠子宫和卵巢损伤的影响。1)将32只2月龄雌性大鼠随机分为4组,每组8个重复,每个重复1只。对照组大鼠每天腹腔注射玉米油,低、中、高浓度组大鼠分别每天腹腔注射1.5、3.0和5.0 mg/kg玉米赤霉烯酮,每天注射量均为0.5 mL,试验期5 d。2)将32只2月龄雌性大鼠随机分为4组,每组8个重复,每个重复1只。第1~21天,RSV组和RSV+ZEA组大鼠每天灌胃40 mg/kg白藜芦醇,空白组和ZEA组大鼠每天灌胃羧甲基纤维素钠溶液,每天灌胃量均为1 mL;第22~26天,ZEA组和RSV+ZEA组大鼠按上述方法构建玉米赤霉烯酮所致雌性大鼠生殖系统凋亡的动物模型,空白组和RSV组大鼠腹腔注射玉米油。结果表明:1)与对照组相比,中、高浓度组子宫内膜变薄,子宫腺增多,闭锁卵泡数量增多,黄体增大且充血严重,子宫和卵巢中B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的mRNA和蛋白相对表达量显著升高(P<0.05),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的mRNA和蛋白相对表达量显著降低(P<0.05)。2)与ZEA组相比,RSV+ZEA组子宫内膜变厚,上皮细胞排列整齐,子宫腺减少;卵巢中可见发育卵泡,闭锁卵泡数量减少,黄体充血减少。与空白组和RSV+ZEA组相比,ZEA组的子宫和卵巢中Bax和Caspase-3的阳性表达增强,而Bcl-2的阳性表达减弱。与ZEA组相比,RSV+ZEA组的子宫和卵巢中Bax和Caspase-3的mRNA和蛋白相对表达量显著降低(P<0.05),Bcl-2的mRNA和蛋白相对表达量显著升高(P<0.05)。由此可见,2月龄雌性大鼠连续腹腔注射玉米赤霉烯酮5 d(每天3.0 mg/kg,玉米油为溶剂)可成功建立雌性大鼠玉米赤霉烯酮毒性动物模型。玉米赤霉烯酮对雌性大鼠子宫和卵巢有损伤,白藜芦醇对玉米赤霉烯酮引起的生殖毒性有明显保护作用。 展开更多

关键词 玉米赤霉烯酮 白藜芦醇 凋亡 生殖

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性激素受体在双峰驼正常睾丸及隐睾的分布 被引量：1

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作者 马晓杰 杨大鹏 +1 位作者 陈少宇 袁莉刚 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期27-35,共9页

【目的】比较双峰驼(Camelus bactrianus)正常睾丸及隐睾中性激素受体分布差异,探究双峰驼隐睾病理学变化与性激素受体的相关性,为双峰驼睾丸病理研究提供形态学参考。【方法】采用常规组织切片染色及特殊染色法观察隐睾病理学组织形态... 【目的】比较双峰驼(Camelus bactrianus)正常睾丸及隐睾中性激素受体分布差异,探究双峰驼隐睾病理学变化与性激素受体的相关性,为双峰驼睾丸病理研究提供形态学参考。【方法】采用常规组织切片染色及特殊染色法观察隐睾病理学组织形态以及糖原和蛋白的分布变化;应用免疫组织化学法及免疫荧光技术定位雄激素受体(androgen receptor,AR)、雌激素受体α(estrogen receptor alpha,ERα)、雌激素受体β(estrogen receptor beta,ERβ)、促黄体生成素受体(luteinizing hormone receptor,LHR)和促卵泡激素受体(follicle-stimulating hormone receptor,FSHR)在正常睾丸及隐睾的分布及表达。【结果】与正常睾丸相比,隐睾中各类细胞数量显著减少,Leydig细胞发育迟缓,Sertoli细胞多呈幼稚态,结缔组织及生精小管基膜酸性黏蛋白阳性强度下降,总蛋白分布下降;ERα、LHR和FSHR的表达极显著升高(P<0.01),AR的表达极显著降低(P<0.01),ERβ的表达差异不显著(P>0.05);AR在Leydig细胞和Sertoli细胞中的表达强度减弱,ERα在Sertoli细胞中的表达强度减弱,ERβ在Leydig细胞和Sertoli细胞中的表达强度无变化,LHR和FSHR在Leydig细胞和Sertoli细胞中的表达强度增强。【结论】双峰驼隐睾组织结构发育迟缓,糖原及蛋白分泌异常。隐睾Leydig细胞和Sertoli细胞性激素受体表达异常,不利于精子正常发生,阻碍生精细胞发育。 展开更多

关键词 双峰驼 性激素受体 免疫组化 隐睾

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STAR基因在不同发育期绵羊睾丸和附睾中的表达与组织分布 被引量：1

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作者 蒋雨婷 王霞 +5 位作者 宋娟娟 李晨硕 王彩丽 陈浩林 李讨讨 马友记 《中国畜禽种业》 2024年第4期77-84,1,共9页

为探讨STAR基因在发育的绵羊睾丸和附睾中的表达模式及潜在功能,该研究采集3月龄、1周岁和3周岁藏绵羊睾丸和附睾(头、体和尾)组织样本,利用实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹和免疫组织荧光染色法检测STAR基因的表达及其编码蛋白的细胞定... 为探讨STAR基因在发育的绵羊睾丸和附睾中的表达模式及潜在功能,该研究采集3月龄、1周岁和3周岁藏绵羊睾丸和附睾(头、体和尾)组织样本,利用实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹和免疫组织荧光染色法检测STAR基因的表达及其编码蛋白的细胞定位。结果发现,随着年龄的增加,在藏绵羊睾丸和附睾(附睾头除外)中STAR基因在转录水平的表达总体呈下降趋势,而在蛋白质水平的表达呈上调趋势。STAR蛋白主要存在于藏绵羊睾丸间质细胞和附睾假复层纤毛上皮主细胞。鉴于间质细胞和主细胞的主要生物学功能是分泌睾酮和分泌促进精子成熟所需的蛋白质,由此推测,STAR基因可能主要在睾丸间质细胞和附睾主细胞的发育和功能维持中发挥作用,进而促进雄激素的合成和精子的成熟。 展开更多

关键词 绵羊 STAR基因 睾丸 附睾

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基于肿瘤坏死因子信号通路探讨槲皮素对小鼠乳腺炎模型的作用机制 被引量：12

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作者 王桃 曹璐 +3 位作者 米晓钰 吕琛 赵兴绪 张勇 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期3972-3982,共11页

本试验旨在探讨槲皮素对金黄色葡萄球菌致小鼠乳腺炎的肿瘤坏死因子(TNF)信号通路机制。将90只母鼠按照解剖时间(第3、5、7天)分为3个大组,每组共30只母鼠,再将各大组母鼠分为空白对照组(注射生理盐水)、模型组(注射菌液)及槲皮素高(200... 本试验旨在探讨槲皮素对金黄色葡萄球菌致小鼠乳腺炎的肿瘤坏死因子(TNF)信号通路机制。将90只母鼠按照解剖时间(第3、5、7天)分为3个大组,每组共30只母鼠,再将各大组母鼠分为空白对照组(注射生理盐水)、模型组(注射菌液)及槲皮素高(200 mg/kg)、中(100 mg/kg)、低(50 mg/kg)剂量组,共5个小组,每小组各6只母鼠,分别在治疗第3、5、7天采血,检测血液生理指标,随后颈椎脱臼处死,取乳腺组织,通过苏木精-伊红(HE)染色观察病理组织的变化,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测核因子抑制蛋白α(IKBα)、 IκB激酶β(IKKβ)及核转录因子-κB(NF-κB) mRNA相对表达量,蛋白免疫印迹检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IKKβ及NF-κB蛋白表达量。结果表明:1)与空白对照组相比,模型组血液白细胞数量极显著升高(P<0.01),乳腺组织病变严重,乳腺组织中IKBα、IKKβ、NF-κB的mRNA相对表达量显著升高(P<0.05)。2)与空白对照组相比,高剂量组NF-κB、IKBα的mRNA相对表达量差异不显著(P>0.05),高剂量组IKKβ的mRNA相对表达量在治疗第3、7天差异不显著(P>0.05)。蛋白免疫印迹结果显示,与空白对照组相比,高剂量组TNF-α蛋白相对表达量差异不显著(P>0.05),高剂量组IL-6、IKKβ、NF-κB蛋白相对表达量在治疗第3天差异不显著(P>0.05),在治疗第5、7天差异显著(P<0.05)。综上所述,槲皮素可以通过抑制TNF信号通路中IKBα、IKKβ、NF-κB mRNA相对表达量及TNF-α、IL-6、IKKβ、NF-κB蛋白相对表达量来发挥作用,且随着槲皮素添加剂量的升高,其治疗效果也越好,呈现出明显的剂量依赖性。在整个疾病的发生发展过程中,符合疾病发展的规律,在治疗第7天时,基本进入转归期,所有指标基本恢复正常。 展开更多

关键词 槲皮素 金黄色葡萄球菌 乳腺炎 炎性因子

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银川某牛场牛源金黄色葡萄球菌的耐药性分析及毒力基因检测 被引量：8

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作者 达举云 宋倩 +5 位作者 史金莲 卢挺 崔晓 丁渲攀 张勇 赵兴绪 《动物医学进展》 北大核心 2023年第6期33-40,共8页

为了解宁夏某牛场引发奶牛乳房炎致病菌情况,采集临床型乳房炎奶牛乳样52份,采用Baid-Parker选择性培养基分离纯化细菌,革兰氏染色镜检、生化试验、16S rDNA序列分析鉴定疑似菌株。采用琼脂纸片扩散法(K-B法)对细菌进行药敏试验,利用PC... 为了解宁夏某牛场引发奶牛乳房炎致病菌情况,采集临床型乳房炎奶牛乳样52份,采用Baid-Parker选择性培养基分离纯化细菌,革兰氏染色镜检、生化试验、16S rDNA序列分析鉴定疑似菌株。采用琼脂纸片扩散法(K-B法)对细菌进行药敏试验,利用PCR检测分离株中携带的耐药基因、mecA基因和毒力基因。结果显示,52份乳样分离鉴定出29株金黄色葡萄球菌,其中有12株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),检出率为41.4%;不同程度的多重耐药菌株达到20株,多重耐药率达到68.9%,万古霉素的敏感率为100%,左氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星的敏感率达到了65%以上;磺胺类耐药基因sul1和sul2的检出率均为100%,β-内酰胺类耐药基因pbp1A、pbp2B和氯霉素类耐药基因catA3的检出率40%以上,其他类耐药基因检出率较低;毒力基因检测结果显示,nuc、coa的检出率为100%,clfa和spa的检出率较高,hlb、sea、seg、sak、set1、FnBPA、PVL、FnBPB的检出率较低。 展开更多

关键词 奶牛乳房炎 金黄色葡萄球菌 耐药性 毒力基因

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张掖市某牛场1例牛源格氏乳球菌的分离鉴定及毒力基因检测 被引量：5

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作者 史金莲 达举云 +4 位作者 宋倩 李怡娜 丁渲攀 赵兴绪 张勇 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期837-841,849,共6页

为了确定甘肃省张掖市某养殖场致奶牛乳腺炎的病原,本实验从12份患牛乳汁中分离病原菌,并对其进行了形态学、生化鉴定、16S rRNA基因的PCR扩增及序列同源性分析。利用K-B纸片扩散法检测分离菌株的药物敏感性,采用PCR方法检测其11种毒力... 为了确定甘肃省张掖市某养殖场致奶牛乳腺炎的病原,本实验从12份患牛乳汁中分离病原菌,并对其进行了形态学、生化鉴定、16S rRNA基因的PCR扩增及序列同源性分析。利用K-B纸片扩散法检测分离菌株的药物敏感性,采用PCR方法检测其11种毒力基因。结果显示,分离出1株革兰氏阳性球菌,且其生化特性与格氏乳球菌相符,16S rRNA基因序列经比对结果显示,分离菌与GenBank登录的格氏乳球菌(MT597590.1)的同源性高达100%,表明分离菌为格氏乳球菌,并命名为LG01。将分离菌株以腹腔注射方式感染小鼠(1.5×10^(8) cfu/mL),0.2 mL/只,在7 d的观察期内观察小鼠的临床症状,并从死亡小鼠内取其脏器组织,制备组织病理切片并观察。结果显示,接种16 h后小鼠出现竖毛、眼部红肿、流涎、震颤、精神沉郁等临床症状,48 h内小鼠陆续死亡,并且从死亡小鼠病变组织中重新分离到该菌。死亡小鼠的组织病理切片观察结果显示,感染组小鼠的肝脏、脾脏、肺脏、肾脏均出现较明显的病理变化;对照组小鼠均未出现死亡,且其脏器组织无明显病变,表明分离出的格氏乳球菌对小鼠有致病性。药敏试验结果显示,分离菌对阿米卡星、头孢他啶、克拉霉素、多粘菌素B、复方新诺明等药物耐药,对氨苄西林、头孢西叮、四环素、诺氟沙星、环丙沙星、万古霉素、庆大霉素等药物敏感。11种毒力基因检测结果显示,该分离菌携带Adhesin PsaA、Enolase、LPxTG-3、Adhesin cluster 1、Adhesin cluster 2、Capsule gene cluster、folp、gapc 8种毒力基因,推测该分离株的致病性可能较强。本实验为临床格氏乳球菌感染的防治提供数据参考。 展开更多

关键词 牛 格氏乳球菌 分离鉴定 毒力基因

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宁夏吴忠地区奶牛临床型乳房炎主要病原菌的分离鉴定及耐药性分析 被引量：5

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作者 宋倩 达举云 +4 位作者 李怡娜 史金莲 李宗帅 赵兴绪 张勇 《动物医学进展》 北大核心 2022年第2期70-75,共6页

为了解宁夏吴忠地区奶牛乳房炎的主要病原菌及其耐药情况,采集56份罹患乳房炎的奶牛乳样进行病原菌分离,并对分离菌进行了生化鉴定、16S rRNA基因序列分析、药敏试验以及耐药基因检测。结果表明,该地区的主要病原菌为大肠埃希氏菌和无... 为了解宁夏吴忠地区奶牛乳房炎的主要病原菌及其耐药情况,采集56份罹患乳房炎的奶牛乳样进行病原菌分离,并对分离菌进行了生化鉴定、16S rRNA基因序列分析、药敏试验以及耐药基因检测。结果表明,该地区的主要病原菌为大肠埃希氏菌和无乳链球菌,检出率分别为23.2%和14.3%。药敏试验结果表明,大肠埃希氏菌主要对头孢他啶、环丙沙星敏感,无乳链球菌主要对阿米卡星敏感。耐药基因检测结果表明大肠埃希氏菌和无乳链球菌主要对氨基糖胺类、氟喹诺酮类、四环素类药物敏感,大肠埃希氏菌对磺胺类药物耐药,对β-内酰胺类药物部分药物敏感,部分药物耐药;无乳链球菌主要对磺胺类药物和β-内酰胺类药物耐药。 展开更多

关键词 奶牛乳房炎 大肠埃希氏菌 无乳链球菌 分离鉴定 耐药性

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