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人细胞间黏附分子1基因慢病毒干扰载体感染MCF-7细胞下调靶基因表达
被引量:
3
1
作者
邸大琳
陈蕾
+2 位作者
王丽娜
王成东
鞠吉雨
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第8期1048-1052,共5页
目的构建人细胞间黏附分子1(ICAM-1)慢病毒干扰载体,包装病毒后,感染人乳腺癌细胞MCF-7并检测干扰效果。方法针对人ICAM-1基因设计并合成3条靶向短发夹RNA(shRNA)干扰序列(ICAM-1 shRNA1、ICAM-1 shRNA2和ICAM-1 shRNA3)以及一个阴性对...
目的构建人细胞间黏附分子1(ICAM-1)慢病毒干扰载体,包装病毒后,感染人乳腺癌细胞MCF-7并检测干扰效果。方法针对人ICAM-1基因设计并合成3条靶向短发夹RNA(shRNA)干扰序列(ICAM-1 shRNA1、ICAM-1 shRNA2和ICAM-1 shRNA3)以及一个阴性对照序列(NS),将其克隆入载体p LKO.1-SP6-PGK-GFP中,测序正确后利用3个质粒病毒包装系统(干扰质粒载体-ps PAX2-p MD2.G)转染HEK293T细胞并包装慢病毒。收获病毒上清并测定病毒滴度。将所获病毒感染MCF-7细胞,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法检测干扰效率。结果菌落PCR结果显示目的片段成功插入p LKO.1-SP6-PGK-GFP载体中,DNA测序证实无误。将所制备之慢病毒感染MCF-7细胞,qRT-PCR和Western blot结果证实ICAM-1 shRNA3组ICAM-1 mRNA和蛋白水平有明显下降。结论成功构建了人ICAM-1基因shRNA慢病毒干扰载体,包装慢病毒后,感染MCF-7细胞可引起ICAM-1表达下调。
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关键词
ICAM-1
慢病毒载体
乳腺癌
MCF-7细胞
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职称材料
题名
人细胞间黏附分子1基因慢病毒干扰载体感染MCF-7细胞下调靶基因表达
被引量:
3
1
作者
邸大琳
陈蕾
王丽娜
王成东
鞠吉雨
机构
潍坊
医学院免疫学教研室
潍坊
医学院附属
医院
血液科
潍坊市人民医院产前诊断实验室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第8期1048-1052,共5页
基金
国家自然科学基金(81373185)
山东省自然科学基金(ZR2009CM019)
+2 种基金
潍坊市卫生局科研计划项目(2012065)
山东省教育厅项目(J10LF62)
山东省卫生厅项目(2013WS0287)
文摘
目的构建人细胞间黏附分子1(ICAM-1)慢病毒干扰载体,包装病毒后,感染人乳腺癌细胞MCF-7并检测干扰效果。方法针对人ICAM-1基因设计并合成3条靶向短发夹RNA(shRNA)干扰序列(ICAM-1 shRNA1、ICAM-1 shRNA2和ICAM-1 shRNA3)以及一个阴性对照序列(NS),将其克隆入载体p LKO.1-SP6-PGK-GFP中,测序正确后利用3个质粒病毒包装系统(干扰质粒载体-ps PAX2-p MD2.G)转染HEK293T细胞并包装慢病毒。收获病毒上清并测定病毒滴度。将所获病毒感染MCF-7细胞,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法检测干扰效率。结果菌落PCR结果显示目的片段成功插入p LKO.1-SP6-PGK-GFP载体中,DNA测序证实无误。将所制备之慢病毒感染MCF-7细胞,qRT-PCR和Western blot结果证实ICAM-1 shRNA3组ICAM-1 mRNA和蛋白水平有明显下降。结论成功构建了人ICAM-1基因shRNA慢病毒干扰载体,包装慢病毒后,感染MCF-7细胞可引起ICAM-1表达下调。
关键词
ICAM-1
慢病毒载体
乳腺癌
MCF-7细胞
Keywords
ICAM-1
lentiviral vector
breast cancer
MCF-7 cells
分类号
R737.9 [医药卫生—肿瘤]
R392-33 [医药卫生—免疫学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人细胞间黏附分子1基因慢病毒干扰载体感染MCF-7细胞下调靶基因表达
邸大琳
陈蕾
王丽娜
王成东
鞠吉雨
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015
3
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