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抗间质上皮转化因子(c-Met)单价抗体的制备及生物学活性检测
1
作者
郭佳
蒋明
+5 位作者
靳令经
尹衍新
孙慧
于丽华
毛玉婷
房健民
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第11期1544-1548,1553,共6页
目的用抗人间质上皮转化因子(c-Met)阻断型嵌合抗体ch3E1D7表达质粒构建单价抗体慢病毒穿梭质粒,利用慢病毒表达系统实现其在HEK293T细胞中快速表达,并对纯化后抗体的亲和力及中和活性进行检测。方法设计抗c-Met的单价抗体,命名为mono3E...
目的用抗人间质上皮转化因子(c-Met)阻断型嵌合抗体ch3E1D7表达质粒构建单价抗体慢病毒穿梭质粒,利用慢病毒表达系统实现其在HEK293T细胞中快速表达,并对纯化后抗体的亲和力及中和活性进行检测。方法设计抗c-Met的单价抗体,命名为mono3E1D7,利用基因工程技术构建单价抗体三条链的慢病毒表达载体,磷酸钙法转染HEK293T细胞,表达的单价抗体经蛋白A琼脂糖4B亲和层析柱纯化,SDS-PAGE检测抗体完整性,ELISA检测单价抗体在体外阻断c-Met与其配体HGF结合的生物学活性。结果感染单价抗体慢病毒的HEK293T细胞上清纯化后,SDS-PAGE分析可见55 ku的重链、25 ku的轻链以及30 ku的杵状结构链(Knob)三条带。且纯化后的单价抗体能与c-Met抗原结合,同时还具有阻断c-Met与HGF结合的中和活性。结论成功获得抗人c-Met阻断型单价抗体。
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关键词
C-MET
嵌合抗体
单价抗体
慢病毒表达
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职称材料
重组抗c-Met嵌合抗体的构建及其利用慢病毒快速表达
被引量：
3
2
作者
张龙真
郭佳
+1 位作者
顾华
房健民
《合肥工业大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2017年第6期835-839,共5页
文章采用兼并引物逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)从特异性分泌抗人c-Met阻断型单克隆抗体的杂交瘤细胞株3E1D7中扩增抗体重、轻链可变区基因(V_H和V_L)。通过重叠延伸PCR(splice overlap extension PCR,SOE-PCR)方法分别...
文章采用兼并引物逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)从特异性分泌抗人c-Met阻断型单克隆抗体的杂交瘤细胞株3E1D7中扩增抗体重、轻链可变区基因(V_H和V_L)。通过重叠延伸PCR(splice overlap extension PCR,SOE-PCR)方法分别将鼠源V_H与人IgG1的重链恒定区基因Cγ1相连,鼠源V_L与人IgG1的轻链恒定区基因Cκ相连获得嵌合抗体重链基因(H)和轻链基因(L)。将嵌合抗体重、轻链基因连接到慢病毒表达载体中,经双酶切和测序鉴定成功构建了慢病毒表达质粒pRRL-CMV-ch3E-H和pRRL-CMVch3E-L。磷酸钙法转染293T细胞,表达的嵌合抗体经Protein A Sepharose 4B亲和层析柱纯化,通过SDSPAGE检测抗体的完整性,ELISA法检测嵌合抗体的特异性抗原结合活性及人源性。感染慢病毒的293T细胞上清纯化后,经SDS-PAGE分析,可见25kDa嵌合抗体轻链和50kDa的嵌合抗体重链蛋白。且纯化后的嵌合抗体能够与c-Met抗原特异性结合成功获得重组抗人c-Met嵌合抗体,该抗体减少了鼠源成分,降低了免疫原性,利用慢病毒可以快速获得大量重组抗体蛋白,为该抗体药物的体内外评估奠定基础。
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关键词
抗人间质表皮转化因子
肝细胞生长因子
嵌合抗体
慢病毒表达载体
生物学活性
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职称材料
题名
抗间质上皮转化因子(c-Met)单价抗体的制备及生物学活性检测
1
作者
郭佳
蒋明
靳令经
尹衍新
孙慧
于丽华
毛玉婷
房健民
机构
同济大学苏州研究院生物医药中心
烟台荣昌制药股份有限公司
同济大学生命科学与技术学院
同济大学附属同济医院神经内科
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第11期1544-1548,1553,共6页
基金
国家科技部“重大新药创制”科技重大专项(2014ZX09102-043-003)
国家自然科学基金(81371403,81501102)
+1 种基金
上海市科委基础研究领域项目(13JC1401102)
苏州市科技计划项目(ZXY2012029)
文摘
目的用抗人间质上皮转化因子(c-Met)阻断型嵌合抗体ch3E1D7表达质粒构建单价抗体慢病毒穿梭质粒,利用慢病毒表达系统实现其在HEK293T细胞中快速表达,并对纯化后抗体的亲和力及中和活性进行检测。方法设计抗c-Met的单价抗体,命名为mono3E1D7,利用基因工程技术构建单价抗体三条链的慢病毒表达载体,磷酸钙法转染HEK293T细胞,表达的单价抗体经蛋白A琼脂糖4B亲和层析柱纯化,SDS-PAGE检测抗体完整性,ELISA检测单价抗体在体外阻断c-Met与其配体HGF结合的生物学活性。结果感染单价抗体慢病毒的HEK293T细胞上清纯化后,SDS-PAGE分析可见55 ku的重链、25 ku的轻链以及30 ku的杵状结构链(Knob)三条带。且纯化后的单价抗体能与c-Met抗原结合,同时还具有阻断c-Met与HGF结合的中和活性。结论成功获得抗人c-Met阻断型单价抗体。
关键词
C-MET
嵌合抗体
单价抗体
慢病毒表达
Keywords
c-Met
chimeric antibody
monovalent antibody
lentiviral expression
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
Q876 [生物学]
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职称材料
题名
重组抗c-Met嵌合抗体的构建及其利用慢病毒快速表达
被引量：
3
2
作者
张龙真
郭佳
顾华
房健民
机构
同济大学生命科学与技术学院
烟台荣昌制药股份有限公司
出处
《合肥工业大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2017年第6期835-839,共5页
基金
国家自然科学基金青年科学基金资助项目(81402399)
中央高校基本科研业务费专项资金资助项目(2000219121)
江苏省自然科学基金资助项目(BK2012162)
文摘
文章采用兼并引物逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)从特异性分泌抗人c-Met阻断型单克隆抗体的杂交瘤细胞株3E1D7中扩增抗体重、轻链可变区基因(V_H和V_L)。通过重叠延伸PCR(splice overlap extension PCR,SOE-PCR)方法分别将鼠源V_H与人IgG1的重链恒定区基因Cγ1相连,鼠源V_L与人IgG1的轻链恒定区基因Cκ相连获得嵌合抗体重链基因(H)和轻链基因(L)。将嵌合抗体重、轻链基因连接到慢病毒表达载体中,经双酶切和测序鉴定成功构建了慢病毒表达质粒pRRL-CMV-ch3E-H和pRRL-CMVch3E-L。磷酸钙法转染293T细胞,表达的嵌合抗体经Protein A Sepharose 4B亲和层析柱纯化,通过SDSPAGE检测抗体的完整性,ELISA法检测嵌合抗体的特异性抗原结合活性及人源性。感染慢病毒的293T细胞上清纯化后,经SDS-PAGE分析,可见25kDa嵌合抗体轻链和50kDa的嵌合抗体重链蛋白。且纯化后的嵌合抗体能够与c-Met抗原特异性结合成功获得重组抗人c-Met嵌合抗体,该抗体减少了鼠源成分,降低了免疫原性,利用慢病毒可以快速获得大量重组抗体蛋白,为该抗体药物的体内外评估奠定基础。
关键词
抗人间质表皮转化因子
肝细胞生长因子
嵌合抗体
慢病毒表达载体
生物学活性
Keywords
anti-c-Mesenchymal epithelial transition factor（anti-c-Met）
hepatocyte growth factor（HGF）
chimeric antibody
lentiviral vector
biological activity
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抗间质上皮转化因子(c-Met)单价抗体的制备及生物学活性检测
郭佳
蒋明
靳令经
尹衍新
孙慧
于丽华
毛玉婷
房健民
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
重组抗c-Met嵌合抗体的构建及其利用慢病毒快速表达
张龙真
郭佳
顾华
房健民
《合肥工业大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2017
3
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