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基于烟草属特异性基因Ntsp051的RPA-LFD检测方法的建立及应用
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作者 张轲 龙杰 +7 位作者 董杏梅 徐世斌 范昱明 普麒 万岳莹 李昌威 林金水 童治军 《西南农业学报》 北大核心 2025年第9期1914-1923,共10页
【目的】探索高效、快速、简便的类烟产品现场鉴别检验方法,增强烟草专卖执法的科学性和时效性。【方法】以烟草属特异性基因Nstp051为检测靶标,设计特异性引物与探针,优化反应的时间和温度,建立基于重组酶聚合酶扩增技术结合横向流动... 【目的】探索高效、快速、简便的类烟产品现场鉴别检验方法,增强烟草专卖执法的科学性和时效性。【方法】以烟草属特异性基因Nstp051为检测靶标,设计特异性引物与探针,优化反应的时间和温度,建立基于重组酶聚合酶扩增技术结合横向流动试纸条(RPA-LFD)的类烟产品中植物源烟草成分的鉴别检验方法,并对该方法的灵敏度和特异性进行测试。【结果】建立的RPA-LFD检测方法对植物源烟草成分具有特异性,在42℃下反应20 min效果最好,对Ntsp051重组质粒的最低检测限为1.0×10^(2)copies/μL,对K326基因组DNA的最低检测限为50 pg/μL。该方法对不同的植物源烟草成分的灵敏度不同,当烟草与非烟混合基因组DNA浓度为10 ng/μL时,能从混合基因组DNA中检测出最低添加比例为0.5%的烟草基因组DNA。在模拟类烟产品添加试验中,最低可以检测到烟草与非烟草混合材料中添加比例仅为0.05%的植物源烟草成分。【结论】RPA-LFD检测方法简单快速,特异性好,灵敏度高,结果可肉眼判读,可用于类烟产品中植物源烟草成分的快速检测。 展开更多
关键词 类烟产品 Nstp051 重组酶聚合酶扩增技术(RPA) 快速检测 横向流动试纸条(LFD)
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