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多重RT-PCR方法检测新型甲型H_1N_1流感病毒的研究
1
作者
罗吉新
李海妙
+3 位作者
林志达
王振全
苏惠龙
罗宝正
《湖北畜牧兽医》
2010年第10期8-11,共4页
为了建立快速检测新型甲型H1N1流感病毒的多重PCR技术,根据GenBank中公布甲型H1N1流感病毒(2009年流行株)的HA和NA基因序列,设计并合成两套特异性引物。使用TaKaRa公司的一步法RT-PCR试剂盒和自行设计合成的引物建立多重RT-PCR反应,按...
为了建立快速检测新型甲型H1N1流感病毒的多重PCR技术,根据GenBank中公布甲型H1N1流感病毒(2009年流行株)的HA和NA基因序列,设计并合成两套特异性引物。使用TaKaRa公司的一步法RT-PCR试剂盒和自行设计合成的引物建立多重RT-PCR反应,按照预期的PCR产物序列合成的DNA作为阳性对照。结果表明,该方法具有良好的特异性,可以将甲型H1N1流感病毒(2009年流行株)与传统甲型H1N1、H3N2、H5N1、H6N2和H9N2亚型流感病毒区分。该方法同时具有较高的灵敏度,最低可以检测到100个拷贝的阳性克隆质粒。在对183份发热病人临床咽拭子样品检测中发现了10份阳性样品,对350份猪鼻腔拭子样品检测全部呈阴性,结果与中国检验检疫科学研究院试剂盒检测结果一致,说明了该多重RT-PCR方法在临床检测新型甲型H1N1流感病毒方面具有广阔的应用前景。
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关键词
多重RT-PCR
甲型流感病毒
H1N1亚型
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职称材料
多重荧光PCR鉴别诊断猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒
被引量：
9
2
作者
陈静静
罗宝正
+5 位作者
沙才华
廖秀云
王振全
陈伟生
徐海聂
薄清如
《湖北畜牧兽医》
2012年第2期4-6,9,共4页
为了建立一种快速、灵敏、特异的能够同时检测猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒的多重荧光PCR方法,根据GenBank中公布的猪瘟病毒基因序列,设计一套特异性的引物和探针,对猪瘟病料提取RNA,经RT-PCR扩增后将产物回收,克隆至pMD18-T构建pMD18-T-CSF...
为了建立一种快速、灵敏、特异的能够同时检测猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒的多重荧光PCR方法,根据GenBank中公布的猪瘟病毒基因序列,设计一套特异性的引物和探针,对猪瘟病料提取RNA,经RT-PCR扩增后将产物回收,克隆至pMD18-T构建pMD18-T-CSFV阳性质粒;非洲猪瘟的目的片段序列采用化学合成,构建pMD18-T-ASFV阳性质粒。以两种阳性质粒为模板对建立的多重荧光PCR方法做特异性、灵敏度和重复性试验,结果表明该方法可以将猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒同口蹄疫病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪水泡病病毒、猪圆环病毒2型区分开,灵敏度可以达到10拷贝的数量级,而且方法稳定。对2份已知猪瘟阳性血清样品和120份猪内脏、猪鼻腔拭子及血清样品检测后,发现对已知阳性样品的检测结果符合预期目标,未知样品检出猪瘟病毒3份阳性,未检出非洲猪瘟病毒阳性。
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关键词
猪瘟病毒
非洲猪瘟病毒
多重荧光PCR
检测
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职称材料
题名
多重RT-PCR方法检测新型甲型H_1N_1流感病毒的研究
1
作者
罗吉新
李海妙
林志达
王振全
苏惠龙
罗宝正
机构
三统万福(青岛)食品有限公司
广东省
珠海出入境检验检疫局/国家外来病检测重点实验室
吉林大学畜牧兽医学院
出处
《湖北畜牧兽医》
2010年第10期8-11,共4页
文摘
为了建立快速检测新型甲型H1N1流感病毒的多重PCR技术,根据GenBank中公布甲型H1N1流感病毒(2009年流行株)的HA和NA基因序列,设计并合成两套特异性引物。使用TaKaRa公司的一步法RT-PCR试剂盒和自行设计合成的引物建立多重RT-PCR反应,按照预期的PCR产物序列合成的DNA作为阳性对照。结果表明,该方法具有良好的特异性,可以将甲型H1N1流感病毒(2009年流行株)与传统甲型H1N1、H3N2、H5N1、H6N2和H9N2亚型流感病毒区分。该方法同时具有较高的灵敏度,最低可以检测到100个拷贝的阳性克隆质粒。在对183份发热病人临床咽拭子样品检测中发现了10份阳性样品,对350份猪鼻腔拭子样品检测全部呈阴性,结果与中国检验检疫科学研究院试剂盒检测结果一致,说明了该多重RT-PCR方法在临床检测新型甲型H1N1流感病毒方面具有广阔的应用前景。
关键词
多重RT-PCR
甲型流感病毒
H1N1亚型
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
多重荧光PCR鉴别诊断猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒
被引量：
9
2
作者
陈静静
罗宝正
沙才华
廖秀云
王振全
陈伟生
徐海聂
薄清如
机构
珠海出入境检验检疫局/国家外来病检测重点实验室
出处
《湖北畜牧兽医》
2012年第2期4-6,9,共4页
文摘
为了建立一种快速、灵敏、特异的能够同时检测猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒的多重荧光PCR方法,根据GenBank中公布的猪瘟病毒基因序列,设计一套特异性的引物和探针,对猪瘟病料提取RNA,经RT-PCR扩增后将产物回收,克隆至pMD18-T构建pMD18-T-CSFV阳性质粒;非洲猪瘟的目的片段序列采用化学合成,构建pMD18-T-ASFV阳性质粒。以两种阳性质粒为模板对建立的多重荧光PCR方法做特异性、灵敏度和重复性试验,结果表明该方法可以将猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒同口蹄疫病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪水泡病病毒、猪圆环病毒2型区分开,灵敏度可以达到10拷贝的数量级,而且方法稳定。对2份已知猪瘟阳性血清样品和120份猪内脏、猪鼻腔拭子及血清样品检测后,发现对已知阳性样品的检测结果符合预期目标,未知样品检出猪瘟病毒3份阳性,未检出非洲猪瘟病毒阳性。
关键词
猪瘟病毒
非洲猪瘟病毒
多重荧光PCR
检测
分类号
S858.28 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
多重RT-PCR方法检测新型甲型H_1N_1流感病毒的研究
罗吉新
李海妙
林志达
王振全
苏惠龙
罗宝正
《湖北畜牧兽医》
2010
0
在线阅读
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职称材料
2
多重荧光PCR鉴别诊断猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒
陈静静
罗宝正
沙才华
廖秀云
王振全
陈伟生
徐海聂
薄清如
《湖北畜牧兽医》
2012
9
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