目的观察miR-181a-5p在H 2 O 2诱导大鼠皮肤成纤维样细胞衰老过程中的表达变化,并探讨其表达水平对细胞自噬和凋亡的影响。方法采用200μmol/L H_(2)O_(2)诱导大鼠皮肤成纤维样RS1细胞6 h,构建细胞衰老模型。将细胞分为5组:H 2 O 2处理...目的观察miR-181a-5p在H 2 O 2诱导大鼠皮肤成纤维样细胞衰老过程中的表达变化,并探讨其表达水平对细胞自噬和凋亡的影响。方法采用200μmol/L H_(2)O_(2)诱导大鼠皮肤成纤维样RS1细胞6 h,构建细胞衰老模型。将细胞分为5组:H 2 O 2处理组、mimic-NC组、mimic组、inhibitor-NC组和inhibitor组,采用脂质体转染技术将miR-181a-5p mimic、inhibitor等转染入相应的细胞中。MTT法检测细胞增殖活性;qPCR检测细胞miR-181a-5p表达水平。利用流式细胞术检测细胞凋亡;利用吖啶橙染色观察细胞自噬水平;采用Western blot检测细胞LC3B、p62、Beclin-1、自噬相关基因5(autophagy related 5,ATG5)蛋白表达水平。结果与正常RS1细胞比较,H 2 O 2诱导后的RS1细胞增殖活性显著降低(P<0.05),而miR-181a-5p表达水平显著升高(P<0.05)。与H 2 O 2处理组比较,mimic组RS1细胞排列紊乱,细胞轮廓不清晰,碎片较多,凋亡率显著升高(P<0.05),自噬水平降低,Beclin-1和ATG5表达显著降低(均P<0.05);inhibitor组RS1细胞轮廓清晰,过度伸展、空泡化的细胞减少,凋亡率显著降低(P<0.05),自噬水平升高,Beclin-1和ATG5表达显著升高(均P<0.05)。结论H 2 O 2诱导大鼠皮肤成纤维样细胞miR-181a-5p表达增加,且上调miR-181a-5p表达,可抑制细胞自噬、促进细胞凋亡。展开更多
文摘目的观察miR-181a-5p在H 2 O 2诱导大鼠皮肤成纤维样细胞衰老过程中的表达变化,并探讨其表达水平对细胞自噬和凋亡的影响。方法采用200μmol/L H_(2)O_(2)诱导大鼠皮肤成纤维样RS1细胞6 h,构建细胞衰老模型。将细胞分为5组:H 2 O 2处理组、mimic-NC组、mimic组、inhibitor-NC组和inhibitor组,采用脂质体转染技术将miR-181a-5p mimic、inhibitor等转染入相应的细胞中。MTT法检测细胞增殖活性;qPCR检测细胞miR-181a-5p表达水平。利用流式细胞术检测细胞凋亡;利用吖啶橙染色观察细胞自噬水平;采用Western blot检测细胞LC3B、p62、Beclin-1、自噬相关基因5(autophagy related 5,ATG5)蛋白表达水平。结果与正常RS1细胞比较,H 2 O 2诱导后的RS1细胞增殖活性显著降低(P<0.05),而miR-181a-5p表达水平显著升高(P<0.05)。与H 2 O 2处理组比较,mimic组RS1细胞排列紊乱,细胞轮廓不清晰,碎片较多,凋亡率显著升高(P<0.05),自噬水平降低,Beclin-1和ATG5表达显著降低(均P<0.05);inhibitor组RS1细胞轮廓清晰,过度伸展、空泡化的细胞减少,凋亡率显著降低(P<0.05),自噬水平升高,Beclin-1和ATG5表达显著升高(均P<0.05)。结论H 2 O 2诱导大鼠皮肤成纤维样细胞miR-181a-5p表达增加,且上调miR-181a-5p表达,可抑制细胞自噬、促进细胞凋亡。
