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白藜芦醇对CdCl_2暴露所致斑马鱼胚胎发育毒性干预作用及机制的初步研究 被引量:3
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作者 王占洋 邱理红 +6 位作者 李雅娟 刘璟逸 许波 李刚 谢建新 李忌 王振华 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2015年第4期465-470,共6页
为考察天然抗氧化剂白藜芦醇(Res)对CdCl2暴露所致斑马鱼胚胎发育毒性的干预作用,并初步探讨其作用机制。采用单独应用Res联合CdCl:共同处理受精后2h(2hpf)的斑马鱼胚胎,观察至96hpf胚胎死亡率和孵化率;采用荧光探针DCFH—DA、M... 为考察天然抗氧化剂白藜芦醇(Res)对CdCl2暴露所致斑马鱼胚胎发育毒性的干预作用,并初步探讨其作用机制。采用单独应用Res联合CdCl:共同处理受精后2h(2hpf)的斑马鱼胚胎,观察至96hpf胚胎死亡率和孵化率;采用荧光探针DCFH—DA、MitoSOX、JC-1分别检测胚胎总体活性氧、线粒体源ROS水平和胚胎线粒体的膜电势;采用吖啶橙(AO)染色法检测细胞凋亡情况;采用Real-timePCR方法检测胚胎线粒体单链DNA结合蛋白(mtSSBP)、OPAl的表达水平。结果显示,100μmol/LRes持续暴露96h可明显增加斑马鱼胚胎死亡率(P〈0.05)。20-100μLmol/LRes与20mg/LCdCl:联合暴露较单独CdCl:暴露组相比,胚胎死亡率和未孵化率明显增加(P〈0.01)。100μm01/LRes与20mg/LCdCl2联合处理明显增加了胚胎总体ROS(P〈0.01)和线粒体内ROS(P〈0.01)的生成,降低了线粒体的膜电势(P〈0.05),胚胎细胞凋亡细胞数量明显增加。与CdCI:单独暴露组相比,Res联合处理明显下调了mtSSBP和OPAl的mRNA表达水平(P〈O.01)。由此可知,高浓度Res明显增强CdCl2所致的斑马鱼发育毒性,胚胎总体ROS和线粒体源ROS水平升高,线粒体膜电势下降,mtSSBP和OPAl表达下降,表明线粒体损害可能介导了Res对CdCl2育毒性的增敏作用。 展开更多
关键词 白藜芦醇 氯化镉 氧化胁迫 发育毒性 斑马鱼
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异甘草素对大鼠C6胶质瘤细胞增殖和分化的影响 被引量:11
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作者 李雅娟 甘露 +7 位作者 王占洋 邱理红 佀营营 张红 马成俊 李忌 孙喜灵 王振华 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1298-1303,共6页
目的研究异甘草素对大鼠C6胶质瘤细胞增殖和分化的影响。方法采用磺酰罗丹明B(SRB)比色法和克隆形成实验考察异甘草素对C6胶质瘤细胞增殖抑制作用;Giemsa染色观察细胞形态学变化;半定量RT-PCR、Western blot鉴定细胞分化相关基因及蛋白... 目的研究异甘草素对大鼠C6胶质瘤细胞增殖和分化的影响。方法采用磺酰罗丹明B(SRB)比色法和克隆形成实验考察异甘草素对C6胶质瘤细胞增殖抑制作用;Giemsa染色观察细胞形态学变化;半定量RT-PCR、Western blot鉴定细胞分化相关基因及蛋白表达水平。结果大鼠C6胶质瘤细胞经异甘草素诱导后,以浓度依赖性抑制细胞增殖(P<0.01);光镜观察到异甘草素诱导前的C6胶质瘤细胞呈两极长梭形或多角形,胞质多,胞突短;而诱导后细胞突起数目不同程度增多,细胞形态变细变长。诱导前克隆形成出现早,数量多,直径大,克隆形成率高;异甘草素处理组克隆形成率降低,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。RT-PCR、Western blot结果显示,异甘草素诱导后C6细胞GFAP mRNA和蛋白表达均明显上升(P<0.01)。结论异甘草素能抑制大鼠C6胶质瘤细胞的增殖,并能诱导C6细胞分化。 展开更多
关键词 异甘草素 C6胶质瘤 增殖 分化 克隆形成 吉姆萨染色 星形胶质细胞 GFAP
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氯化锂对冈田酸所致SK-N-SH神经元突触萎缩的保护作用 被引量:3
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作者 袁玉婷 佀营营 +7 位作者 王占洋 弥相权 吕欢欢 许波 李刚 李忌 何杰 王振华 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期670-675,共6页
目的考察氯化锂(LiCl)对蛋白磷酸酶抑制剂冈田酸(OA)诱导的SK-N-SH细胞分化神经元损伤的保护作用和tau蛋白Ser-^(262)位点磷酸化水平的影响。方法利用全反式维甲酸(ATRA)诱导SK-N-SH细胞分化为成熟的神经元细胞;采用OA诱导成熟神经元细... 目的考察氯化锂(LiCl)对蛋白磷酸酶抑制剂冈田酸(OA)诱导的SK-N-SH细胞分化神经元损伤的保护作用和tau蛋白Ser-^(262)位点磷酸化水平的影响。方法利用全反式维甲酸(ATRA)诱导SK-N-SH细胞分化为成熟的神经元细胞;采用OA诱导成熟神经元细胞建立AD模型;采用磺酰罗丹明B(SRB)比色法考察LiCl对成熟的神经元细胞增殖的抑制作用;Giemsa染色观察SK-N-SH细胞形态学变化;并采用Image-Proplus软件测定神经元细胞的突触长度;采用Western blot检测synaptophysin蛋白和tau蛋白Ser-^(262)位点磷酸化水平。结果 10μmol·L^(-1)ATRA连续处理7 d,可诱导SK-N-SH细胞突触生长和synaptophysin蛋白表达等典型分化神经元的特征。20~100 nmol·L^(-1)OA作用于分化神经元,可浓度和时间依赖性抑制细胞增殖,同时致分化神经元突触萎缩,tau蛋白Ser-^(262)位点磷酸化水平也明显升高。10 mmol·L^(-1)LiCl预处理可维持synaptophysin蛋白高表达,抑制tau蛋白Ser-^(262)位点磷酸化水平(P<0.01)。结论LiCl能够改善OA所致分化神经元的突触损伤,并伴随着synaptophysin表达的升高、tau蛋白Ser-^(262)位点异常磷酸化水平的降低。 展开更多
关键词 LICL 冈田酸 TAU蛋白磷酸化 阿尔茨海默病 分化神经元 突触萎缩 吉姆萨染色
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迷迭香酸对胰岛素硝化的抑制作用
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作者 徐晓敏 孙培环 +5 位作者 邱理红 姚雯 盖志亮 谢建新 许波 王振华 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第19期220-223,共4页
目的:采用化学体系考察迷迭香酸(rosmarinic acid,RA)对胰岛素硝化的保护作用。方法:采用比色法和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测迷迭香酸对胰岛素和过量过氧亚硝基阴离子(ONOO)反应的影响。结果:胰岛素可以和ONOO反应生成硝化胰岛素,在3... 目的:采用化学体系考察迷迭香酸(rosmarinic acid,RA)对胰岛素硝化的保护作用。方法:采用比色法和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测迷迭香酸对胰岛素和过量过氧亚硝基阴离子(ONOO)反应的影响。结果:胰岛素可以和ONOO反应生成硝化胰岛素,在396nm波长处有最大吸收峰。RA可浓度依赖性地抑制ONOO所致的胰岛素硝化作用,但对已经硝化的胰岛素没有影响。结论:RA通过清除ONOO抑制胰岛素的硝化作用。 展开更多
关键词 迷迭香酸 胰岛素 硝化作用 过氧亚硝基阴离子
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刃天青法检测mtDNA缺失C6ρ0细胞的活力
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作者 靳有才 张一鸣 +2 位作者 李忌 王洪伦 白波 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期1136-1141,共6页
目的建立以刃天青为氧化还原指示剂测定mtDNA被完全清除的大鼠胶质瘤C6细胞(C6ρ0)增殖及活力的方法,并对其有效性进行验证。方法取对数生长期的C6ρ0细胞,采用刃天青法比较不同细胞数量、刃天青浓度、孵育时间对荧光强度的影响,优化测... 目的建立以刃天青为氧化还原指示剂测定mtDNA被完全清除的大鼠胶质瘤C6细胞(C6ρ0)增殖及活力的方法,并对其有效性进行验证。方法取对数生长期的C6ρ0细胞,采用刃天青法比较不同细胞数量、刃天青浓度、孵育时间对荧光强度的影响,优化测定C6ρ0细胞活力的条件。比较MTT法和刃天青法测定C6ρ0和C6细胞活力的灵敏性,并以天然化合物熊果酸对C6ρ0和C6细胞活力的影响对该方法进行验证。结果 C6ρ0细胞数为0~30 000/孔,25μg/mL刃天青培养基避光孵育1~4 h,细胞数量与荧光强度呈良好线性关系,灵敏性高于MTT法。熊果酸0~50μmol/L对C6ρ0和C6细胞具有增殖抑制作用,且增殖抑制率差异有统计学意义(P<0.05),IC50分别为20.82、14.62μg/mL。结论刃天青法灵敏、简单、安全无毒、经济便宜、重复性好,特别适用于生长代谢缓慢的细胞系,可用于其细胞增殖测定、活力分析及化合物细胞毒的高通量筛选。 展开更多
关键词 刃天青 神经胶质瘤C6细胞 C6ρ0细胞 细胞活力 熊果酸
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异甘草素对3T3-L1前脂肪细胞分化的抑制作用 被引量:4
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作者 邱理红 王占洋 +8 位作者 李雅娟 佀营营 周慧 韩欢 许波 李刚 谢建新 李忌 王振华 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第1期157-162,共6页
目的:考察异甘草素对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响,探究其作用机制。方法:采用3T3-L1前脂肪细胞,利用磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)法检测异甘草素对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响,采用传统的鸡尾酒法诱导3T3-L1细胞分化为脂肪细胞,... 目的:考察异甘草素对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响,探究其作用机制。方法:采用3T3-L1前脂肪细胞,利用磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)法检测异甘草素对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响,采用传统的鸡尾酒法诱导3T3-L1细胞分化为脂肪细胞,利用油红O染色法检测分化细胞脂滴形成;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应方法,检测细胞CCAAT增强子结合蛋白(CCAAT-enhancer-binding proteins,C/EBP)亚型C/EBPα、C/EBPβ、脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase,FAS)、脂肪分化相关蛋白adipophilin、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferators activated receptorγ,PPARγ)、腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK)的mRNA表达水平,Western blotting法检测AMPK蛋白磷酸化水平。结果:异甘草素可浓度依赖性地抑制3T3-L1细胞增殖,并明显抑制分化细胞内脂滴形成,同时抑制了细胞分化相关基因C/EBPα、C/EBPβ、FAS、adipophilin、PPARγ mRNA的表达,AMPK m RNA的表达未受影响,但异甘草素处理明显上调了AMPK蛋白的磷酸化水平。结论:异甘草素可抑制3T3-L1前脂肪细胞向脂肪细胞分化,其机制可能与活化AMPK信号通路相关。 展开更多
关键词 异甘草素 3T3-L1前脂肪细胞 分化 脂质生成 腺苷酸活化蛋白激酶
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小檗碱活化AMPK-eNOS减轻油酸所致人主动脉内皮细胞损伤 被引量:7
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作者 周慧 刘敬 +8 位作者 侯文锋 王尧清 张文彦 许波 马成俊 李忌 孟庆国 孙喜灵 王振华 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第5期213-219,共7页
目的:考察小檗碱对油酸所致内皮细胞损伤的保护作用,并探究其作用机制。方法:以体外培养人主动脉内皮细胞系(human aorta endothelial cells,HAEC)为受试对象;分别以油酸、油酸联合小檗碱、油酸联合单磷酸腺苷活化蛋白激酶(adenosine mo... 目的:考察小檗碱对油酸所致内皮细胞损伤的保护作用,并探究其作用机制。方法:以体外培养人主动脉内皮细胞系(human aorta endothelial cells,HAEC)为受试对象;分别以油酸、油酸联合小檗碱、油酸联合单磷酸腺苷活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)激活剂(AICAR)或抑制剂(Compound C)处理HAEC;采用油红O染色法观察细胞内脂滴合成;采用比色法检测细胞内甘油三酯、总胆固醇含量,硝酸还原酶法检测NO的水平,2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐探针检测细胞内总活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,Western Blotting检测细胞总AMPK、内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)及其磷酸化(p-AMPK、p-eNOS)水平。结果:油酸可浓度依赖性地抑制细胞增殖,小檗碱组各项指标较正常对照组无显著性差异,油酸联合小檗碱组的细胞活性较油酸组明显好转(P<0.01)。与正常对照组比较,油酸组的脂质浸润程度明显,油酸在不同浓度下使内皮细胞的脂质含量呈剂量依赖性增加,加入小檗碱可明显减少这种脂质堆积。油酸组的NO水平较正常对照组明显减少,小檗碱能显著抑制油酸所致的内皮NO水平的减少,并且减少由于油酸所致的ROS水平的升高;油酸抑制了AMPK的活化,使p-AMPK和p-eNOS的蛋白水平明显降低(P<0.01);小檗碱可明显逆转油酸所致AMPK和eNOS磷酸化水平下降,Compound C可拮抗其作用。结论:小檗碱可减轻油酸所致血管内皮细胞损伤,或与其活化AMPK/eNOS信号相关。 展开更多
关键词 小檗碱 油酸 单磷酸腺苷活化蛋白激酶 内皮型一氧化氮合酶 人主动脉内皮细胞
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红花黄色素B对冈田酸致SH-SY5Y神经元损伤的保护作用 被引量:3
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作者 郝雪言 李刚 +4 位作者 韦瑶 刘敬 张文彦 李忌 马成俊 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期461-468,共8页
本研究目的是考察红花黄色素B(SYB)对冈田酸(OA)致SH-SY5Y神经元损伤的保护作用。采用全反式维甲酸(ATRA)诱导SH-SY5Y细胞分化为成熟神经元,OA诱导神经元损伤,建立Tau蛋白过度磷酸化的神经元突触萎缩模型;Giemsa染色法观察SH-SY5Y细胞... 本研究目的是考察红花黄色素B(SYB)对冈田酸(OA)致SH-SY5Y神经元损伤的保护作用。采用全反式维甲酸(ATRA)诱导SH-SY5Y细胞分化为成熟神经元,OA诱导神经元损伤,建立Tau蛋白过度磷酸化的神经元突触萎缩模型;Giemsa染色法观察SH-SY5Y细胞形态学变化;Western Blot检测Tau蛋白262位点磷酸化水平;流式细胞术检测细胞总活性氧(ROS)和线粒体源ROS水平,以及线粒体膜电位的变化。结果表明,ATRA可诱导SH-SY5Y细胞分化为成熟神经元;OA可致神经元突触萎缩和Tau蛋白在262位点过度磷酸化;SYB能够改善OA所致成熟神经元损伤,降低Tau蛋白在262位点的磷酸化水平,其保护作用机制可能与减少胞内及线粒体源ROS产生,提高线粒体膜电位有关。 展开更多
关键词 红花黄色素B SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞 冈田酸 TAU蛋白
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亚甲基蓝对冈田酸所致SK-N-SH细胞分化神经元损伤的保护作用 被引量:2
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作者 佀营营 袁玉婷 +6 位作者 邱理红 吕欢欢 周慧 许波 李刚 李忌 王振华 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第17期195-200,共6页
目的:考察亚甲基蓝(methylene blue,MB)对冈田酸(okadaic acid,OA)所致分化神经元损伤的保护作用,并探究其作用机制。方法:采用全反式维甲酸诱导SK-N-SH人神经母细胞瘤细胞分化为成熟神经元细胞;OA诱导分化神经元损伤模拟阿尔茨海默症(A... 目的:考察亚甲基蓝(methylene blue,MB)对冈田酸(okadaic acid,OA)所致分化神经元损伤的保护作用,并探究其作用机制。方法:采用全反式维甲酸诱导SK-N-SH人神经母细胞瘤细胞分化为成熟神经元细胞;OA诱导分化神经元损伤模拟阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease,AD)神经元损伤;磺酰罗丹明B法检测MB对神经元细胞活性的影响;Giemsa染色法观察细胞形态变化;Western blotting检测突触素蛋白、磷酸化tau蛋白(p-tau)的表达水平。结果:全反式维甲酸可浓度依赖性抑制SK-N-SH细胞增殖,10μmol/L全反式维甲酸处理SK-N-SH细胞7 d后,细胞突触明显伸长,出现典型神经元特征;以40 nmol/L OA构建AD模型;MB可浓度依赖性抑制分化的SK-N-SH细胞活性,与OA组相比,随着MB浓度增加,细胞轴突长度与胞体长度比值增大,细胞突触变长,MB改善了OA所致的细胞突触损伤,突触素蛋白表达量明显升高(P<0.01),p-tau(Ser262)蛋白水平明显降低(P<0.01)。结论:MB对OA所造成的分化SK-N-SH神经元细胞突触损伤有保护作用,可防止AD中tau蛋白的过度磷酸化。 展开更多
关键词 亚甲基蓝 分化SK-N-SH人神经母细胞瘤细胞 全反式维甲酸 冈田酸 TAU蛋白磷酸化
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