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题名一种生物膜表面唾液酸的染色和定量方法
被引量：1
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作者
张柏惠
杨晓倩
邹翔
曲中原
崔琳琳
郭守东
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机构
哈尔滨商业大学药学院(药物工程技术研究中心)
潍坊医学院药学院脂代谢与动脉粥样硬化研究室
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出处
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第7期1329-1337,共9页
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基金
国家自然科学基金资助项目(No.81770463,No.82070469,No.31300639)。
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文摘
目的:建立一种细胞、组织和器官生物膜表面唾液酸的染色及定量方法。方法:设计平行实验,确定最佳染色条件。将接种在盖玻片上的细胞用PBS洗涤后,加高碘酸钠(NaIO4,1 mmol/L)于4℃轻度选择性氧化生物膜表面的唾液酸在C-7位成醛;随后,加入甘油工作液终止氧化,再用冷的PBS清洗;再加入荧光素-5-氨基硫脲(FTSC,100μmol/L)荧光染料与生成的醛基避光反应,并采用PBS洗涤;最后,采用DAPI染核并采用PBS-T清洗,甘油封片、拍照,采用图像处理软件量化分析。组织切片经多聚甲醛固定后,按照上述优化后的步骤染色。结果:平行实验结果显示,FTSC染色40 min细胞表面唾液酸的成像效果最佳;3种不同的细胞经唾液酸染色后均呈现强的绿色荧光,经100μmol/L H_(2)O_(2)处理24 h后,荧光强度显著降低(P<0.01);该方法可原位检测小鼠组织切片和动脉内壁的唾液酸水平。假阳性结果可通过纳入仅采用FTSC处理组排除或扣除背景。结论:该方法可对不同细胞、组织和器官表面的唾液酸进行原位染色及定量分析。
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关键词
唾液酸
荧光标记
动脉粥样硬化
斑块着色
氧化应激
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Keywords
Sialic acids
Fluorescence labeling
Atherosclerosis
Plaque staining
Oxidative stress
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分类号
R965.2
[医药卫生—药理学]
R363
[医药卫生—病理学]
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