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长链非编码RNA LINC00973对上皮性卵巢癌迁移、侵袭和远端转移的促进作用及其分子机制
1
作者 夏云秀 张硕 +3 位作者 张桓海 王飞 董洪亮 杜静 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第4期866-878,共13页
目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC00973对上皮性卵巢癌迁移、侵袭和远端转移的影响,并阐明其分子机制。方法:将人卵巢癌SKOV3和OVCAR3细胞分为EF1a-FH空载体对照组、LINC00973 OE组、U6-shRNA空载体对照组(SHV组)和LINC00973 KD组。... 目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC00973对上皮性卵巢癌迁移、侵袭和远端转移的影响,并阐明其分子机制。方法:将人卵巢癌SKOV3和OVCAR3细胞分为EF1a-FH空载体对照组、LINC00973 OE组、U6-shRNA空载体对照组(SHV组)和LINC00973 KD组。分别转染插入无义序列的pLent-EF1a-FH-CMV-copGFP-P2A-Puro、LINC00973过表达、插入无义序列的pLentU6-shRNA-CMV-copGFP-P2A-Puro和LINC00973小发夹RNA(shRNA)慢病毒,经嘌呤霉素筛选得到稳定转染的SKOV3和OVCAR3细胞。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中目的基因mRNA表达水平,细胞划痕实验检测各组细胞迁移率,Transwell小室实验检测各组细胞穿膜细胞数。小鼠腹腔注射SKOV3野生型(WT组)、LINC00973 OE(LINC00973 OE组)和LINC00973 KD(LINC00973 KD组)细胞,构建上皮性卵巢癌腹腔种植转移模型,采用HE染色观察各组小鼠结肠和肝脏组织形态表现,RNA测序(RNA-seq)分析SHV和LINC00973 KD组SKOV3细胞差异基因,RT-qPCR法检测正常卵巢上皮细胞IOSE-80和上皮性卵巢癌SKOV3、A2780及OVCAR3细胞中LINC00973 mRNA表达水平,各组细胞中LINC00973、波形蛋白(Vimentin),蜗牛家族转录因子1(Snail)、Twist家族碱性螺旋-环-螺旋转录因子1(Twist)、锌指E盒结合蛋白1(ZEB1)、锌指E盒结合蛋白2(ZEB2),趋化因子CXCL8和基质金属蛋白酶(MMP)16 mRNA表达水平及各组小鼠肝脏和结肠组织中LINC00973、Vimentin和Twist mRNA表达水平。结果:与正常卵巢上皮IOSE-80细胞比较,上皮性卵巢癌SKOV3、OVCAR3和A2780细胞中LINC00973 mRNA表达水平均明显升高(P<0.01),SKOV3和OVCAR3细胞中LINC00973 mRNA表达水平最高,因此选择该2种细胞进行后续实验。SKOV3和OVCAR3细胞中,与对照组比较,LINC00973 OE组细胞中LINC00973 mRNA表达水平升高(P<0.01);与SHV组比较,LINC00973 KD组细胞中LINC00973 mRNA表达水平降低(P<0.05或P<0.01),表明SKOV3和OVCAR3 LINC00973过表达及敲低细胞系构建成功。在SKOV3细胞中,与对照组比较,LINC00973 OE组细胞中Vimentin和Twist mRNA表达水平升高(P<0.05或P<0.01),Snail mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05);与SHV组比较,LINC00973 KD组细胞中Vimentin、Snail和Twist mRNA表达水平降低(P<0.01)。在OVCAR3细胞中,与对照组比较,LINC00973 OE组细胞中Vimentin、Snail和Twist mRNA表达水平升高(P<0.01);与SHV组比较,LINC00973 KD组细胞中Vimentin、Snail和Twist mRNA表达水平降低(P<0.01)。细胞划痕实验,在SKOV3和OVCAR3细胞中,与对照组比较,LINC00973 OE组细胞划痕愈合率均明显升高(P<0.01);与SHV组比较,LINC00973 KD组细胞划痕愈合率均明显降低(P<0.01)。Transwell小室实验,在SKOV3和OVCAR3细胞中,与对照组比较,LINC00973 OE组穿膜细胞数均明显增加(P<0.01);与SHV组比较,LINC00973 KD组穿膜细胞数均明显减少(P<0.01)。与WT组比较,LINC00973 OE组小鼠腹腔形成的结节数增多,肝脏表面粗糙,有多处结节形成,肠系膜和结肠表面也有结节形成,结肠组织中LINC00973、Vimentin和Twist m RNA表达水平均升高(P<0.01);与WT组比较,LINC00973 KD组小鼠腹腔无结节形成,肝脏表面光滑、无结节,且肝脏组织中LINC00973、Vimentin和Twist m RNA表达水平降低(P<0.01),肠系膜和结肠表面也无结节形成。HE染色,与WT组比较,LINC00973 OE组小鼠肝脏和结肠出现多处病变,表现为细胞大小不一、形状不规则、细胞边界不清,细胞核分裂增多,细胞质出现深浅不一的红色;LINC00973 KD组小鼠肝脏和结肠组织细胞排列整齐、形状规则,细胞核和细胞质分布均匀。RNA-seq测序,与SHV组比较,LINC00973 KD组未富集到与肿瘤转移相关的关键信号通路,而与肿瘤转移相关的基因CXCL8、MMP16、ZEB1和ZEB2转录水平降低。RTq PCR法,与对照组比较,LINC00973 OE组细胞中ZEB1、ZEB2、CXCL8和MMP16 m RNA表达水平明显升高(P<0.01);与SHV组比较,LINC00973 KD组细胞中ZEB1、ZEB2、CXCL8和MMP16的m RNA表达水平明显降低(P<0.01)。结论:LINC00973可以上调转移相关因子Vimentin、Snail、Twist、ZEB1、ZEB2、CXCL8和MMP16表达,促进上皮性卵巢癌的迁移、侵袭和远端转移。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 转移 LINC00973 实时荧光定量PCR 基质金属蛋白酶
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卵巢抵抗综合征和早发性卵巢功能不全诊断与个体化管理进展
2
作者 尚丹丹 刘萍 +2 位作者 刘利贞 庞益伟 周超 《实用医学杂志》 北大核心 2025年第1期146-152,共7页
卵巢抵抗综合征(ROS)与早发性卵巢功能不全(POI)同属于高促性腺激素性闭经,两者存在相似的临床特点,通常较难鉴别,ROS易被误诊为POI,给后续治疗带来极大挑战。因此,了解ROS和POI的病因、临床特点和诊断标准,尽早明确诊断并制定合理的治... 卵巢抵抗综合征(ROS)与早发性卵巢功能不全(POI)同属于高促性腺激素性闭经,两者存在相似的临床特点,通常较难鉴别,ROS易被误诊为POI,给后续治疗带来极大挑战。因此,了解ROS和POI的病因、临床特点和诊断标准,尽早明确诊断并制定合理的治疗方案对于有生育要求的患者至关重要。该文系统、全面地探讨了ROS与POI的病因和发病机制、临床特点与诊断以及个体化管理等方面的研究进展,旨在为临床医师提供参考,以便尽早明确诊断,避免误诊误治,并通过个体化管理,帮助患者改善症状并实现生育愿望。 展开更多
关键词 卵巢抵抗综合征 早发性卵巢功能不全 诊断 个体化管理
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LINC00973通过hsa-miR-150-5p/ABCG5轴调控非小细胞肺癌多药耐药
3
作者 夏云秀 董洪亮 +4 位作者 刘翠兰 王飞 崔冰洁 陈微微 杜静 《中国病理生理杂志》 北大核心 2025年第3期433-443,共11页
目的:探讨长链非编码RNA LINC00973在非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)多药耐药中的作用及分子机制。方法:GEPIA数据库分析LINC00973在NSCLC中的表达水平及其与患者预后的关系,RT-qPCR检测永生化支气管上皮细胞和不同NS... 目的:探讨长链非编码RNA LINC00973在非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)多药耐药中的作用及分子机制。方法:GEPIA数据库分析LINC00973在NSCLC中的表达水平及其与患者预后的关系,RT-qPCR检测永生化支气管上皮细胞和不同NSCLC细胞系及化疗耐药NSCLC细胞中LINC00973的表达水平。构建LINC00973过表达或敲减的NSCLC细胞系,采用细胞划痕、Transwell及干性成球实验检测LINC00973对NSCLC细胞迁移侵袭能力和干性的影响;CCK-8实验检测LINC00973过表达或敲减后,化疗药和靶向药对NSCLC细胞半数抑制浓度的变化。RNA-seq分析LINC00973过表达后靶基因簇改变;LncBase Predicted v.2和TargetScan数据库分析LINC00973与靶基因共同结合的微小RNA(microRNA,miRNA);合成并转染目标miRNA-mimic/inhibitor至LINC00973过表达或敲减的NSCLC细胞中,RT-qPCR和Western blot实验检测LINC00973表达水平及其靶基因的mRNA和蛋白表达水平的变化。结果:GEPIA数据库分析结果显示,LINC00973在肺腺癌和肺鳞癌中表达上调,且与NSCLC患者不良预后相关;不同NSCLC细胞系及NSCLC化疗耐药细胞(A549/DDP和A549/5-FU细胞)中LINC00973表达上调。过表达LINC00973后A549和H520细胞的迁移侵袭能力和干性明显增强,对化疗药和靶向药的敏感性明显下降;敲减LINC00973后A549和H520细胞的迁移侵袭能力和干性明显减弱,对化疗药和靶向药的敏感性明显增强。RNA-seq结合RT-qPCR实验结果显示,过表达LINC00973的A549和H520细胞中,ATP结合盒转运蛋白G5(ATP-binding cassette transporter G5,ABCG5)表达上调,ABC转运体通道被激活。数据库分析结合细胞实验证实LINC00973通过竞争性结合hsa-miR-150-5p调控ABCG5的表达。结论:LINC00973通过与ABCG5竞争性结合hsa-miR-150-5p的方式,上调ABCG5的表达,进而激活ABC转运体通道并促进抗肿瘤药物外排,导致NSCLC产生多药耐药。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 多药耐药 LINC00973 微小RNA-150-5p ATP结合盒转运蛋白G5
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尿石素C对人急性髓系白血病HL-60细胞增殖、凋亡和自噬的影响及其机制
4
作者 于国兴 张鑫 +4 位作者 杜恒玮 崔冰洁 高娜 刘翠兰 杜静 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期908-916,共9页
目的:探讨尿石素C(UC)对急性髓系白血病(AML)HL-60细胞增殖、凋亡和自噬的影响,阐明其相关作用机制。方法:HL-60细胞分为不同浓度(0、20、40、60、80及100μmol·L^(-1))尿石素A(UA)、尿石素B(UB)和UC组,采用CCK-8法检测各组细胞增... 目的:探讨尿石素C(UC)对急性髓系白血病(AML)HL-60细胞增殖、凋亡和自噬的影响,阐明其相关作用机制。方法:HL-60细胞分为不同浓度(0、20、40、60、80及100μmol·L^(-1))尿石素A(UA)、尿石素B(UB)和UC组,采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性,光学显微镜观察不同浓度UC组细胞形态表现;HL-60细胞分为不同浓度(0、20、40及80μmol·L^(-1))UC组和3-甲基腺嘌呤(3-MA)联合不同浓度(0、20、40及80μmol·L^(-1))UC组,采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性。HL-60细胞分为对照组和不同浓度(20、40及80μmol·L^(-1))UC组,采用活/死细胞染色法检测各组死细胞率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,细胞自噬染色检测试剂盒[单丹磺酰戊二胺(MDC)法]检测各组细胞自噬情况,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中苄氯素1(Beclin 1)、自噬相关蛋白9(ATG9)和自噬相关蛋白7(ATG7)mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、活化的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、微管相关蛋白1轻链3(LC-3)、细胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)、AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)和磷酸化AMPK(p-AMPK)蛋白表达水平。结果:CCK-8法,培养24、48和72 h,分别与0μmol·L^(-1) UA、UB和UC组比较,不同浓度UA、UB和UC组细胞增殖活性均降低(P<0.05或P<0.01),且呈浓度和时间依赖性;48 h时,与UA和UB比较,UC半数抑制浓度(IC50)最低。细胞形态表现,与对照组比较,随着UC浓度升高,细胞间连接和细胞数量减少,细胞碎片增加。CCK-8法,与40和80μmol·L^(-1) UC组比较,3-MA联合40和80μmol·L^(-1) UC组细胞增殖活性升高(P<0.05或P<0.01)。活/死细胞染色,与对照组比较,40和80μmol·L^(-1) UC组死细胞率升高(P<0.01)。流式细胞术,与对照组比较,80μmol·L^(-1) UC组细胞凋亡率升高(P<0.01)。MDC法,与对照组比较,随着UC浓度升高,不同浓度UC组细胞绿色荧光逐渐增强。RT-qPCR法,与对照组比较,80μmol·L^(-1) UC组细胞中Beclin 1、ATG9和ATG7 mRNA表达水平升高(P<0.01)。Western blotting法,与对照组比较,20、40和80μmol·L^(-1) UC组细胞中Cleaved Caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.01),80μmol·L^(-1) UC组细胞中膜型LC3/胞浆型LC3(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ)比值升高(P<0.05),40和80μmol·L^(-1) UC组细胞中p-AMPK/AMPK及p-ERK/ERK比值升高(P<0.01)。结论:UC可抑制人AML HL-60细胞增殖,诱导其细胞凋亡和自噬,并可提高细胞中ERK和AMPK蛋白磷酸化水平。 展开更多
关键词 尿石素C 白血病细胞 细胞增殖 细胞凋亡 细胞自噬
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电针对神经病理性疼痛大鼠背根神经节及脊髓P2X3受体的影响 被引量：7
5
作者 王万胜 屠文展 +1 位作者 奚海艳 蒋松鹤 《中国疼痛医学杂志》 CAS CSCD 2015年第2期97-101,共5页
目的：探究电针对坐骨神经挤压损伤（chronic constriction injury,CCI）所致神经病理性疼痛大鼠坐骨神经节（DRG）及脊髓P2X3受体的影响并比较同侧电针与对侧电针的差异。方法：选取40只成年雄性SD大鼠,随机分为假模组、模型对照组、... 目的：探究电针对坐骨神经挤压损伤（chronic constriction injury,CCI）所致神经病理性疼痛大鼠坐骨神经节（DRG）及脊髓P2X3受体的影响并比较同侧电针与对侧电针的差异。方法：选取40只成年雄性SD大鼠,随机分为假模组、模型对照组、对侧电针组、同侧电针组。电针组于造模后第7天给予电针治疗,连续电针7天。所有动物在造模前（第0天）及造模后3、7、10、14天测量机械缩足阈值（MWT）和热缩足反射潜伏期（TWL）。造模14天后运用免疫荧光技术检测各组大鼠L4~6DRG细胞及L4~5脊髓P2X3受体表达情况。结果：CCI造模后大鼠MWT值和TWL值出现明显降低,电针治疗后,MWT值和TWL值均有不同程度的提高（P〈0.01）,且同侧电针组与对侧电针组无明显差异。CCI损伤后DRG及脊髓P2X3表达上调,对侧电针组和同侧电针组蛋白阳性神经元总数少于模型对照组（P〈0.01）。结论：电针可以减轻外周神经损伤后引起的痛觉过敏,电针的镇痛作用可能是通过降低DRG及脊髓的P2X3受体表达来实现的,并且对侧电针与同侧电针有类似的镇痛作用。 展开更多
关键词 电针 神经病理性疼痛 背根神经节 脊髓 P2X3受体
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Seminar教学法对本科护生临床能力的影响 被引量：14
6
作者 王辉 孙红英 张丽 《中国护理管理》 2011年第8期51-53,共3页
目的:对护理实践教学方法进行探讨,为本科护生临床护理能力的培养提供参考。方法:选取2006级护理本科生182名,随机分成两组,对实验组见习进行Seminar教学法干预,见习后对两组分别采用护理表现六维量表进行调查,同时对期末考试成绩进行... 目的:对护理实践教学方法进行探讨,为本科护生临床护理能力的培养提供参考。方法:选取2006级护理本科生182名,随机分成两组,对实验组见习进行Seminar教学法干预,见习后对两组分别采用护理表现六维量表进行调查,同时对期末考试成绩进行分析比较。结果:实验组学生的单科病例分析成绩、总成绩及护理专业表现方面与对照组学生比较有统计学差异。结论:新的实践教学方法能够提高护生的临床护理、人际沟通、计划与评估等能力。 展开更多
关键词 临床能力 SEMINAR教学法 护理教育
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坎地沙坦靶向TRAIL-DR5介导的AMPK信号通路减少宫颈癌细胞自噬保护的研究 被引量：1
7
作者 齐广涛 张丽丽 +2 位作者 郭庆枝 王莉 李丽 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2021年第4期647-651,共5页
研究坎地沙坦靶向TRAIL-DR5介导的AMPK信号通路对宫颈癌细胞的自噬保护作用的影响。以人宫颈癌HeLa细胞作为研究对象,测定不同浓度坎地沙坦对HeLa细胞TRAIL-DR5、AMPK、ATG4A、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、Bax、Bcl-2水平的影响。与0.0μmol/L相比,1... 研究坎地沙坦靶向TRAIL-DR5介导的AMPK信号通路对宫颈癌细胞的自噬保护作用的影响。以人宫颈癌HeLa细胞作为研究对象,测定不同浓度坎地沙坦对HeLa细胞TRAIL-DR5、AMPK、ATG4A、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、Bax、Bcl-2水平的影响。与0.0μmol/L相比,15.0、30.0、60.0μmol/L坎地沙坦处理后,Bax、TRAIL-DR5水平升高(P<0.05),Bcl-2、ATG4A、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p-AMPK水平降低(P<0.05)且呈浓度依赖性。坎地沙坦能够抑制HeLa细胞增殖,促进凋亡,可能与TRAIL-DR5介导的AMPK信号通路减轻HeLa细胞的自噬保护作用相关。 展开更多
关键词 坎地沙坦 靶向 凋亡诱导 死亡受体5 腺苷酸活化蛋白激酶
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丹参酮ⅡA磺酸钠通过降低整合素β3的表达抑制宫颈癌HeLa细胞迁移 被引量：7
8
作者 李军峰 沈净净 +1 位作者 张冬冬 张英姿 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1276-1280,共5页
目的:探讨丹参酮ⅡA磺酸钠(sodium tanshinone ⅡA sulfonate,STS)对宫颈癌HeLa细胞迁移的影响及其机制。方法:Transwell迁移实验检测不同浓度STS、整合素β3特异性抗体LM609和转染过表达整合素β3质粒对宫颈癌HeLa细胞迁移的影响,Weste... 目的:探讨丹参酮ⅡA磺酸钠(sodium tanshinone ⅡA sulfonate,STS)对宫颈癌HeLa细胞迁移的影响及其机制。方法:Transwell迁移实验检测不同浓度STS、整合素β3特异性抗体LM609和转染过表达整合素β3质粒对宫颈癌HeLa细胞迁移的影响,Western blotting法检测不同浓度STS和STS刺激不同时间对HeLa细胞整合素β3表达的影响,CCK-8法检测STS对HeLa细胞活力的影响。结果:STS以浓度依赖的方式降低HeLa细胞的迁移(P<0.01),LM609显著降低HeLa细胞迁移率(P<0.01),STS刺激转染过表达整合素β3质粒HeLa细胞的迁移率较单一STS刺激和STS刺激转染空质粒HeLa细胞的迁移率显著增加(P<0.01);STS以浓度和时间依赖的方式降低HeLa细胞整合素β3的表达(P<0.05);不同浓度STS刺激的HeLa细胞存活数和空白对照组相比无显著差异(P>0.05)。结论:STS可减少宫颈癌HeLa细胞整合素β3的表达,STS可显著减少HeLa细胞的迁移,整合素β3特异性抗体LM609也可显著降低HeLa细胞的迁移,转染过表达整合素β3质粒则可减少STS对HeLa细胞迁移的抑制,STS可能通过减少整合素β3的表达抑制HeLa细胞迁移,这为进一步阐明STS抗肿瘤的分子机制和STS临床应用提供实验依据。 展开更多
关键词 丹参酮IIA磺酸钠 宫颈癌 He La细胞 整合素Β3
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miR-200c在子宫内膜腺癌血清及组织中的表达及临床意义
9
作者 于静 姜爱丽 +2 位作者 张小妍 李丰玲 李连芹 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2020年第8期1054-1058,共5页
目的探讨miR-200c在子宫内膜腺癌血清及组织中的表达及临床意义。方法采用RT-PCR方法检测120例子宫内膜腺癌患者和100例对照组增生期或萎缩型子宫内膜患者血清和组织中的miR-200c表达水平,分析血清和组织中的miR-200c与子宫内膜腺癌临... 目的探讨miR-200c在子宫内膜腺癌血清及组织中的表达及临床意义。方法采用RT-PCR方法检测120例子宫内膜腺癌患者和100例对照组增生期或萎缩型子宫内膜患者血清和组织中的miR-200c表达水平,分析血清和组织中的miR-200c与子宫内膜腺癌临床病理特征的关系,应用ROC曲线评价组织和血清中miR-200c对子宫内膜腺癌诊断的灵敏度和特异度。结果子宫内膜腺癌组织和血清中miR-200c相对表达量显著高于对照组(P <0.05)。miR-200c在临床晚期、深肌层浸润和存在淋巴结转移的子宫内膜腺癌组织中表达明显下降(P <0.05),而在临床晚期、深肌层浸润和存在淋巴结转移的子宫内膜腺癌患者血清中表达增高(P <0.05)。miR-200c血清和组织中诊断子宫内膜腺癌的敏感度分别为:76.5%和77.1%;特异性分别为44.7%和30.73%。结论 miR-200c作为诊断子宫内膜腺癌的分子标志物敏感性较高,但特异度低。 展开更多
关键词 MIR-200C 子宫内膜腺癌 临床病理特征 分子标志物 敏感性 特异度
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