牦牛水通道蛋白11基因克隆分析及其在不同发育阶段睾丸中的表达

1

作者 刘敏清 陈文东 +4 位作者 何玉鹏 苏满春 潘阳阳 崔燕 余四九 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第5期1-8,17,共9页

【目的】克隆牦牛(Bos grunniens)水通道蛋白11(Aquaporin-11,AQP11)的基因序列,研究AQP11在不同发育阶段牦牛睾丸组织中的表达水平。【方法】采集初生(出生3 d)、青年(1岁)、成年(4岁)和老年(8岁)牦牛睾丸样品,通过RT-PCR技术扩增得到A... 【目的】克隆牦牛(Bos grunniens)水通道蛋白11(Aquaporin-11,AQP11)的基因序列,研究AQP11在不同发育阶段牦牛睾丸组织中的表达水平。【方法】采集初生(出生3 d)、青年(1岁)、成年(4岁)和老年(8岁)牦牛睾丸样品,通过RT-PCR技术扩增得到AQP11基因的cDNA全长序列,对其进行生物信息学分析。采用qRT-PCR、Western blot方法对不同发育阶段牦牛睾丸中AQP11基因及蛋白的表达水平进行检测,采用免疫组织化学法对AQP11在不同发育阶段牦牛睾丸中的表达进行定位。【结果】成功克隆了牦牛AQP11基因cDNA全长序列,其长度为460 bp,共编码144个氨基酸。AQP11分子式:C_(710)H_(1135)N_(187)O_(191)S_(12),为稳定性蛋白,保守性较高。qRT-PCR结果显示,随着年龄的增长,AQP11基因在牦牛睾丸中的表达水平呈先上升后略下降并趋于平稳的趋势,在青年牦牛睾丸中的表达水平显著高于其他年龄组(P<0.05),其他年龄组间差异不显著(P>0.05)。Western blot结果显示,随着牦牛年龄的增长,AQP11蛋白表达水平也呈先上升后略下降并趋于平稳的趋势,在青年牦牛睾丸中的表达水平最高,在初生牦牛睾丸中的表达水平显著低于其他年龄组(P<0.05)。免疫组织化学试验结果显示,AQP11蛋白在睾丸中主要表达于精子、精子细胞、间质细胞、支持细胞和管周肌样细胞,各年龄段表达位置基本一致。【结论】克隆了牦牛AQP11基因cDNA全长序列,明确了其生物信息学特征。AQP11基因在青年牦牛睾丸中的表达水平显著高于其他年龄组(P<0.05),AQP11蛋白在青年牦牛中的表达水平显著高于初生牦牛(P<0.05)。推测AQP11在牦牛精子发育、成熟及膜的完整性方面发挥着重要作用。 展开更多

关键词 牦牛 睾丸 水通道蛋白11基因 繁殖能力 高寒牧区

在线阅读 下载PDF 职称材料

Oct 4在牦牛卵母细胞及早期胚胎发育过程中的表达 被引量：11

2

作者 赵天 李谷月 +5 位作者 潘阳阳 李月琴 陈平 温泽星 崔燕 余四九 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期577-584,共8页

旨在通过检测转录因子Oct 4(Octamer-binding transcription factor 4)在牦牛(Bos grunneins)卵母细胞成熟及早期胚胎发育过程中的表达,分析Oct 4在卵母细胞与体外受精胚胎发育过程中的作用。本研究收集牦牛卵丘-卵母细胞复合体(Cumulus... 旨在通过检测转录因子Oct 4(Octamer-binding transcription factor 4)在牦牛(Bos grunneins)卵母细胞成熟及早期胚胎发育过程中的表达,分析Oct 4在卵母细胞与体外受精胚胎发育过程中的作用。本研究收集牦牛卵丘-卵母细胞复合体(Cumulus-oocyte complexes,COCs)对其进行体外成熟培养,生产体外受精(In vitro fertilization,IVF)胚胎,评估各时期胚胎发育能力。采用实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和间接免疫荧光染色方法从基因和蛋白水平检测COCs和胚胎各时期Oct 4的表达与分布。结果表明,1)2~4-细胞胚胎、5~8-细胞胚胎、9~16-细胞胚胎和囊胚的发育率分别为(64.66±1.76)%、(43.33±1.76)%、(24.66±2.40)%和(9.33±0.67)%。2)COCs和胚胎各发育时期均可检测到Oct 4基因,其中9~16-细胞胚胎表达最高,依次为囊胚、2~4-细胞胚胎和5~8-细胞胚胎,未成熟COCs和成熟COCs中表达最低。3)免疫荧光染色结果显示,OCT 4蛋白主要分布在COCs和体外受精胚胎的细胞质中,在细胞核中表达较弱。免疫荧光IOD值分析可得,9~16-细胞胚胎IOD值最高,依次为囊胚、2~4-细胞胚胎,5~8-细胞胚胎最低。综上表明,Oct 4在牦牛卵母细胞和早期胚胎发育过程中的各个时期均有表达,且不同时期该基因的表达量存在差异。由此说明Oct 4在9~16-细胞胚胎时期可能参与胚胎合子型基因转录激活的调控过程,在囊胚时期可能参与维持内细胞团全能性的过程。 展开更多

关键词 OCT 4 牦牛 体外受精 胚胎发育

在线阅读 下载PDF 职称材料

EGF对牦牛冻精运动性能、细胞凋亡和IVF胚胎发育潜力的影响 被引量：7

3

作者 潘阳阳 王萌 +2 位作者 余四九 崔燕 何俊峰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期854-862,共9页

本研究旨在探明牦牛冻精体外获能过程中,EGF是否调控精子的细胞凋亡、运动性能及其对后续胚胎发育的影响。在牦牛冻精体外获能过程中,加入不同浓度EGF(0、50、75、100、150和200ng·mL-1),应用精子分析仪分析不同处理组精子活性;运... 本研究旨在探明牦牛冻精体外获能过程中,EGF是否调控精子的细胞凋亡、运动性能及其对后续胚胎发育的影响。在牦牛冻精体外获能过程中,加入不同浓度EGF(0、50、75、100、150和200ng·mL-1),应用精子分析仪分析不同处理组精子活性;运用qRT-RCR、Western blot检测Bax和Bcl-2的表达;评估IVF后受精胚的发育能力。结果表明:1)EGF可显著提高牦牛冻精运动性能、胚胎卵裂率(P<0.05),且这种调控具有一定的浓度依赖性。2)75~150ng·mL^(-1) EGF可以显著提高获能冻精Bcl-2基因和蛋白表达,降低Bax表达(P<0.05)。综上表明,牦牛冻精体外获能过程中,EGF不仅降低牦牛冷冻精子的细胞凋亡和提高牦牛精子运动性能,而且能够提高IVF后胚胎发育潜力,且其最佳作用浓度为75~150ng·mL^(-1)。本研究为通过生长因子作用提高牦牛体外胚胎生产提供重要参考信息。 展开更多

关键词 EGF 牦牛 精子 胚胎 细胞凋亡

在线阅读 下载PDF 职称材料

HSP27基因在牦牛卵母细胞和体外早期胚胎中的表达 被引量：3

4

作者 刘敏清 何翃闳 +5 位作者 潘阳阳 张慧珠 王亚营 杨珊珊 崔燕 余四九 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期2716-2723,共8页

为了探讨牦牛HSP27(heat shock proteins27,HSP27)基因在牦牛卵母细胞和早期孤雌激活胚胎中的表达情况及定位,本试验通过实时荧光定量PCR检测牦牛HSP27基因在未成熟卵母细胞和成熟卵母细胞以及孤雌激活不同时期胚胎中的相对表达量,用免... 为了探讨牦牛HSP27(heat shock proteins27,HSP27)基因在牦牛卵母细胞和早期孤雌激活胚胎中的表达情况及定位,本试验通过实时荧光定量PCR检测牦牛HSP27基因在未成熟卵母细胞和成熟卵母细胞以及孤雌激活不同时期胚胎中的相对表达量,用免疫荧光染色法检测HSP27蛋白在未成熟卵母细胞和成熟卵母细胞以及孤雌激活不同时期胚胎中的表达与定位情况。结果显示,HSP27基因在牦牛未成熟卵母细胞和成熟卵母细胞以及体外培养孤雌激活不同时期胚胎中均可表达,其中在未成熟卵母细胞中的表达量显著高于成熟卵母细胞;在孤雌激活胚胎中,2~4细胞期表达量最高,囊胚期胚胎表达量最低,随着胚胎的发育,HSP27的表达量呈现逐渐降低的趋势;在2~4细胞期和囊胚期胚胎中的表达与其他组表达存在显著差异性,在5~8细胞期和桑椹胚中的表达无显著差异。免疫荧光染色结果表明,HSP27蛋白在牦牛卵丘细胞和卵母细胞中均有表达,在牦牛孤雌激活2~4细胞期、5~8细胞期和桑椹期胚胎中主要表达于细胞核内和细胞质中,在囊胚期主要表达于细胞核中;而HSP27蛋白的表达水平与基因表达水平基本一致。本研究为后续研究HSP27基因在牦牛生殖生理过程中的作用机制提供了参考。 展开更多

关键词 HSP27 牦牛 卵母细胞 孤雌激活 胚胎

在线阅读 下载PDF 职称材料

TNF-α对牦牛卵母细胞HIF-1α和HSP70的表达及后续胚胎发育能力的影响 被引量：2

5

作者 许涛 潘阳阳 +5 位作者 何翃闳 李谷月 张慧珠 赵凌 崔燕 余四九 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1198-1207,共10页

旨在研究肿瘤坏死因子(TNF-α)对牦牛卵母细胞体外成熟和对低氧诱导因子1α(HIF-1α)、热休克蛋白70(HSP70)的表达以及后续胚胎发育能力的影响。在牦牛卵母细胞体外成熟培养液中添加不同浓度的TNF-α(最终浓度分别为0、10、25、50 ng
... 旨在研究肿瘤坏死因子(TNF-α)对牦牛卵母细胞体外成熟和对低氧诱导因子1α(HIF-1α)、热休克蛋白70(HSP70)的表达以及后续胚胎发育能力的影响。在牦牛卵母细胞体外成熟培养液中添加不同浓度的TNF-α(最终浓度分别为0、10、25、50 ng·mL^-1),牦牛卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes,COCs)培养成熟后,统计其卵母细胞成熟率及体外受精后早期胚胎的发育率,采用RT-PCR扩增牦牛 HIF-1α、 HSP 70基因,采用实时荧光定量PCR(qRT-RCR)、蛋白免疫印迹法(Western blotting)和免疫荧光染色技术检测HIF-1α、HSP70在基因和蛋白水平的表达情况。结果发现:1)成熟液中加入TNF-α,卵母细胞的成熟率提高,且随着TNF-α浓度的升高,卵母细胞的成熟率、卵裂率和囊胚率逐渐升高,当TNF-α浓度为 25 ng·mL^-1 时,卵母细胞的成熟率和卵裂率达到最高,分别为84.98%和66.85%,而囊胚率也达到了21.48%,均显著高于对照组( P <0.05);2)随着TNF-α浓度的升高, HIF-1α的表达量逐渐降低,对照组 HIF-1α的表达量极显著高于其他组(P <0.01),50 ng·mL^-1 TNF-α组 HIF-1α的表达量极显著低于其他组(P <0.01),HIF-1α在卵丘细胞和卵母细胞上均有表达;3)25 ng·mL^-1 TNF-α组的HSP 70表达量最高,极显著高于其他组(P <0.01),而当TNF-α达到50 ng·mL^-1 时,HSP 70的表达量最低。综上表明,在牦牛卵母细胞体外成熟过程中,TNF-α明显提高了卵母细胞的发育能力,同时还诱导了HSP 70的表达,抑制了HIF-1α的表达,为今后探讨TNF-α、 HIF-1α和HSP70在牦牛生殖过程中发挥的作用以及对胚胎发育的影响提供理论依据。 展开更多

关键词 牦牛 卵母细胞 肿瘤坏死因子(TNF-α) 低氧诱导因子1α(HIF-1α) 热休克蛋白70(HSP70) 表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

IL-1β及其受体在雌牦牛主要生殖器官和孤雌激活胚胎中的表达定位 被引量：3

6

作者 王靖雷 王萌 +7 位作者 潘阳阳 李秦 何翃闳 黄玉风 赵凌 樊江峰 崔燕 余四九 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1395-1404,共10页

为探索正常生理条件下IL-1β和IL1R1参与雌性牦牛生殖调控及早期胚胎发育的生物学作用,试验采集雌性牦牛主要生殖器官(卵泡期:输卵管、卵巢、子宫;黄体期:输卵管、卵巢、子宫;妊娠期:输卵管、卵巢、子宫),并生产孤雌激活胚胎。实时荧光... 为探索正常生理条件下IL-1β和IL1R1参与雌性牦牛生殖调控及早期胚胎发育的生物学作用,试验采集雌性牦牛主要生殖器官(卵泡期:输卵管、卵巢、子宫;黄体期:输卵管、卵巢、子宫;妊娠期:输卵管、卵巢、子宫),并生产孤雌激活胚胎。实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测IL-1β和IL1R1 mRNA在组织和胚胎发育过程中的表达;并采用蛋白质免疫印迹(Western-blot,WB)和免疫组织化学方法从蛋白水平分析IL-1β和IL1R1在各生殖器官的表达水平与定位。结果显示IL-1β和IL1R1在牦牛主要生殖器官和孤雌激活胚胎中均有表达。其中卵泡期输卵管中IL-1β和IL1R1表达均高于黄体期和妊娠期,卵泡期卵巢和妊娠期卵巢中IL-1β和IL1R1的表达高于黄体期,妊娠期子宫中IL-1β和IL1R1的表达高于卵泡期和黄体期,孤雌激活胚胎中IL-1β和IL1R1的表达桑椹胚最高,8细胞次之,2细胞和囊胚期最低。免疫组织化学结果显示IL-1β和IL1R1在输卵管黏膜上皮、卵泡颗粒层、黄体细胞、子宫上皮和子宫腺体均有表达。研究结果表明IL-1β和IL1R1参与牦牛生殖周期和胚胎发育的调控作用,为进一步探究IL-1β和IL1R1的作用机制提供了理论基础,有助于牦牛胚胎体外培养技术的改进。 展开更多

关键词 牦牛 IL-1Β IL1R1 孤雌胚胎

在线阅读 下载PDF 职称材料

整合素β3在牦牛繁殖周期各阶段输卵管不同部位中的表达研究 被引量：2

7

作者 钟董兰 何翃闳 +5 位作者 潘阳阳 杨珊珊 王军乾 杨贻 余四九 徐庚全 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期2535-2541,共7页

整合素β3作为整合素超家族的一员,在早期胚胎发育和胚胎附植中发挥着重要作用。为探究牦牛繁殖周期各阶段输卵管不同部位中整合素β3的表达情况,本研究采集繁殖周期不同阶段(卵泡期、黄体期和妊娠期)雌性牦牛的输卵管组织,按照输卵管... 整合素β3作为整合素超家族的一员,在早期胚胎发育和胚胎附植中发挥着重要作用。为探究牦牛繁殖周期各阶段输卵管不同部位中整合素β3的表达情况,本研究采集繁殖周期不同阶段(卵泡期、黄体期和妊娠期)雌性牦牛的输卵管组织,按照输卵管不同部位(峡部、壶腹部和漏斗部)将试验材料分为九组,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(WB)检测整合素β3基因和蛋白在繁殖周期各阶段输卵管不同部位中的表达水平,运用免疫组织化学法对整合素β3进行定位。结果显示,在繁殖周期各阶段中,输卵管峡部的整合素β3表达量均显著高于壶腹部和漏斗部。在峡部中,整合素β3的表达量在妊娠期最高,黄体期最低;而在壶腹部和漏斗部中,整合素β3的表达量在卵泡期最高。免疫组织化学结果显示,整合素β3主要分布于牦牛输卵管的肌层、浆液腺、基细胞、黏膜上皮的分泌细胞、纤毛细胞中。综上所述,整合素β3在牦牛繁殖周期各阶段输卵管的不同部位均有表达,且存在表达差异,由此推测整合素β3对牦牛受精以及早期胚胎的发育发挥着重要作用。本研究结果为进一步探索整合素β3对牦牛生殖繁育的作用提供了理论依据。 展开更多

关键词 整合素Β3 输卵管 繁殖周期 表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

表皮生长因子对牦牛卵丘细胞低氧诱导因子-1α表达的影响及与凋亡的关联性分析 被引量：5

8

作者 张译夫 潘阳阳 +1 位作者 温泽星 余四九 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1154-1161,共8页

旨在研究EGF是否通过调控HIF-1α抑制牦牛卵丘细胞凋亡。本研究在牦牛卵丘细胞体外培养时加入不同浓度的EGF,运用qRT-PCR和免疫荧光技术检测HIF-1α、Bcl-2和Bax的表达,用一步法TUNEL检测不同处理组卵丘细胞的凋亡情况。结果表明:(1)牦... 旨在研究EGF是否通过调控HIF-1α抑制牦牛卵丘细胞凋亡。本研究在牦牛卵丘细胞体外培养时加入不同浓度的EGF,运用qRT-PCR和免疫荧光技术检测HIF-1α、Bcl-2和Bax的表达,用一步法TUNEL检测不同处理组卵丘细胞的凋亡情况。结果表明:(1)牦牛卵丘细胞体外培养液中添加不同浓度的EGF后,卵丘细胞HIF-1α和Bax mRNA的相对表达量降低,Bcl-2 mRNA的相对表达量增加,且具有浓度依赖性;当EGF浓度为50ng·mL^(-1)时,HIF-1α和Bax mRNA的相对表达量最低,Bcl-2mRNA的相对表达量最高。(2)向其体外培养液中添加不同浓度的EGF后,卵丘细胞HIF-1α和Bax蛋白的相对表达量降低,Bcl-2蛋白的相对表达量增加,且具有浓度依赖性;当EGF浓度为50ng·mL^(-1)时,HIF-1α和Bax蛋白的相对表达量最低,Bcl-2蛋白的相对表达量最高。(3)TUNEL凋亡检测表明,对照组中卵丘细胞凋亡率最高,当EGF浓度为25ng·mL^(-1)时,细胞凋亡率显著降低(P<0.05);当EGF浓度为50ng·mL^(-1)时,细胞凋亡率最低(P<0.05),但随着EGF浓度的增加,卵丘细胞的凋亡率又升高。本研究结果表明,EGF可通过调控HIF-1α抑制卵丘细胞凋亡,其作用可能与线粒体介导的Bax和Bcl-2凋亡途径相关。 展开更多

关键词 表皮生长因子(EGF) 低氧诱导因子-1α(HIF-1α) 凋亡 卵丘细胞 牦牛

在线阅读 下载PDF 职称材料

肺离子细胞相关蛋白ATP6V0D2在不同年龄牦牛肺内分布和表达 被引量：1

9

作者 魏雅婷 崔燕 +1 位作者 张倩 何俊峰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期1765-1768,共4页

本研究旨在揭示肺离子细胞相关蛋白ATP6V0D2在不同年龄组牦牛肺中的分布和表达特点,探索ATP6V0D2在牦牛肺适应高原低氧环境中的结构形成和可能调控作用。利用免疫组织化学,qRT-PCR和Western blot对初生、幼年、成年和老年4个年龄组牦牛... 本研究旨在揭示肺离子细胞相关蛋白ATP6V0D2在不同年龄组牦牛肺中的分布和表达特点,探索ATP6V0D2在牦牛肺适应高原低氧环境中的结构形成和可能调控作用。利用免疫组织化学,qRT-PCR和Western blot对初生、幼年、成年和老年4个年龄组牦牛肺中ATP6V0D2的准确分布位置及相对表达量进行研究。结果显示,ATP6V0D2主要分布在肺内支气管及其分支的管壁上皮黏膜层的纤毛细胞和克拉拉细胞中;在成年组和老年组呈强阳性表达,ATP 6V0D2在不同年龄组牦牛肺中均有不同程度的表达,以初生组表达量最高,与其他3组相比较,差异性显著(P<0.05)。在蛋白水平上,ATP6V0D2在成年组中的表达量显著高于其他3组(P<0.05);初生组、幼年组、老年组两两相比较,差异性均显著(P<0.05)。ATP6V0D2在不同年龄牦牛肺细支气管上皮细胞中均有表达,但不同年龄组间的表达存在显著差异(P<0.05)。肺离子细胞相关蛋白ATP6V0D2表达量的不同与牦牛肺对低氧环境的适应性过程有关,纤毛细胞和克拉拉细胞与肺离子细胞的功能具有相关性,在牦牛肺适应高原低氧环境、防止气道损伤或修复过程方面发挥重要作用。 展开更多

关键词 牦牛 肺 肺离子细胞 ATP6V0D2

在线阅读 下载PDF 职称材料

FSH对牦牛卵母细胞EGF、EGFR表达及其细胞凋亡的影响 被引量：11

10

作者 何翃闳 潘阳阳 +5 位作者 张慧珠 李秦 王萌 崔燕 樊江峰 余四九 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期1899-1907,共9页

旨在研究促卵泡素(FSH)对牦牛卵母细胞体外成熟,以及对表皮生长因子(EGF)、表皮生长因子受体(EGFR)的表达影响和与细胞凋亡的关系。在牦牛卵母细胞体外成熟培养液中添加不同浓度FSH(终浓度分别为0、2、5、10μg·mL^(-1)),体外成熟... 旨在研究促卵泡素(FSH)对牦牛卵母细胞体外成熟,以及对表皮生长因子(EGF)、表皮生长因子受体(EGFR)的表达影响和与细胞凋亡的关系。在牦牛卵母细胞体外成熟培养液中添加不同浓度FSH(终浓度分别为0、2、5、10μg·mL^(-1)),体外成熟培养后,运用实时荧光定量PCR(qRT-RCR)和免疫荧光染色技术检测EGF、EGFR表达情况,采用qRT-RCR和蛋白免疫印迹法检测Bax、Bcl-2表达变化。结果表明:1)成熟培养液中加入FSH可提高COCs成熟率,当成熟液中FSH为5μg·mL^(-1)时,成熟率最高,达到76.84%,显著高于其他组(P<0.05);2)随着FSH浓度的增加,EGF和EGFR表达逐渐升高,其中在5μg·mL^(-1) FSH组中,EGF和EGFR的表达最高,显著高于其他组(P<0.05),而在10μg·mL^(-1)FSH组中,EGF和EGFR的表达水平降低;EGF主要位于卵丘细胞中,而EGFR在卵丘细胞和卵母细胞均有表达;3)随着FSH浓度的增加,Bax和Bcl-2的表达显示出明显的逆向模式,Bax的表达水平逐渐降低,Bcl-2的表达水平逐渐升高,在5μg·mL^(-1) FSH组中Bax的表达量最低,Bcl-2的表达量最高,而在10μg·mL^(-1)FSH组中,Bax的表达水平升高。综上表明,在牦牛卵母细胞体外成熟过程中,FSH提高了卵母细胞发育能力,诱导EGF和EGFR表达,而且可能通过调控Bax、Bcl-2等凋亡相关因子的表达,抑制卵母细胞凋亡。 展开更多

关键词 牦牛 卵母细胞 促卵泡素 表皮生长因子(EGF) 表皮生长因子受体(EGFR) 细胞凋亡

在线阅读 下载PDF 职称材料

整合素αv在牦牛繁殖周期输卵管不同部位中的表达与定位 被引量：5

11

作者 杨珊珊 何翃闳 +8 位作者 潘阳阳 段宏伟 刘敏清 高泽川 赵凌 韩小红 王亚营 崔燕 余四九 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期2710-2719,共10页

旨在探究整合素αv在牦牛繁殖周期输卵管不同部位的表达差异,为进一步了解整合素αv在牦牛生殖过程中发挥的作用提供理论依据。本研究采集卵泡期、黄体期和妊娠期健康母牦牛(3~6岁)的输卵管伞部、壶腹部和峡部样品,将卵泡期、黄体期和... 旨在探究整合素αv在牦牛繁殖周期输卵管不同部位的表达差异,为进一步了解整合素αv在牦牛生殖过程中发挥的作用提供理论依据。本研究采集卵泡期、黄体期和妊娠期健康母牦牛(3~6岁)的输卵管伞部、壶腹部和峡部样品,将卵泡期、黄体期和妊娠期输卵管分别按照伞部、壶腹部和峡部分为9组,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western-blotting,WB)检测整合素αv基因和蛋白的表达情况,运用免疫组织化学法检测整合素αv的定位。结果表明:1)qRT-PCR结果显示,在卵泡期,整合素αv基因在输卵管伞部的表达量最高,极显著高于壶腹部和峡部(P<0.01);在黄体期,整合素αv基因在输卵管峡部的表达量最高,极显著高于伞部和壶腹部(P<0.01);在妊娠期,整合素αv基因在输卵管伞部的表达量最高,极显著高于壶腹部和峡部(P<0.01)。2)Western-blotting结果显示,在卵泡期,整合素αv蛋白在输卵管伞部的表达量最高,极显著高于壶腹部和峡部(P<0.01);在黄体期,整合素αv蛋白在输卵管峡部的表达量最高,极显著高于伞部和壶腹部(P<0.01);在妊娠期,整合素αv蛋白在输卵管峡部和伞部的表达差异不显著,但二者极显著高于壶腹部(P<0.01)。3)免疫组织化学结果显示,整合素αv主要分布于输卵管伞部、壶腹部和峡部的纤毛细胞、分泌细胞、基细胞、肌层和浆液腺中。结果显示,整合素αv在牦牛繁殖周期输卵管不同部位中的表达存在显著差异,说明其可能参与了牦牛受精及早期胚胎发育等一系列生殖过程,为牦牛的繁殖性能研究提供了基础资料。 展开更多

关键词 整合素ΑV 牦牛 输卵管 繁殖周期 表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

牦牛TGF-β1基因克隆及在雌性生殖系统主要器官中的表达定位 被引量：6

12

作者 王楠 张瑞 +4 位作者 潘阳阳 何翃宏 王靖雷 崔燕 余四九 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期279-290,共12页

转化生长因子β1(transforming growth factor beta1,TGF-β1)是一种多功能的生长与分化因子,广泛调控机体的多个生理病理过程,具有重要的生物学功能和广阔的应用前景。试验采集牦牛发情期和妊娠期卵巢、输卵管和子宫组织,克隆牦牛TGF-... 转化生长因子β1(transforming growth factor beta1,TGF-β1)是一种多功能的生长与分化因子,广泛调控机体的多个生理病理过程,具有重要的生物学功能和广阔的应用前景。试验采集牦牛发情期和妊娠期卵巢、输卵管和子宫组织,克隆牦牛TGF-β1基因,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)、蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)等方法,对牦牛TGF-β1在基因和蛋白水平上进行定量分析。结果显示,牦牛TGF-β1基因(GenBank No.MZ004937)高度保守,牦牛TGF-β1核苷酸序列与普通牛(Bos taurus)序列相比,存在差异,所编码氨基酸由丙氨酸突变为甘氨酸。与普通牛(Bos taurus)、瘤牛×普通牛(Bos indicus×Bos taurus)亲缘关系最近,与犬(Canine)亲缘关系最远,其编码的蛋白为稳定的亲水性膜蛋白。牦牛TGF-β1在卵泡期、黄体期、妊娠期的卵巢、输卵管和子宫组织中均有表达,在卵巢中,妊娠期的表达量显著高于卵泡期和黄体期(P<0.05);在输卵管中,TGF-β1基因妊娠期表达量极显著高于卵泡期和黄体期(P<0.01);在子宫中,卵泡期和妊娠期表达显著高于黄体期(P<0.05)。IHC结果显示,牦牛TGF-β1主要在卵巢生殖上皮、卵泡膜、卵泡颗粒层、黄体细胞、输卵管黏膜上皮细胞、子宫腺(UG)和子宫内膜细胞中表达。研究结果为进一步探索TGF-β1参与牦牛生殖生理的分子机制提供基础数据,以期为探讨高原哺乳动物对高寒环境的适应性提供理论依据。 展开更多

关键词 牦牛 TGF-Β1 基因克隆 生物信息学分析 表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

雌性牦牛主要生殖器官中DBI的表达与定位分析 被引量：4

13

作者 王强龙 潘阳阳 +7 位作者 闫翠霞 张同享 何翃闳 崔燕 徐庚全 王立斌 樊江峰 余四九 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期169-178,共10页

为加深对DBI基因功能的探究,揭示其在牦牛生殖生理过程中的作用。本试验采集健康母牦牛(3~6岁)繁殖周期不同阶段(卵泡期、黄体期和妊娠期)的卵巢、输卵管和子宫组织,共分为9组,每组设置3个生物学重复。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和... 为加深对DBI基因功能的探究,揭示其在牦牛生殖生理过程中的作用。本试验采集健康母牦牛(3~6岁)繁殖周期不同阶段(卵泡期、黄体期和妊娠期)的卵巢、输卵管和子宫组织,共分为9组,每组设置3个生物学重复。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹技术(Western blotting,WB)检测牦牛DBI在繁殖周期不同阶段雌性牦牛生殖器官中的相对表达量;通过免疫组织化学方法(immunohistochemistry,IHC)定位DBI蛋白在雌性牦牛卵巢、输卵管和子宫中的分布情况。结果表明:1)qRT-PCR结果显示,在卵巢中,DBI在黄体期和妊娠期的表达量显著高于卵泡期(P<0.05);在输卵管中,DBI在黄体期表达量显著高于卵泡期和妊娠期(P<0.05);在子宫中,DBI在妊娠期表达量最高,黄体期次之,卵泡期最低。2)Western blotting结果表明,在卵巢中,DBI在妊娠期的水平显著高于卵泡期和黄体期(P<0.05);在输卵管中,DBI在黄体期水平显著高于卵泡期和妊娠期(P<0.05);在子宫中,DBI在妊娠期水平明显高于黄体期和卵泡期(P<0.05)。3)IHC结果显示,DBI主要位于生殖上皮细胞、颗粒细胞、卵泡膜细胞、黄体细胞、输卵管上皮细胞、子宫基质细胞和子宫腺中。DBI在牦牛繁殖周期不同阶段的卵巢、输卵管和子宫组织中的表达量存在显著差异,说明其参与牦牛生殖生理调控,为进一步挖掘DBI基因在高原哺乳动物生殖方面的研究奠定相应的理论基础。 展开更多

关键词 牦牛 DBI 卵巢 输卵管 子宫 表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

牦牛FAF1基因的分子特征及其在不同阶段卵巢、输卵管、子宫中的表达 被引量：6

14

作者 王静瑜 王萌 +8 位作者 潘阳阳 王靖雷 张瑞 马睿 胡学权 仇晓飞 崔燕 余四九 徐庚全 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期80-89,共10页

FAF1(Fas-associated factor-1)在多种细胞中可与Fas蛋白结合,介导细胞凋亡的启动,其基因突变可导致分裂期胚胎死亡。旨在探索牦牛FAF1基因的分子特征及其在不同阶段的生物学作用。试验选取雌性牦牛3个不同时期(卵泡期、黄体期和妊娠期... FAF1(Fas-associated factor-1)在多种细胞中可与Fas蛋白结合,介导细胞凋亡的启动,其基因突变可导致分裂期胚胎死亡。旨在探索牦牛FAF1基因的分子特征及其在不同阶段的生物学作用。试验选取雌性牦牛3个不同时期(卵泡期、黄体期和妊娠期第3个月,以下将妊娠期第3个月简称为妊娠期)的卵巢、输卵管和子宫,克隆牦牛FAF1基因,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、免疫组织化学和Western blot(WB)方法对其基因和蛋白的表达水平进行检测和定位。成功克隆出牦牛FAF1基因的编码区(CDS),长度为1953 bp(GenBank登录号:MK416195),编码650个氨基酸,基因特征分析显示该基因具有高度保守性,其编码的蛋白为含5个蛋白结合位点的非跨膜、可溶性蛋白,主要分布于细胞核(52.2%)、线粒体(26.1%)、细胞质(13.0%)、高尔基体(4.3%)、细胞骨架(4.3%)。qRT-PCR结果显示:卵巢中FAF1基因在卵泡期表达最高,妊娠期次之,黄体期最低;输卵管中黄体期最高,子宫中卵泡期最高,妊娠期次之,黄体期最低;蛋白水平显示:妊娠期输卵管和子宫FAF1蛋白相对表达量显著高于卵泡期和黄体期,卵巢在黄体期的表达量最高,卵泡期次之,妊娠期最低。免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)结果显示不同阶段FAF1蛋白在同一组织中表达部位并无明显的差异,在卵巢中主要表达部位为卵巢生殖上皮、颗粒细胞、卵泡膜细胞和黄体细胞(黄体期);在输卵管中主要表达部位为黏膜上皮细胞;在子宫中主要表达部位为子宫内膜细胞、子宫腺。FAF1基因和蛋白的表达存在显著差异,揭示其对牦牛的生殖生理调控具有重要意义。 展开更多

关键词 FAF1 生殖 生物信息学分析 表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

Enpp2基因的分子特征及其在雌性牦牛不同繁殖阶段生殖器官中的表达 被引量：6

15

作者 马文斌 王萌 +7 位作者 潘阳阳 王靖雷 张燕燕 高丽青 张晖 王军乾 余四九 王立斌 《动物医学进展》 北大核心 2022年第1期58-64,共7页

为了探讨胞外焦磷酸酶/磷酸酯酶2(Enpp2)基因在母牦牛不同繁殖阶段生殖器官中的表达与定位,对Enpp2基因进行克隆,并利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白质免疫印迹(Western blot)和免疫组织化学法检测ENPP2在母牦牛生殖器官中的表达与... 为了探讨胞外焦磷酸酶/磷酸酯酶2(Enpp2)基因在母牦牛不同繁殖阶段生殖器官中的表达与定位,对Enpp2基因进行克隆,并利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白质免疫印迹(Western blot)和免疫组织化学法检测ENPP2在母牦牛生殖器官中的表达与定位。结果显示,Enpp2基因ORF全长2669 bp,共编码875个氨基酸,表现为高度保守且种属间存在差异性;ENPP2蛋白是一种不稳定的可溶性蛋白,有信号肽。ENPP2在雌性牦牛生殖器官均有表达,其中在卵巢上,妊娠期的相对表达量显著高于卵泡期和黄体期(P<0.05);在输卵管上,黄体期最高,妊娠期最低(P<0.05);在子宫上,妊娠期显著低于卵泡期和黄体期(P<0.05)。免疫组化结果显示,ENPP2主要定位在黄体细胞、卵泡膜和卵泡颗粒层、输卵管黏膜上皮以及子宫内膜和子宫腺上。研究结果可为探究牦牛生殖生理提供理论基础。 展开更多

关键词 牦牛 ENPP2 卵巢 输卵管 子宫

在线阅读 下载PDF 职称材料

E-cadherin在牦牛不同繁殖周期输卵管不同部位中的表达与定位 被引量：4

16

作者 杨珊珊 何翃闳 +5 位作者 刘敏清 赵凌 王靖雷 余四九 蔡得琪 潘阳阳 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期57-65,共9页

为研究上皮钙粘蛋白(E-cadherin)在不同繁殖周期牦牛输卵管不同部位中的表达差异,本研究采集卵泡期、黄体期和妊娠期无临床病理表现的母牦牛(3~6岁)输卵管伞部、壶腹部和峡部的样品,将不同繁殖周期输卵管分别按照伞部、壶腹部和峡部分为... 为研究上皮钙粘蛋白(E-cadherin)在不同繁殖周期牦牛输卵管不同部位中的表达差异,本研究采集卵泡期、黄体期和妊娠期无临床病理表现的母牦牛(3~6岁)输卵管伞部、壶腹部和峡部的样品,将不同繁殖周期输卵管分别按照伞部、壶腹部和峡部分为9组,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(western-blotting)检测E-cadherin基因和蛋白在不同时期牦牛输卵管不同部位中的表达情况,运用免疫组织化学法检测E-cadherin在不同时期牦牛输卵管不同部位中的定位。结果显示,在卵泡期,E-cadherin基因和蛋白在输卵管壶腹部的表达量最高,显著高于伞部和峡部;在黄体期,E-cadherin基因和蛋白在输卵管峡部的表达量最高,显著高于伞部和壶腹部;在妊娠期,E-cadherin基因在输卵管壶腹部的表达量最高,显著高于伞部和峡部,而E-cadherin蛋白在输卵管壶腹部的表达量最高,显著高于伞部。在输卵管伞部,E-cadherin基因在黄体期的表达量最高,显著高于卵泡期和妊娠期,而E-cadherin蛋白在卵泡期的表达量最高,显著高于黄体期和妊娠期;在输卵管壶腹部,E-cadherin基因和蛋白在妊娠期的表达量最高,显著高于卵泡期和黄体期;在输卵管峡部,E-cadherin基因和蛋白在黄体期的表达量最高,显著高于卵泡期和妊娠期。免疫组织化学结果显示,E-cadherin主要分布于输卵管伞部、壶腹部和峡部的纤毛细胞、分泌细胞、基细胞、肌层和浆液腺等部位。E-cadherin在牦牛繁殖周期输卵管不同部位中的均有表达,且其基因和蛋白的表达存在显著差异,说明E-cadherin可能参与了牦牛卵母细胞的生长和成熟、精子储存和获能、受精及早期胚胎发育等一系列生殖过程。本研究为进一步明确E-cadherin对牦牛繁殖性能的生物学作用提供了基础资料。 展开更多

关键词 上皮钙粘蛋白 牦牛 输卵管 繁殖周期 表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

牦牛EPF的原核表达及多克隆抗体制备 被引量：3

17

作者 曹艳桃 樊江峰 +5 位作者 余四九 周应聪 杜培岩 李一娟 马进彪 赵生贤 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期470-480,共11页

本试验旨在制备牦牛早孕因子(early pregnancy factor,EPF)多克隆抗体,为牦牛妊娠早期高效快速诊断技术研究奠定基础。采用RT-PCR方法,从牦牛胎盘和卵巢组织中提取RNA,反转录为模板后进行EPF基因扩增,并将其克隆到改造后的载体pET28-His... 本试验旨在制备牦牛早孕因子(early pregnancy factor,EPF)多克隆抗体,为牦牛妊娠早期高效快速诊断技术研究奠定基础。采用RT-PCR方法,从牦牛胎盘和卵巢组织中提取RNA,反转录为模板后进行EPF基因扩增,并将其克隆到改造后的载体pET28-His10-Sumo上,构建pET28-His10-Sumo-EPF重组质粒,经PCR和测序鉴定后将阳性重组质粒转化至感受态大肠杆菌BL21(DE3)中。用IPTG诱导表达并优化表达条件,使用His标签镍柱纯化重组EPF蛋白并免疫小鼠制备抗体。结果显示,经PCR扩增的牦牛EPF基因在300 bp左右,符合预期结果,并通过测序验证获得重组阳性质粒。pET28-His10-Sumo-EPF重组质粒转化后经IPTG的诱导,表达分子质量大小为29 ku的蛋白(其中包括早孕因子目标蛋白和SUMO标签蛋白),且在37℃、IPTG浓度为300 nmol·L^(-1)、诱导6 h时获得最高表达量。Western blot结果显示,蛋白在上清和包涵体中均有表达,免疫后的小鼠抗血清能够与纯化后的重组蛋白发生免疫反应。本试验通过原核表达系统成功表达了重组牦牛EPF蛋白,制备了免疫原性较好的鼠抗EPF多克隆抗体。 展开更多

关键词 牦牛 早孕因子(EPF) 原核表达 多克隆抗体

在线阅读 下载PDF 职称材料

大肠杆菌对藏羊子宫内膜上皮细胞相关炎性因子表达的影响 被引量：3

18

作者 张兴云 王萌 +5 位作者 潘阳阳 胡学权 韩金辉 余四九 徐庚全 王立斌 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期280-290,共11页

为了探究大肠杆菌(Escherichia coli)对藏羊子宫内膜上皮细胞(EECs)相关炎性因子表达的影响,本研究采用组织块贴壁法和酶消化法培养藏羊EECs;用不同感染复数(MOI)进行E.coli感染试验,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及酶联免疫(ELISA)技术... 为了探究大肠杆菌(Escherichia coli)对藏羊子宫内膜上皮细胞(EECs)相关炎性因子表达的影响,本研究采用组织块贴壁法和酶消化法培养藏羊EECs;用不同感染复数(MOI)进行E.coli感染试验,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及酶联免疫(ELISA)技术,分析白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)等炎性因子的RNA和蛋白表达水平。结果表明,培养液中加入50 ng·mL^(-1)表皮生长因子(EGF)能成功培养出藏羊EECs,纯度达到98%以上;E.coli感染试验中,当MOI为1∶1时,IL-1β、IL-6和IL-8基因和蛋白的表达量与对照组相比差异不显著,而TNF-α表达量显著升高(P<0.05);当MOI为20∶1时,IL-8基因和蛋白的表达量显著升高(P<0.05);当MOI为50∶1时,IL-1β、IL-6基因和蛋白的表达量显著升高(P<0.05),而TNF-α表达量与对照组差异不显著(P>0.05)。结果表明,酶消化法可成功培养藏羊EECs;不同MOI E.coli感染后,藏羊EECs中IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α等炎性因子的表达量较对照组均显著升高(P<0.05),它们可作为识别子宫内膜炎病理变化程度的指标。本研究结果为预防子宫内膜炎、提高藏羊的生产性能以及生态养殖提供了理论依据。 展开更多

关键词 藏羊 E.COLI 子宫内膜炎 EECs 炎性因子

在线阅读 下载PDF 职称材料

溶血磷脂酸受体1-3在牦牛不同时期卵巢中表达定位 被引量：3

19

作者 张燕燕 王靖雷 +6 位作者 潘阳阳 马文斌 高丽青 张辉 李心蕊 余四九 徐庚全 《动物医学进展》 北大核心 2021年第9期35-42,共8页

为探究正常生理下条件下溶血磷脂酸受体(LPAR)1-3在牦牛不同时期卵巢(卵泡期、黄体期、妊娠期)表达及生物学作用,利用RT-qPCR检测LPAR1-3基因在不同时期卵巢上的表达,同时利用蛋白质免疫印迹、免疫组织化学(IHC)等方法对LPAR1-3基因和... 为探究正常生理下条件下溶血磷脂酸受体(LPAR)1-3在牦牛不同时期卵巢(卵泡期、黄体期、妊娠期)表达及生物学作用,利用RT-qPCR检测LPAR1-3基因在不同时期卵巢上的表达,同时利用蛋白质免疫印迹、免疫组织化学(IHC)等方法对LPAR1-3基因和蛋白的表达进行分析和定位。结果显示,LPAR1-3在牦牛不同时期卵巢上均有表达,其中LPAR1-3的表达量在妊娠期显著高于卵泡期和黄体期(P<0.05),卵泡期表达量最低;在卵泡期、黄体期、妊娠期LPAR3的表达量均显著高于LPAR1和LPAR2(P<0.05),LPAR2的表达量最低;IHC结果显示,LPAR1-3在卵巢生殖上皮、颗粒细胞、卵泡液、卵泡膜和黄体细胞均有表达。研究结果提示LPAR1-3可能在卵泡生长、发育、排卵以及维持妊娠等一系列生殖过程中发挥重要的作用,其中LPAR3可能在这一过程中起主要作用,该结果有助于对牦牛繁殖机能的进一步研究,可为高原哺乳动物生殖生理的研究提供理论依据。 展开更多

关键词 牦牛 溶血磷脂酸受体-1 溶血磷脂酸受体-2 溶血磷脂酸受体-3 卵巢

在线阅读 下载PDF 职称材料

Mfn2在不同繁殖生理时期牦牛卵巢和输卵管中的表达及定位 被引量：2

20

作者 张博宁 张同享 +10 位作者 何翃闳 王彪 任钰昕 张鉴 潘阳阳 王立斌 王强龙 闫翠霞 崔燕 余四九 徐庚全 《动物医学进展》 北大核心 2022年第8期60-64,共5页

为探索线粒体融合蛋白2(Mfn2)在不同繁殖生理时期牦牛卵巢和输卵管中的表达情况与分布特征,选取处于不同繁殖生理时期健康牦牛15头,分为3组,每组5头,屠宰后采集处于卵泡期、黄体期和妊娠期牦牛的卵巢和输卵管组织样品,分为6个组,分别提... 为探索线粒体融合蛋白2(Mfn2)在不同繁殖生理时期牦牛卵巢和输卵管中的表达情况与分布特征,选取处于不同繁殖生理时期健康牦牛15头,分为3组,每组5头,屠宰后采集处于卵泡期、黄体期和妊娠期牦牛的卵巢和输卵管组织样品,分为6个组,分别提取各组卵巢和输卵管组织样品总RNA和蛋白,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot检测Mfn2 mRNA及其蛋白在6个组的组织中的表达情况;用IHC法检测Mfn2蛋白在组织中的定位。RT-qPCR检测结果表明,6个组的组织中Mfn2 mRNA均有表达且存在差异,Mfn2 mRNA在妊娠期表达量最高,其次为黄体期,卵泡期最低,且各组之间差异显著(P<0.05)。Western blot结果发现,Mfn2蛋白在6个组的组织中均有所表达。在卵巢组织中,妊娠期最高,与黄体期和卵泡期差异显著(P<0.05),黄体期与卵泡期差异显著(P<0.05)。而在输卵管中,黄体期最高,与妊娠期差异显著(P<0.05);在卵泡期次之,与妊娠期差异显著(P<0.05),与黄体期差异不显著(P>0.05)。IHC结果显示,在卵巢中,Mfn2主要分布在卵巢卵泡膜、黄体细胞、生殖上皮,在输卵管中主要分布在黏膜上皮和肌层中,说明Mfn2在不同繁殖生理时期牦牛的卵巢和输卵管中均有所表达且有差异。 展开更多

关键词 线粒体融合蛋白2 牦牛 卵巢 输卵管 生殖

在线阅读 下载PDF 职称材料