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dsRNA纳米融合制剂研制及对烟草普通花叶病毒和烟草脉带花叶病毒的抑制效果
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作者 张盼 郭玉双 +4 位作者 汪汉成 尹国英 曹领改 贾蒙骜 余永旭 《农药学学报》 北大核心 2025年第3期473-483,399,共12页
由烟草普通花叶病毒(TMV)和烟草脉带花叶病毒(TVBMV)所致花叶病是烟草上的主要病害,严重威胁烟叶产业的可持续发展。纳米材料介导的RNA干扰(RNAi)是一种新型的绿色、安全、高效防治技术,在植物病毒病防治中有着巨大的应用潜力。本研究... 由烟草普通花叶病毒(TMV)和烟草脉带花叶病毒(TVBMV)所致花叶病是烟草上的主要病害,严重威胁烟叶产业的可持续发展。纳米材料介导的RNA干扰(RNAi)是一种新型的绿色、安全、高效防治技术,在植物病毒病防治中有着巨大的应用潜力。本研究旨在筛选出对TMV和TVBMV病毒抑制效果最佳的靶标序列,并通过双链RNA(dsRNA)纳米材料递送体系解析其对TMV和TVBMV的抑制效果。基于TMV基因组的外壳蛋白(CP)和P126基因,以及TVBMV基因组的CP和HC Pro基因设计靶标片段,结合病毒诱导基因沉默(VIGS)试验,明确不同片段对TMV和TVBMV的抑制效果,筛选最佳靶标片段。体外合成dsRNA,并分别与3种纳米材料壳聚糖(CS)、碳量子点(CQD)和石墨烯量子点(GQD)融合,筛选最佳融合比例并制备得到纳米材料-dsRNA制剂,通过激光粒度仪、Zeta电位测试仪和透射电镜对3种纳米制剂进行了表征,验证了3种制剂对TMV和TVBMV的抑制效果。结果表明:VIGS注射P126对TMV的抑制效果较好,平均抑制率为53.96%;VIGS注射V-HC对TVBMV的抑制效果较好,平均抑制率为61.22%;表明P126和HC Pro基因片段为TMV和TVBMV的最佳靶标。dsRNA和纳米材料的融合试验表明,dsRNA和CS的最佳融合质量比为1∶1,dsRNA和CQD的最佳融合质量比为1∶10;dsRNA和GQD的最佳融合质量比为1∶7。纳米制剂的表征结果证明,dsRNA被成功负载在纳米材料上。纳米材料-dsRNA制剂对TMV和TVBMV的病毒抑制验证试验表明,纳米制剂显著提高了dsRNA对TMV和TVBMV的抑制效果,且GQDdsRNA和CQD-dsRNA组合的抑制效果最佳。 展开更多
关键词 烟草普通花叶病毒 烟草脉带花叶病毒 RNA干扰 双链RNA 抑制效果 纳米材料
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烟草谷氧还蛋白NbGRX1的亚细胞定位及抗旱功能研究 被引量:2
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作者 郭玉双 余婧 +7 位作者 蒲伟 邹颉 付强 余世洲 林世锋 张孝廉 赵杰宏 夏范讲 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期34-39,共6页
[目的]本文旨在分析烟草NbGRX1基因的亚细胞定位及抗旱功能。[方法]在前期研究中,我们从烟草中克隆了1个谷氧还蛋白基因NbGRX1,并对其表达特性进行了研究。在此基础上,对NbGRX1蛋白的亚细胞定位及抗旱功能进行研究。利用病毒介导的基因... [目的]本文旨在分析烟草NbGRX1基因的亚细胞定位及抗旱功能。[方法]在前期研究中,我们从烟草中克隆了1个谷氧还蛋白基因NbGRX1,并对其表达特性进行了研究。在此基础上,对NbGRX1蛋白的亚细胞定位及抗旱功能进行研究。利用病毒介导的基因沉默,在烟草中沉默了该基因,并调查NbGRX1基因沉默后烟草对干旱的响应。同时采用农杆菌介导法,将NbGRX1基因转化至拟南芥中,筛选单拷贝插入的纯合转基因拟南芥进行后续研究,对转基因拟南芥及对照进行干旱处理,并分析其表型。[结果]亚细胞定位研究表明,空载体中的GFP(绿色荧光蛋白)定位在细胞质和细胞核中,GFP:NbGRX1的融合蛋白均匀分布在细胞质和细胞核中,因此可以推测NbGRX1蛋白能定位在植物的细胞核和细胞质中。病毒介导的基因沉默研究表明,NbGRX1基因沉默烟草与对照相比对干旱胁迫更为敏感,更容易出现黄化和萎蔫的症状,叶片相对含水量下降;NbGRX1基因超量表达的株系干旱能力明显高于对照。[结论]烟草NbGRX1基因能够提高植物的抗旱性。 展开更多
关键词 谷氧还蛋白基因 干旱 病毒介导的基因沉默 超量表达
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烟草中一个LTR类反转录转座子基因的克隆与功能分析 被引量:2
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作者 郭玉双 陈静 +8 位作者 刘筱嘉 余世洲 余婧 林世锋 邹颉 付强 张孝廉 赵杰宏 任学良 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期936-942,共7页
[目的]分析烟草中LTR类反转录转座子对植物生长发育的影响。[方法]利用同源克隆及RACE的方法,从烟草栽培品种‘贵烟1号’c DNA中克隆得到了1个烟草反转录转座子的全长c DNA序列,命名为Ntrt1(Gen Bank登录号:KC899077)。利用实时定量RT-... [目的]分析烟草中LTR类反转录转座子对植物生长发育的影响。[方法]利用同源克隆及RACE的方法,从烟草栽培品种‘贵烟1号’c DNA中克隆得到了1个烟草反转录转座子的全长c DNA序列,命名为Ntrt1(Gen Bank登录号:KC899077)。利用实时定量RT-PCR研究了该基因在烟草不同组织中的表达水平;构建了基于双生病毒卫星诱导的Ntrt1的基因沉默载体,以中国番茄黄化曲叶病毒(tomato yellow leaf curl China virus,TYLCCNV)为辅助病毒在烟草中沉默了该基因,并调查了基因沉默后的表型。[结果]序列分析表明:该基因全长5 046 bp,编码3个ORF,分别为Gag/pol多聚蛋白、反转录转座子的中心蛋白以及一个整合酶。该基因能在烟草的根、茎、叶中表达,在叶片中的表达量最高。Ntrt1基因沉默烟草与对照相比,烟草植株明显变矮。[结论]Ntrt1在烟草的生长发育中具有重要作用。 展开更多
关键词 反转录转座子 烟草植株 基因沉默 同源克隆 R类 全长CDNA序列 实时定量RT-PCR 中国番茄黄化曲叶病毒
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利用HRM技术快速筛选低镉烟草突变体
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作者 张超 张吉顺 +6 位作者 王仁刚 曾吉凡 王自力 任学良 舒庆尧 武立权 赵海军 《中国烟草学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第3期37-45,共9页
低镉烟草种质资源对烟草育种及烟叶安全具有重要意义。本研究利用EMS处理贵烟1号获得诱变群体,按株系种植2020个M2株系,每株系种植10株,株系内3株叶片混样提取DNA,并采用HRM技术对样本池筛选烟草镉转运基因Nt HMA4突变体,共获得49份疑... 低镉烟草种质资源对烟草育种及烟叶安全具有重要意义。本研究利用EMS处理贵烟1号获得诱变群体,按株系种植2020个M2株系,每株系种植10株,株系内3株叶片混样提取DNA,并采用HRM技术对样本池筛选烟草镉转运基因Nt HMA4突变体,共获得49份疑似突变材料。DNA测序鉴定发现,其中21个株系发生SNP突变,其中15个为错义突变,其余为同义突变。对突变体与和野生型材料叶片的镉含量分析发现,有8份突变体的镉含量较野生型显著下降(16.19%~42.08%)。利用HRM技术跟踪检测10份种子可正常萌发的错义突变体M3家系,结果表明,HRM技术不仅可快速筛选烟草EMS诱变群体中的突变材料,结合DNA测序也可进一步对突变杂合体后代进行快速、准确的基因分型。 展开更多
关键词 镉转运基因 诱变 烟草 低镉 HRM
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烟草基因组计划进展篇:5.栽培烟草主要推广品种基因组差异分析 被引量:1
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作者 任学良 《中国烟草科学》 CSCD 2013年第5期119-120,共2页
优良推广品种的利用价值取决于其携带的优异基因,通过基因组差异研究可提供这些优异基因最基本的遗传信息,有助于加快其研究、利用。为此,在中国烟草总公司和贵州省局(公司)的资助下,由贵州省烟草科学研究院牵头,联合行业内外多... 优良推广品种的利用价值取决于其携带的优异基因,通过基因组差异研究可提供这些优异基因最基本的遗传信息,有助于加快其研究、利用。为此,在中国烟草总公司和贵州省局(公司)的资助下,由贵州省烟草科学研究院牵头,联合行业内外多个单位实施的烟草主要品种和核心种质资源基因组差异研究工作,对100年来中国和美国育成的具有明确系谱关系的主要栽培品种进行了基因组测序,围绕基因组结构变异揭示育种目标这一核心主题,取得了显著进展。 展开更多
关键词 基因组差异 中国烟草 栽培品种 基因组计划 优异基因 科学研究院 基因组测序 利用价值
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烤烟苗期茎部腐烂病病原菌九州镰孢菌的生物学特性 被引量:4
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作者 汪汉成 王进 +3 位作者 李文红 陆宁 王茂胜 夏海乾 《中国烟草学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第1期65-70,共6页
2012年在烤烟(Nicotiana tabacum L.)苗期发现茎部腐烂病,经病原菌的形态特征观察、rDNA-ITS和EF-1α序列分析,该致病菌被鉴定为九州镰孢菌(Fusarium kyushuense)。该病原菌在利马豆培养基上生长温度范围为5~41℃,最适30℃;分... 2012年在烤烟(Nicotiana tabacum L.)苗期发现茎部腐烂病,经病原菌的形态特征观察、rDNA-ITS和EF-1α序列分析,该致病菌被鉴定为九州镰孢菌(Fusarium kyushuense)。该病原菌在利马豆培养基上生长温度范围为5~41℃,最适30℃;分生孢子产生温度范围为10~35℃,最适35℃;分生孢子萌发温度范围为5~42℃,最适20~35℃;分生孢子萌发相对湿度范围为70%~100%,最适100%;可生长pH值为2~11,最适5~7;光照对菌丝生长和分生孢子萌发没有影响,光暗交替培养菌丝生长变慢,但分生孢子产量增加;在供试的95种碳源中,该病原菌能利用葡萄糖、麦芽糖、反丁烯二酸等89种碳源,不能利用N-乙酰基D-半乳糖胺、N-乙酰基-?-D-葡萄糖胺、葡萄醛酰胺、癸二酸、L-丝氨酸和腺苷-5’-磷酸盐6种碳源。 展开更多
关键词 烤烟 九州镰孢菌 生物学特性
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烤烟新品种贵烟2号的选育及特征特性 被引量:3
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作者 王仁刚 陆新莉 +10 位作者 苟正贵 左业华 赵中会 曾吉凡 雷庭 刘婕 郭光东 张吉顺 朱贵川 杨秀祥 任学良 《中国烟草学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第4期40-47,共8页
烤烟新品种贵烟2号是从K326中获得的优良变异单株,经系统选育而成,2017年通过全国烟草品种审定委员会审定。该品种遗传性状稳定,田间长势较强,易烘烤;中抗黑胫病、TMV,赤星病抗性优于对照K326;主要经济性状、外观质量、感官质量优于对照... 烤烟新品种贵烟2号是从K326中获得的优良变异单株,经系统选育而成,2017年通过全国烟草品种审定委员会审定。该品种遗传性状稳定,田间长势较强,易烘烤;中抗黑胫病、TMV,赤星病抗性优于对照K326;主要经济性状、外观质量、感官质量优于对照K326,是一个工业利用价值和农业生产效益兼顾的优良新品种。 展开更多
关键词 烤烟 新品种 贵烟2号 选育
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