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Ghrelin对脂肪间充质干细胞神经分化的影响 被引量：1
1
作者 杨贺然 李兴江 +1 位作者 胡嘉航 李彦伟 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期1490-1497,共8页
目的:探讨Ghrelin联合LY294002对脂肪间充质干细胞(ADSCs)神经分化的影响,并阐明其作用机制。方法:倒置相差显微镜下观察ADSCs形态表现,流式细胞术鉴定ADSCs表面抗体阳性表达率,将第4代ADSCs分为对照组(不进行干预)、LY294002组[给予40... 目的:探讨Ghrelin联合LY294002对脂肪间充质干细胞(ADSCs)神经分化的影响,并阐明其作用机制。方法:倒置相差显微镜下观察ADSCs形态表现,流式细胞术鉴定ADSCs表面抗体阳性表达率,将第4代ADSCs分为对照组(不进行干预)、LY294002组[给予40μmol·L^(-1)磷酸酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路特异抑制剂LY294002]、Ghrelin组(给予0.1μmol·L^(-1) Ghrelin)、Ghrelin+LY294002组(给予40μmol·L^(-1) LY294002+0.1μmol·L^(-1) Ghrelin)。倒置相差显微镜下观察各组ADSCs神经分化后的形态表现,免疫荧光染色法检测各组ADSCs中神经元特异性烯醇化酶(NSE)、巢蛋白(Nestin)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞百分率,Western blotting法检测各组ADSCs中PI3K/Akt通路蛋白表达水平,并计算磷酸化PI3K(p-PI3K)/PI3K和磷酸化Akt(p-Akt)/Akt比值。结果:ADSCs表面抗体CD90和CD13高表达,CD34、CD45和CD106低表达。与对照组比较,LY294002组仅部分细胞由长梭形转变为类圆形胞体,突起较短、数量减少,而Ghrelin组细胞由长梭形转变为类圆形胞体速度增快;与LY294002组比较,Ghrelin+LY294002组细胞由长梭形转变为类圆形胞体速度增快,且突起数量增加。与对照组比较,LY294002组ADSCs中NSE和Nestin阳性细胞百分率及p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt比值明显降低(P<0.05),Ghrelin组ADSCs中NSE和Nestin阳性细胞百分率及p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt比值升高(P<0.05);与LY294002组比较,Ghrelin+LY294002组ADSCs中NSE和Nestin阳性细胞百分率及p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt比值升高(P<0.05);各组ADSCs中GFAP阳性细胞百分率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Ghrelin通过激活PI3K/Akt通路促进ADSCs神经分化。 展开更多
关键词 GHRELIN LY294002 脂肪间充质干细胞 神经分化 磷酸酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路
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Ghrelin通过调节MAPK/ERK通路对脂肪间充质干细胞神经元分化的影响
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作者 杨贺然 李兴江 +1 位作者 胡嘉航 李彦伟 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期706-713,共8页
目的:探讨Ghrelin对脂肪间充质干细胞(ADSCs)向神经元分化的影响,并阐明可能的机制。方法:ADSCs随机分为空白组、神经分化诱导剂组、Ghrelin组(给予600μg·L^(-1)Ghrelin)、U0126组(给予40 ng·L^(-1)U0126)、Ghrelin+U0126组... 目的:探讨Ghrelin对脂肪间充质干细胞(ADSCs)向神经元分化的影响,并阐明可能的机制。方法:ADSCs随机分为空白组、神经分化诱导剂组、Ghrelin组(给予600μg·L^(-1)Ghrelin)、U0126组(给予40 ng·L^(-1)U0126)、Ghrelin+U0126组(给予600μg·L^(-1)Ghrelin+40 ng·L^(-1)U0126)和Ghrelin受体阻断剂D-赖氨酰3生长激素释放肽6(D-Lys3-GHRP-6)组(给予10-10g·L^(-1)D-Lys3-GHRP-6)。倒置显微镜观察各组细胞病理形态表现,免疫荧光法检测各组细胞中神经丝蛋白(NF)-200和微管蛋白(Tuj-1)阳性表达率,Western blotting法检测各组细胞中丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)通路蛋白、神经元特异性核蛋白(NeuN)及Tuj-1、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、NF、生长激素促分泌受体(GHSR)、胎肝激酶1(Flk1)和CD29蛋白表达水平。结果:细胞培养第10天,空白组ASCs呈长梭形和螺旋状融合;神经分化诱导剂组细胞胞体收缩,长梭形胞体向类圆形转变、突起长度延长及类似神经元样细胞数增多;Ghrelin组细胞胞体突起进一步增多,类圆形细胞数进一步增多;U0126组和D-Lys3-GHRP-6组仅有少量细胞胞体收缩及类圆形转变。免疫荧光法检测,与空白组比较,神经分化诱导剂组细胞中NF-200和Tuj-1阳性表达率升高(P<0.05);与神经分化诱导剂组比较,Ghrelin组细胞中NF-200和Tuj-1阳性表达率升高(P<0.05),U0126组和D-Lys3-GHRP-6组细胞中NF-200及Tuj-1阳性表达率降低(P<0.05);与Ghrelin组比较,U0126组、D-Lys3-GHRP-6组和Ghrelin+U0126组细胞中NF-200和Tuj-1阳性表达率降低(P<0.05)。Western blotting法检测,与空白组比较,神经分化诱导剂组细胞中NSE、NeuN、Tuj-1、NF、GHSR蛋白表达水平和磷酸化MAPK(p-MAPK)/MAPK及磷酸化ERK(p-ERK)/ERK比值升高(P<0.05),Flk1和CD29蛋白表达水平降低(P<0.05);与神经分化诱导剂组比较,Ghrelin组细胞中NSE、NeuN、Tuj-1、NF、GHSR蛋白表达水平和p-MAPK/MAPK及p-ERK/ERK比值升高(P<0.05),Flk1和CD29蛋白表达水平降低(P<0.05),U0126组和D-Lys3-GHRP-6组细胞中NSE、NeuN、Tuj-1、NF、GHSR蛋白表达水平及p-MAPK/MAPK和p-ERK/ERK比值降低(P<0.05),Flk1和CD29蛋白表达水平升高(P<0.05);与Ghrelin组比较,U0126组、D-Lys3-GHRP-6组和Ghrelin+U0126组细胞中NSE、NeuN、Tuj-1、NF和GHSR蛋白表达水平及p-MAPK/MAPK和p-ERK/ERK比值降低(P<0.05),Flk1和CD29蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:Ghrelin可诱导ASCs向神经元分化,其作用机制与激活MAPK/ERK通路有关。 展开更多
关键词 胃饥饿素 丝裂素活化蛋白激酶 细胞外信号调节激酶 脂肪间充质干细胞 神经元分化
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