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转染miR-17-5p对PC12细胞Bcl-2、Bax蛋白表达和形态学影响 被引量:3
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作者 刘红兵 王凤斌 +3 位作者 张皓云 王鲁娟 谭春艳 鲁洪 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期477-481,共5页
目的:观察基因miR-17-5p转染对PC12细胞Bcl-2、Bax蛋白表达和形态学影响。方法:用质粒PEGFP-N1-vector空载体和PEGFP-N1-miR-17-5p表达载体转染正常的PC12细胞,将细胞分为对照组、空载组、miR-17-5p组。应用免疫细胞化学染色法和Western... 目的:观察基因miR-17-5p转染对PC12细胞Bcl-2、Bax蛋白表达和形态学影响。方法:用质粒PEGFP-N1-vector空载体和PEGFP-N1-miR-17-5p表达载体转染正常的PC12细胞,将细胞分为对照组、空载组、miR-17-5p组。应用免疫细胞化学染色法和Western-blot方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达,电镜观察各组细胞超微结构改变。结果:对照组与空载组Bcl-2、Bax蛋白表达无显著性差异,miR-17-5p组与空载组比较,Bcl-2蛋白表达明显减少(P<0.01),而Bax蛋白表达明显增多(P<0.01),Western blot检测其凋亡相关蛋白表达变化与免疫组化结果一致。电镜下观察可见正常对照组与空载组细胞形态无明显差异,细胞形态结构正常,无明显病理改变;miR-17-5p转染组细胞胞体肿胀,线粒体髓样变和空泡样变,胞核扭曲凹陷,异染色质边集。结论:miR-17-5p基因过表达能引起PC12细胞促凋亡的Bax蛋白表达增多,抗凋亡的Bcl-2蛋白表达减少,导致PC12细胞形态学损伤。 展开更多
关键词 miR-17-5p PC12细胞 BCL-2 BAX 超微结构
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稳定表达miR-17-5p的PC12细胞株构建及鉴定 被引量:2
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作者 张皓云 王鲁娟 +2 位作者 王凤斌 刘红兵 苏文霞 《实验技术与管理》 CAS 北大核心 2015年第12期66-68,共3页
目的:构建稳定表达miR-17-5p的PC12细胞株。方法:将质粒PEGFP-N1-vector空载体和PEGFPN1-miR-17-5p表达载体扩增、抽提,利用脂质体转染技术将质粒转染PC12细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白GFP表达,Real-time PCR检测转染PC12细胞miR-17... 目的:构建稳定表达miR-17-5p的PC12细胞株。方法:将质粒PEGFP-N1-vector空载体和PEGFPN1-miR-17-5p表达载体扩增、抽提,利用脂质体转染技术将质粒转染PC12细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白GFP表达,Real-time PCR检测转染PC12细胞miR-17-5p的表达。结果:荧光显微镜观察到空载组和miR-17-5p组细胞都有绿色荧光蛋白高表达,Real-time PCR检测稳定转染miR 17-5p后PC12细胞内miR-17-5p的表达较空载组明显升高(P<0.01)。结论:miR-17-5p在PC12细胞稳定表达,为进一步研究miR-17-5p对神经细胞的调制作用提供有用的细胞模型。 展开更多
关键词 微小RNA miR-17-5p PC12细胞
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转染基因miR-17-5p对PC12细胞增殖和功能的影响 被引量:1
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作者 王鲁娟 刘红兵 +2 位作者 王凤斌 张皓云 谭春艳 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期387-392,共6页
目的:观察基因miR-17-5p转染对体外培养PC12细胞增殖和功能的影响。方法:用质粒PEGFP-N1-vector空载体和PEGFP-N1-miR-17-5p表达载体转染正常的PC12细胞,将细胞分为对照组、空载组、miR-17-5p组。倒置显微镜观察PC12细胞形态学改变,CCK-... 目的:观察基因miR-17-5p转染对体外培养PC12细胞增殖和功能的影响。方法:用质粒PEGFP-N1-vector空载体和PEGFP-N1-miR-17-5p表达载体转染正常的PC12细胞,将细胞分为对照组、空载组、miR-17-5p组。倒置显微镜观察PC12细胞形态学改变,CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期分布,荧光分析法测定儿茶酚胺类(CA)递质的分泌量。结果:显微镜下,空载组细胞形态边缘清晰,细胞贴壁能力强,细胞密度高。miR-17-5p组可见部分细胞有损伤的表现,细胞肿胀圆缩,粘附能力下降,部分细胞裂解成碎片,漂浮于培养基中,细胞密度低。与对照组比较,空载组PC12细胞增殖率、细胞周期分布和CA递质含量无明显变化(P>0.05);与空载组比较,miR-17-5p组细胞增殖率明显降低(P<0.05);细胞处于G1期的百分比明显高于空载组(P<0.01),而处于S期、G2的细胞百分比低于空载组(P<0.05);CA分泌量明显降低(P<0.01)。结论:miR-17-5p基因的过表达对PC12细胞的结构和功能有损伤作用,抑制PC12细胞分裂增殖能力和CA分泌功能。 展开更多
关键词 miR-17-5p PC12细胞 儿茶酚胺 流式细胞术 细胞周期分布
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