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稳定感染HPV-16 E6-E7的人喉咽鳞癌FaDu细胞生物学特性观察 被引量:1
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作者 路武豪 郭文涛 +1 位作者 冯龙 娄卫华 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2016年第3期320-324,共5页
目的:观察稳定感染HPV-16 E6-E7对Fa Du细胞生物学行为的影响和调控。方法:全基因合成HPV-16E6-E7基因,将其与慢病毒载体p LV-EGFP-C在T4连接酶作用下连接。制备重组HPV-16 E6-E7慢病毒并感染Fa Du细胞。将细胞分3组:实验组(重组HPV-16 ... 目的:观察稳定感染HPV-16 E6-E7对Fa Du细胞生物学行为的影响和调控。方法:全基因合成HPV-16E6-E7基因,将其与慢病毒载体p LV-EGFP-C在T4连接酶作用下连接。制备重组HPV-16 E6-E7慢病毒并感染Fa Du细胞。将细胞分3组:实验组(重组HPV-16 E6-E7慢病毒稳定感染的Fa Du细胞)、载体对照组(慢病毒空载体稳定感染的Fa Du细胞)和空白对照组(未感染慢病毒的Fa Du细胞)。分别用CCK-8试剂盒检测各组细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况,Transwell侵袭实验检测细胞的体外侵袭能力。结果:获得稳定感染重组HPV-16 E6-E7慢病毒的Fa Du细胞,荧光显微镜下可见明亮的绿色荧光蛋白EGFP表达。整合HPV-16 E6-E7基因的Fa Du细胞增殖能力和侵袭力均增强,细胞凋亡率降低,S期和G_2/M期细胞增加,G_0/G_1期细胞减少(P<0.05)。结论:成功建立了HPV-16 E6-E7基因整合的Fa Du细胞。 展开更多
关键词 感染 HPV-16 人喉咽鳞癌 Fa Du细胞
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敲除DNA聚合酶β基因的人食管癌Eca9706细胞系的建立及其细胞生物学特性分析
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作者 冯龙 郭文涛 +2 位作者 路武豪 孙萨迦 董子明 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2014年第5期605-608,共4页
目的:建立敲除DNA聚合酶β( DNA polβ)基因的人食管癌Eca 9706细胞株,观察基因敲除细胞生物学行为的变化。方法:采用同源重组基因敲除方法,首先构建食管癌Eca9706细胞DNA polβ基因敲除载体,并将其导入Eca9706细胞,构建DNA po... 目的:建立敲除DNA聚合酶β( DNA polβ)基因的人食管癌Eca 9706细胞株,观察基因敲除细胞生物学行为的变化。方法:采用同源重组基因敲除方法,首先构建食管癌Eca9706细胞DNA polβ基因敲除载体,并将其导入Eca9706细胞,构建DNA polβ基因敲除细胞株。 PCR、RT-PCR、Western blot法检测DNA polβ基因敲除区段DNA存在及表达情况。流式细胞术和MTT法检测基因敲除细胞的细胞周期和生长速度。结果:筛选得到具有neo抗性的DNA polβ基因敲除Eca9706细胞,其基因组中DNA polβ基因区段已被敲除;RT-PCR和Western blot 检测不到DNA polβmRNA和蛋白表达。敲除DNA polβ基因的细胞生长速度缓慢,G2~M期细胞增多,S期细胞减少( t=3.882、3.869,P均<0.05)。结论:成功构建了食管癌Eca9706 DNA polβ基因敲除细胞模型。 展开更多
关键词 DNA聚合酶Β 基因敲除 食管癌 Eca9706细胞
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靶向HIV-1启动子的药物筛选系统的建立 被引量:1
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作者 郭文涛 马云云 +4 位作者 刘慧涛 李敏 靳静 马晶 赵国强 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2011年第1期94-97,共4页
目的:建立靶向HIV-1启动子的药物筛选系统。方法:将HIV-1启动子核心序列克隆入荧光素酶报告基因载体pGL4.17中,构建重组质粒pGL4.17-HIV-1P并转染H9细胞;分别用杜仲、黄芩、苦参及双黄连灌胃大鼠后采血,将含药血清分别作用于转染的H9细... 目的:建立靶向HIV-1启动子的药物筛选系统。方法:将HIV-1启动子核心序列克隆入荧光素酶报告基因载体pGL4.17中,构建重组质粒pGL4.17-HIV-1P并转染H9细胞;分别用杜仲、黄芩、苦参及双黄连灌胃大鼠后采血,将含药血清分别作用于转染的H9细胞,检测H9细胞荧光素酶活性。以灌胃生理盐水的大鼠血清处理的转染细胞为对照,以转染空质粒pGL4.17的H9细胞为空白对照。结果:6组荧光素酶活性差异有统计学意义(F=1820.333,P<0.001)。双黄连组转染细胞荧光素酶活性降低(P<0.05),杜仲、黄芩及苦参组转染细胞荧光素酶活性增高(P<0.05)。结论:初步构建了靶向HIV-1启动子的药物筛选系统,并推测双黄连具有抗HIV-1作用。 展开更多
关键词 HIV-1启动子 药物筛选 中药 报告基因载体
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