文摘目的 探讨粘附分子P-选择素与树突状细胞(DC)在大鼠单侧输尿管梗阻后肾组织中的表达和分布,以及抗P-选择素单抗的抗粘附调抑作用。方法 建立大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型,随机将大鼠分为手术组和抗P-选择素单抗治疗组各18只,按不同梗阻时间(1、3、7d)再分为3组,另设假手术组(n=6)作为对照。分别采用免疫组化LSAB法和免疫双染与荧光图像分析法,观察P-选择素及DC在肾组织中表达和分布变化。结果 大鼠UUO第1d起即见P-选择素以肾小管上皮细胞为主在肾小管间质中表达上调,伴随CD1a^+CD80^+DC在以肾间质为主部位的浸润;第3 d P-选择素明显表达,且CD1a^+CD80^+DC显著增多;至第7 d P-选择素表达遂下调,而CD1a^+CD80^+DC在肾间质分布聚集达峰,出现了明显的肾小管间质病理损伤经抗P-选择素单抗处理后,大鼠肾组织P-选择素表达受到抑制,CD1a^+CD80^+DC分布聚集减少,且肾小管间质病理损伤减轻。结论 提示树突状细胞参与了肾小管间质纤维化早期病理损伤过程,其肾组织迁移聚集可能与P-选择素早期介导有关,抗P-选择素单抗对此具有抗粘附调抑和肾脏保护作用。
文摘目的·研究来源于IgA肾病患者的聚集性IgA1(P-aIgA1)对人肾系膜细胞(human renal mesangial cells,HMCs)分泌炎症因子及细胞增殖的影响,并观察组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylation,HDAC)抑制剂丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)体外抗炎和抗细胞增殖作用。方法·应用亲和层析法制备N-IgA1(来自健康对照者的IgA1)和P-IgA1(来自IgA肾病患者的IgA1),用热聚合法制备P-aIgA1和N-aIgA1(来自健康对照者的聚集性IgA1)。取HMCs,加入不同类型的IgA1及同体积的PBS(对照组),或者VPA干预。应用人炎症因子蛋白芯片检测各组HMCs培养上清液中炎症因子表达。用MTT法检测HMCs增殖情况。采用免疫印迹法或ELISA法检测相关蛋白的表达。结果·炎症因子蛋白芯片结果显示:与对照组比较,P-aIgA1组HMCs培养上清液中白介素-6可溶性受体(interleukin-6 soluble receptor,IL-6sR)、受激活调节的正常T细胞表达和分泌因子(regulated upon activation normal T cell expressed and secreted factor,RANTES)、金属蛋白酶组织抑制因子1(tissue inhibitor of metalloproteinase 1,TIMP1)、金属蛋白酶组织抑制因子2(tissue inhibitor of metalloproteinase 2,TIMP2)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和肿瘤坏死因子Ⅱ型受体(tumor necrosis factor typeⅡreceptor,TNFRⅡ)的表达水平均显著上调,分别为对照组的34倍、124倍、269倍、100倍、1.6倍和52倍;与对照组比较,N-aIgA1,P-IgA1,P-aIgA1都能促进TIMP2的表达,差异均有统计学意义(P=0.000,P=0.000,P=0.001)。用MTT法观察HMCs的增殖程度,结果显示:①与对照组相比,N-IgA1组对HMCs的增殖无显著的影响,P-IgA1及PaIgA1都能显著促进HMCs的增殖(P=0.045和P=0.003);与N-IgA1相比,P-aIgA1组HMCs出现了显著的增殖,差异有统计学意义(P=0.036)。②不同浓度的P-aIgA1对HMCs增殖影响的结果显示:25μg/mL的P-aIgA1就可以显著促进HMCs的增殖(P=0.038),呈剂量依赖性。③400μg/mL的VPA能够显著抑制HMCs的增殖(P=0.028)。不同的IgA1对HMCs中HDAC1的影响结果显示:各组HDAC1的表达量分别是对照组的(8.64±0.59)倍(P-aIgA1)、(5.42±0.16)倍(P-IgA1)和(5.87±0.58)倍(N-IgA1);与N-IgA1组相比,P-aIgA1组显著增加了HDAC1表达(P=0.021)。VPA对系膜细胞分泌TNF-α蛋白的影响结果显示:与正常对照组相比,P-aIgA1组TNF-α蛋白表达明显升高(P=0.001);与P-aIgA1组比较,P-aIgA1+VPA组TNF-α蛋白表达水平显著下降(P=0.035)。结论·P-aIgA1能显著促进系膜细胞释放促炎症因子和系膜细胞增殖,且促细胞增殖作用呈浓度依赖。体外IgA肾病细胞模型中存在乙酰化修饰异常,其参与了系膜细胞增殖和炎症反应。HDAC抑制剂VPA可以部分逆转上述反应,提示其在IgA肾病疾病干预方面有一定应用前景,可为从表观遗传学角度防治IgA肾病提供新的思路。
