Hedgehog信号通路磷酸化修饰在肿瘤发生发展中作用的研究进展

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作者 张鑫 王飞 +1 位作者 崔冰洁 杜静 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第2期526-533,共8页

Hedgehog (HH)信号通路参与脊椎动物和无脊椎动物的诸多发育过程,包括胚胎发生、干细胞更新、组织再生、肿瘤的发生发展及化疗耐药等。HH信号通路中关键组分的过度激活和异常表达与多种恶性肿瘤的发生发展有关。磷酸化修饰在正常细胞的... Hedgehog (HH)信号通路参与脊椎动物和无脊椎动物的诸多发育过程,包括胚胎发生、干细胞更新、组织再生、肿瘤的发生发展及化疗耐药等。HH信号通路中关键组分的过度激活和异常表达与多种恶性肿瘤的发生发展有关。磷酸化修饰在正常细胞的蛋白质活性与功能调节中发挥重要作用,并且磷酸化-去磷酸化级联反应失调与肿瘤密切相关。HH信号通路的异常激活也与蛋白质磷酸化修饰有关,其调控的复杂机制还需进一步探索。本文对恶性肿瘤中HH信号通路以及蛋白磷酸化修饰的研究进展进行综述,重点讨论磷酸化修饰对HH信号通路活性的调控作用及其对恶性肿瘤发生发展的影响,以期为靶向磷酸酶/去磷酸酶药物的深入研发和临床应用提供理论基础。 展开更多

关键词 肿瘤 HEDGEHOG信号通路 蛋白磷酸酶 去磷酸化

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磁共振髓鞘探针Gd-DTDAS在多发性硬化大鼠髓鞘损伤模型中的实验研究

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作者 刘彩云 邵翠杰 +5 位作者 翁娜 李国栋 黄丹琪 刘珈 宾莉 王旭 《磁共振成像》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期122-128,共7页

目的探讨MRI对比剂Gd-DTDAS在多发性硬化(multiple sclerosis,MS)大鼠髓鞘损伤模型中的应用价值。材料与方法细胞实验中,将少突胶质细胞前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OLN-93)随机分为对照组2(n=3)和溶血磷脂酰胆碱(lysopho... 目的探讨MRI对比剂Gd-DTDAS在多发性硬化(multiple sclerosis,MS)大鼠髓鞘损伤模型中的应用价值。材料与方法细胞实验中,将少突胶质细胞前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OLN-93)随机分为对照组2(n=3)和溶血磷脂酰胆碱(lysophosphatidylcholine,LPC)组(n=3),LPC组细胞置于无菌共聚焦培养皿中与1 mL 800μM LPC溶液共孵育30 min。通过噻唑蓝比色法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)评价细胞毒性,计算OLN-93与Gd-DTDAS共孵育24 h后的吸光度和存活率;细胞摄取实验中,对照组2和LPC组对比,定量两组细胞对Gd-DTDAS的摄取值以及相应荧光强度的变化。动物实验中,将6~8周龄SD大鼠随机分为对照组(n=12)与实验组(n=18),实验组大鼠左侧胼胝体注射1%LPC溶液(1%LPC溶于PBS)。造模后(1、3、7 d)进行行为学观察,并在注射后7天进行T1WI及T2WI序列扫描。根据MRI异常信号部位进行大鼠脑组织Gd-DTDAS染色(n=6)以及浸泡(n=6),评估Gd-DTDAS与髓鞘部位的结合情况,其中,染色实验分组命名为对照组3与实验组3,浸泡实验分组命名为对照组4与实验组4;通过尾静脉注射Gd-DTDAS,MR评估实验组(n=6)注射Gd-DTDAS前后大脑髓鞘变化。结果细胞毒性实验中,当Gd-DTDAS浓度增加到400μM时,OLN-93细胞的存活率约为95%,细胞存活率差异无统计学意义(t=4.20,P>0.05)。细胞摄取实验中,两组细胞均能摄取Gd-DTDAS,LPC组摄取量显著低于对照组2,差异具有统计学意义(t=31.75,P<0.01)。动物体外实验中,与对照组3比较,Gd-DTDAS染色的实验组3脑组织切片荧光强度显著下降,差异有统计学意义(U=9,P<0.01);Gd-DTDAS浸泡中,对照组4(n=6)与实验组4(n=6)脑组织切片浸泡后MRI分辨率显著升高,差异有统计学意义(对照组4,t=8.76,P<0.01)(实验组4,t=2.89,P<0.01)。体内实验中,与尾静脉注射前比较,注射后胼胝体区域MRI T1maps弛豫性显著降低(t=14.46,P<0.01)。结论髓鞘探针Gd-DTDAS能够更好地结合髓磷脂丰富的区域,髓鞘靶向MRI显像更佳,能特异性显示多发性硬化髓鞘损伤部位。 展开更多

关键词 自身免疫性疾病 多发性硬化 髓鞘探针 分子成像 磁共振成像

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NCTD通过调控PPP5C影响人白血病细胞增殖和凋亡的机制研究

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作者 张鑫 崔冰洁 +4 位作者 于国兴 王飞 赵靓 高娜 杜静 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2024年第4期11-19,共9页

目的研究去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)通过调控磷酸蛋白磷酸酶催化亚基5C(protein phosphatase 5 catalytic subunit,PPP5C)对人白血病NB4、K562细胞增殖、凋亡能力的影响及机制的初步研究。方法体外培养NB4、K562细胞,电转PC3.1和P... 目的研究去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)通过调控磷酸蛋白磷酸酶催化亚基5C(protein phosphatase 5 catalytic subunit,PPP5C)对人白血病NB4、K562细胞增殖、凋亡能力的影响及机制的初步研究。方法体外培养NB4、K562细胞,电转PC3.1和PPP5C-PC3.1质粒至NB4、K562细胞,遗传霉素(geneticin,G418)筛选NB4、K562稳转细胞系。Western blot和RT-qPCR实验检测PPP5C蛋白和mRNA表达水平。采用CCK-8、迁移实验、Live&Dead^(TM)动物细胞活力/毒性检测试剂盒分别检测NB4、K562细胞的增殖能力、迁移能力和死细胞、活细胞的数量。将NB4、K562稳转细胞分为0μg/mL NCTD组和不同浓度NCTD组,分别用含有0、8、16、32μg/mL NCTD的1640培养基培养;Live&Dead^(TM)动物细胞活力/毒性检测试剂盒检测死细胞率并对细胞形态进行拍照;Western blot检测各组细胞caspase 3、Cleaved caspase 3、JNK、p-JNK、p38、p-p38和α-Tubulin蛋白表达水平。结果NB4、K562细胞转染后PPP5C表达水平显著提高,细胞增殖能力、迁移能力、抗凋亡能力显著增强;与0μg/mL NCTD组相比,NCTD各浓度组会促进细胞凋亡,且呈剂量依赖性;PPP5C过表达拮抗NCTD对白血病细胞的杀伤作用;机制研究发现PPP5C通过去磷酸化修饰降低p-JNK的蛋白水平进而调控与细胞凋亡相关蛋白Cleaved caspase 3的表达。结论NCTD能够通过调控PPP5C分子促进NB4、K562细胞凋亡,抑制细胞的增殖。 展开更多

关键词 PPP5C 去甲斑蝥素 人白血病细胞 增殖 凋亡

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METTL3促进非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和EMT

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作者 金丹 邵爽 +1 位作者 李睿 郭纪伟 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第5期928-937,共10页

目的探讨甲基转移酶样3(METTL3)作为m^(6)A修饰的甲基转移酶对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、克隆形成和迁移能力的影响。方法通过生物信息学探讨METTL3表达水平与NSCLC患者预后的关系,通过RT-PCR、Western blot、m^(6)A定量检测、CCK-... 目的探讨甲基转移酶样3(METTL3)作为m^(6)A修饰的甲基转移酶对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、克隆形成和迁移能力的影响。方法通过生物信息学探讨METTL3表达水平与NSCLC患者预后的关系,通过RT-PCR、Western blot、m^(6)A定量检测、CCK-8、免疫荧光、克隆形成和细胞划痕实验等探讨敲减或高表达METTL3后NSCLC细胞METTL3 mRNA和蛋白水平、m^(6)A水平、增殖、克隆形成、迁移及凋亡能力的变化。结果生物信息学分析表明METTL3在NSCLC中高表达且与患者生存期呈负相关。RT-PCR和Western blot实验显示METTL3在NSCLC细胞系中高表达。在A549细胞中,高表达METTL3后显著增加NSCLC细胞m^(6)A水平并促进其增殖、生长、肿瘤形成和细胞迁移,且抑制细胞凋亡并上调波形蛋白(Vimentin),下调E-钙黏蛋白(E-cadherin)的mRNA和蛋白表达水平(P<0.01),从而促进A549细胞的上皮-间质转化进程(EMT)。但在A549细胞中靶向敲除METTL3则得到相反结果(P<0.01)。结论过表达METTL3增加NSCLC细胞m^(6)A水平并促进其增殖、克隆形成和细胞迁移能力,为今后以METTL3为靶点的NSCLC早期诊断与靶向药物开发奠定理论基础。 展开更多

关键词 METTL3 m^(6)A 增殖 迁移 EMT NSCLC

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NR2F2过表达对人卵巢癌SKOV3细胞生物学行为的影响

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作者 张硕 夏云秀 +6 位作者 陈微微 董洪亮 崔冰洁 刘翠兰 刘志强 王飞 杜静 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第1期58-67,共10页

目的:探讨核受体亚家族2F组成员2(NR2F2)对人卵巢癌SKOV3细胞生物学行为的影响,并阐明其分子机制,为卵巢癌的临床治疗提供新的思路。方法:采用基因表达谱交互式分析(GEPIA)数据库分析卵巢组织中NR2F2基因表达水平,并分析其与卵巢癌患者... 目的:探讨核受体亚家族2F组成员2(NR2F2)对人卵巢癌SKOV3细胞生物学行为的影响,并阐明其分子机制,为卵巢癌的临床治疗提供新的思路。方法:采用基因表达谱交互式分析(GEPIA)数据库分析卵巢组织中NR2F2基因表达水平,并分析其与卵巢癌患者临床预后的相关性。将人卵巢癌SKOV3细胞分为对照组和NR2F2过表达组(NR2F2 OE组),待细胞密度达到70%时,分别转染mCherry对照病毒和NR2F2 OE过表达病毒,48 h后通过嘌呤霉素(puro)筛选稳定转染的SKOV3细胞系。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测2组细胞转染效率,RT-qPCR法检测2组细胞中NR2F2和性别决定区Y-box 2(SOX2)mRNA表达水平,Western blotting法检测2组细胞中NR2F2、SOX2、三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)和程序性细胞死亡配体1(PD-L1)蛋白表达水平。CCK-8法检测2组细胞增殖活性,细胞划痕实验检测2组细胞迁移率,Transwell小室实验检测2组穿膜细胞数,成球实验检测2组细胞成球数,外周血单核细胞(PBMCs)杀伤肿瘤细胞活性实验检测2组存活肿瘤细胞的相对密度,CCK-8法检测紫杉醇(PTX)和卡铂(CBP)对2组细胞的半数抑制浓度(IC_(50))。结果:与正常卵巢组织比较,卵巢肿瘤组织中NR2F2 mRNA表达水平降低(P<0.05),并随卵巢肿瘤临床病理分级提高而降低;NR2F2 mRNA表达水平较高的患者临床预后较好。成功构建过表达NR2F2的SKOV3细胞,与对照组比较,NR2F2 OE组细胞中NR2F2 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.001);CCK-8实验,与对照组比较,不同时间点(1、2、3和4 d)NR2F2 OE组细胞增殖活性均降低(P<0.05或P<0.01);细胞划痕实验,与对照组比较,NR2F2 OE组细胞迁移率降低(P<0.001);Transwell小室实验,与对照组比较,NR2F2 OE组穿膜细胞数减少(P<0.01);与对照组比较,NR2F2 OE组细胞成球数减少(P<0.05),SKOV3细胞中SOX2 mRNA(P<0.01)和蛋白(P<0.001)表达水平均降低;与对照组比较,NR2F2 OE组存活肿瘤细胞的相对密度降低,但差异无统计学意义(P>0.05),PD-L1蛋白表达水平降低(P<0.05);与对照组比较,NR2F2 OE组细胞增殖活性减弱(P<0.05),对PTX和CBP的药物敏感性增强,PTX的IC_(50)明显减小,CBP的IC_(50)因其药物浓度过高未能计算;ABCG2蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:NR2F2过表达可抑制人卵巢癌SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭能力,降低SOX2、PD-L1和ABCG2蛋白表达水平,抑制人卵巢癌SKOV3细胞的干性和免疫逃逸能力,增强人卵巢癌SKOV3细胞对PTX和CBP的敏感性。 展开更多

关键词 核受体亚家族2F组成员2 卵巢肿瘤 肿瘤干性 免疫逃逸 耐药

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调控NSUN2表达对肺腺癌A549细胞恶性生物学行为及YAP表达的影响

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作者 邵爽 李睿 +2 位作者 孟玮 金丹 郭纪伟 《郑州大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第2期198-202,共5页

目的:探讨调控NOL1/NOP2/Sun域家族成员2(NSUN2)表达对肺腺癌细胞恶性生物学行为及YAP表达的影响。方法:将对数生长期的A549细胞分为4组,对照组采用Lipofectamine 3000转染pcDNA3.1+shNC,NSUN2组转染pcDNA3.1-NSUN2+shNC,shYAP组转染pcD... 目的:探讨调控NOL1/NOP2/Sun域家族成员2(NSUN2)表达对肺腺癌细胞恶性生物学行为及YAP表达的影响。方法:将对数生长期的A549细胞分为4组,对照组采用Lipofectamine 3000转染pcDNA3.1+shNC,NSUN2组转染pcDNA3.1-NSUN2+shNC,shYAP组转染pcDNA3.1+shYAP,NSUN2+shYAP组转染pcDNA3.1-NSUN2+shYAP。48 h后,CCK-8法检测细胞增殖能力,检测细胞克隆形成能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室法检测细胞侵袭能力,RT-PCR和Western blot法检测NSUN2、YAP、E-cadherin、Vimentin mRNA和蛋白的表达。采用RNA免疫沉淀和RNA Pulldown实验验证A549细胞中内源性NSUN2蛋白与YAP mRNA的相互作用。结果:上调NSUN2表达,细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力提高,E-cadherin表达降低,Vimentin表达升高(P<0.05);下调YAP表达,细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力降低,E-cadherin表达提高,Vimentin表达降低(P<0.05);两者具有拮抗作用(P<0.05)。结论:NSUN2通过上调YAP表达促进肺腺癌A549细胞的增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化能力。 展开更多

关键词 NSUN2 YAP 肺腺癌 A549细胞

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小鼠肝癌痛模型脊髓组织的蛋白质组学分析

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作者 李海伦 张璇 +2 位作者 田思涵 徐英江 邵翠杰 《中国医学前沿杂志(电子版)》 北大核心 2025年第3期64-72,共9页

目的 通过鉴定小鼠肝癌痛模型脊髓组织中的差异表达蛋白(differentially expressed proteins,DEPs),深入探讨肝癌痛的潜在机制,并寻找肝癌痛治疗的潜在靶点,以期为改善肝癌患者的生活质量提供科学依据。方法 将Hepa1-6细胞接种到小鼠皮... 目的 通过鉴定小鼠肝癌痛模型脊髓组织中的差异表达蛋白(differentially expressed proteins,DEPs),深入探讨肝癌痛的潜在机制,并寻找肝癌痛治疗的潜在靶点,以期为改善肝癌患者的生活质量提供科学依据。方法 将Hepa1-6细胞接种到小鼠皮下形成皮下移植瘤,60只雄性C57BL/6J小鼠随机分为sham组和实验组,每组各30只,实验组小鼠肝内接种瘤块组织建立肝癌痛小鼠模型。采用液相色谱-质谱串联分析对胸脊髓全蛋白进行分析。DEPs采用基因本体(Gene Ontology,GO)和京都组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析,并采用蛋白免疫印迹(western blotting)和实时荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)进行验证。结果 肝癌痛小鼠表现出竖毛、探索行为减少和腹部间歇性收缩。在5393个蛋白中共鉴定出89个DEPs,其中上调41个,下调48个。GO富集分析表明,DEPs主要参与分解代谢过程、内质网功能和共翻译转运功能。KEGG通路富集分析表明,KEGG通路涉及细胞分解代谢过程、信号转导及其相互作用、蛋白翻译折叠、疾病、氨基酸代谢等一系列通路。小窝蛋白1(caveolin1,CAV1)、受体表达蛋白5(receptor expressed proteins5,REEP5)、基质交感分子2(matrix sympathetic molecule2,STIM2)、溶酶体表面膜蛋白1(lysosome surface facial membrane protein1,LAMTOR1)等内质网相关蛋白的表达变化,通过PCR和Western blotting分析进一步验证编码上述蛋白的mRNA及相关蛋白的表达水平。结论 本研究为了解肝癌痛的机制提供了有价值的信息,并揭示了内质网相关蛋白在肝癌痛中的重要作用,为癌症疼痛的治疗提供了潜在的靶点。 展开更多

关键词 癌性肝痛 脊髓 内质网 差异表达蛋白

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长链非编码RNA LINC00973对上皮性卵巢癌迁移、侵袭和远端转移的促进作用及其分子机制

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作者 夏云秀 张硕 +3 位作者 张桓海 王飞 董洪亮 杜静 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第4期866-878,共13页

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC00973对上皮性卵巢癌迁移、侵袭和远端转移的影响,并阐明其分子机制。方法:将人卵巢癌SKOV3和OVCAR3细胞分为EF1a-FH空载体对照组、LINC00973 OE组、U6-shRNA空载体对照组(SHV组)和LINC00973 KD组。... 目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC00973对上皮性卵巢癌迁移、侵袭和远端转移的影响,并阐明其分子机制。方法:将人卵巢癌SKOV3和OVCAR3细胞分为EF1a-FH空载体对照组、LINC00973 OE组、U6-shRNA空载体对照组(SHV组)和LINC00973 KD组。分别转染插入无义序列的pLent-EF1a-FH-CMV-copGFP-P2A-Puro、LINC00973过表达、插入无义序列的pLentU6-shRNA-CMV-copGFP-P2A-Puro和LINC00973小发夹RNA(shRNA)慢病毒,经嘌呤霉素筛选得到稳定转染的SKOV3和OVCAR3细胞。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中目的基因mRNA表达水平,细胞划痕实验检测各组细胞迁移率,Transwell小室实验检测各组细胞穿膜细胞数。小鼠腹腔注射SKOV3野生型(WT组)、LINC00973 OE(LINC00973 OE组)和LINC00973 KD(LINC00973 KD组)细胞,构建上皮性卵巢癌腹腔种植转移模型,采用HE染色观察各组小鼠结肠和肝脏组织形态表现,RNA测序(RNA-seq)分析SHV和LINC00973 KD组SKOV3细胞差异基因,RT-qPCR法检测正常卵巢上皮细胞IOSE-80和上皮性卵巢癌SKOV3、A2780及OVCAR3细胞中LINC00973 mRNA表达水平,各组细胞中LINC00973、波形蛋白(Vimentin),蜗牛家族转录因子1(Snail)、Twist家族碱性螺旋-环-螺旋转录因子1(Twist)、锌指E盒结合蛋白1(ZEB1)、锌指E盒结合蛋白2(ZEB2),趋化因子CXCL8和基质金属蛋白酶(MMP)16 mRNA表达水平及各组小鼠肝脏和结肠组织中LINC00973、Vimentin和Twist mRNA表达水平。结果:与正常卵巢上皮IOSE-80细胞比较,上皮性卵巢癌SKOV3、OVCAR3和A2780细胞中LINC00973 mRNA表达水平均明显升高(P<0.01),SKOV3和OVCAR3细胞中LINC00973 mRNA表达水平最高,因此选择该2种细胞进行后续实验。SKOV3和OVCAR3细胞中,与对照组比较,LINC00973 OE组细胞中LINC00973 mRNA表达水平升高(P<0.01);与SHV组比较,LINC00973 KD组细胞中LINC00973 mRNA表达水平降低(P<0.05或P<0.01),表明SKOV3和OVCAR3 LINC00973过表达及敲低细胞系构建成功。在SKOV3细胞中,与对照组比较,LINC00973 OE组细胞中Vimentin和Twist mRNA表达水平升高(P<0.05或P<0.01),Snail mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05);与SHV组比较,LINC00973 KD组细胞中Vimentin、Snail和Twist mRNA表达水平降低(P<0.01)。在OVCAR3细胞中,与对照组比较,LINC00973 OE组细胞中Vimentin、Snail和Twist mRNA表达水平升高(P<0.01);与SHV组比较,LINC00973 KD组细胞中Vimentin、Snail和Twist mRNA表达水平降低(P<0.01)。细胞划痕实验,在SKOV3和OVCAR3细胞中,与对照组比较,LINC00973 OE组细胞划痕愈合率均明显升高(P<0.01);与SHV组比较,LINC00973 KD组细胞划痕愈合率均明显降低(P<0.01)。Transwell小室实验,在SKOV3和OVCAR3细胞中,与对照组比较,LINC00973 OE组穿膜细胞数均明显增加(P<0.01);与SHV组比较,LINC00973 KD组穿膜细胞数均明显减少(P<0.01)。与WT组比较,LINC00973 OE组小鼠腹腔形成的结节数增多,肝脏表面粗糙,有多处结节形成,肠系膜和结肠表面也有结节形成,结肠组织中LINC00973、Vimentin和Twist m RNA表达水平均升高(P<0.01);与WT组比较,LINC00973 KD组小鼠腹腔无结节形成,肝脏表面光滑、无结节,且肝脏组织中LINC00973、Vimentin和Twist m RNA表达水平降低(P<0.01),肠系膜和结肠表面也无结节形成。HE染色,与WT组比较,LINC00973 OE组小鼠肝脏和结肠出现多处病变,表现为细胞大小不一、形状不规则、细胞边界不清,细胞核分裂增多,细胞质出现深浅不一的红色;LINC00973 KD组小鼠肝脏和结肠组织细胞排列整齐、形状规则,细胞核和细胞质分布均匀。RNA-seq测序,与SHV组比较,LINC00973 KD组未富集到与肿瘤转移相关的关键信号通路,而与肿瘤转移相关的基因CXCL8、MMP16、ZEB1和ZEB2转录水平降低。RTq PCR法,与对照组比较,LINC00973 OE组细胞中ZEB1、ZEB2、CXCL8和MMP16 m RNA表达水平明显升高(P<0.01);与SHV组比较,LINC00973 KD组细胞中ZEB1、ZEB2、CXCL8和MMP16的m RNA表达水平明显降低(P<0.01)。结论:LINC00973可以上调转移相关因子Vimentin、Snail、Twist、ZEB1、ZEB2、CXCL8和MMP16表达,促进上皮性卵巢癌的迁移、侵袭和远端转移。 展开更多

关键词 卵巢肿瘤 转移 LINC00973 实时荧光定量PCR 基质金属蛋白酶

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LINC00973通过hsa-miR-150-5p/ABCG5轴调控非小细胞肺癌多药耐药

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作者 夏云秀 董洪亮 +4 位作者 刘翠兰 王飞 崔冰洁 陈微微 杜静 《中国病理生理杂志》 北大核心 2025年第3期433-443,共11页

目的:探讨长链非编码RNA LINC00973在非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)多药耐药中的作用及分子机制。方法:GEPIA数据库分析LINC00973在NSCLC中的表达水平及其与患者预后的关系,RT-qPCR检测永生化支气管上皮细胞和不同NS... 目的:探讨长链非编码RNA LINC00973在非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)多药耐药中的作用及分子机制。方法:GEPIA数据库分析LINC00973在NSCLC中的表达水平及其与患者预后的关系,RT-qPCR检测永生化支气管上皮细胞和不同NSCLC细胞系及化疗耐药NSCLC细胞中LINC00973的表达水平。构建LINC00973过表达或敲减的NSCLC细胞系,采用细胞划痕、Transwell及干性成球实验检测LINC00973对NSCLC细胞迁移侵袭能力和干性的影响;CCK-8实验检测LINC00973过表达或敲减后,化疗药和靶向药对NSCLC细胞半数抑制浓度的变化。RNA-seq分析LINC00973过表达后靶基因簇改变;LncBase Predicted v.2和TargetScan数据库分析LINC00973与靶基因共同结合的微小RNA(microRNA,miRNA);合成并转染目标miRNA-mimic/inhibitor至LINC00973过表达或敲减的NSCLC细胞中,RT-qPCR和Western blot实验检测LINC00973表达水平及其靶基因的mRNA和蛋白表达水平的变化。结果:GEPIA数据库分析结果显示,LINC00973在肺腺癌和肺鳞癌中表达上调,且与NSCLC患者不良预后相关;不同NSCLC细胞系及NSCLC化疗耐药细胞(A549/DDP和A549/5-FU细胞)中LINC00973表达上调。过表达LINC00973后A549和H520细胞的迁移侵袭能力和干性明显增强,对化疗药和靶向药的敏感性明显下降;敲减LINC00973后A549和H520细胞的迁移侵袭能力和干性明显减弱,对化疗药和靶向药的敏感性明显增强。RNA-seq结合RT-qPCR实验结果显示,过表达LINC00973的A549和H520细胞中,ATP结合盒转运蛋白G5(ATP-binding cassette transporter G5,ABCG5)表达上调,ABC转运体通道被激活。数据库分析结合细胞实验证实LINC00973通过竞争性结合hsa-miR-150-5p调控ABCG5的表达。结论:LINC00973通过与ABCG5竞争性结合hsa-miR-150-5p的方式,上调ABCG5的表达,进而激活ABC转运体通道并促进抗肿瘤药物外排,导致NSCLC产生多药耐药。 展开更多

关键词 非小细胞肺癌 多药耐药 LINC00973 微小RNA-150-5p ATP结合盒转运蛋白G5

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MRI信号强度比联合扩散张量成像定量分析缺血性脑卒中大鼠髓鞘早期结构改变的研究 被引量：4

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作者 翁娜 邵翠杰 +3 位作者 李国栋 宾莉 黄丹琪 王旭 《磁共振成像》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期150-156,共7页

目的探讨7.0 T MRI的信号强度比(signal intensity ratio,SIR)联合扩散张量成像(diffusion tensor imaging,DTI)对缺血性脑卒中大鼠的白质髓鞘损伤的诊断价值。材料与方法SD大鼠18只随机分成A、B、C三组,每组6只,A组进行大脑中动脉闭塞(... 目的探讨7.0 T MRI的信号强度比(signal intensity ratio,SIR)联合扩散张量成像(diffusion tensor imaging,DTI)对缺血性脑卒中大鼠的白质髓鞘损伤的诊断价值。材料与方法SD大鼠18只随机分成A、B、C三组,每组6只,A组进行大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)假手术,暴露颈部血管而不结扎;B组为MCAO术后24 h组;C组为MCAO术后72 h组。相同条件下进行T1WI、T2WI、DTI扫描,后处理得到SIR、各向异性分数(fractional anisotropy,FA)、表观扩散系数(apparent diffusion coefficient,ADC)、垂直扩散张量(radial diffusivity,D_(⊥))图像,勾画胼胝体和外囊区域进行计算SIR值、FA值、ADC值和D_(⊥)值,并进行三组间单因素方差分析。扫描结束后取材进行劳克坚牢蓝(luxol fast blue,LFB)-焦油紫病理染色,测量平均灰度值(mean grayscale value,MGSV)后进行3组间单因素方差分析。将差异具有统计学意义的影像学数据和病理学平均灰度值进行两两相关性分析。结果与A组相比,B组外囊区域的SIR值(P=0.044)、FA值(P=0.001)、ADC值(P=0.001)、D_(⊥)值(P=0.001)降低;C组外囊区域SIR值(P<0.001)、FA值(P=0.002)降低;胼胝体区域SIR值(P=0.031)、FA值(P=0.015)降低。LFB-焦油紫病理染色在脑卒中受损区域髓鞘着色较差,MGSV降低(P<0.05)。在外囊区域,MGSV与SIR值(P<0.0001)、FA值(P≤0.0001)、ADC值(P=0.0127)、D_(⊥)值(P=0.0180)呈负相关。在胼胝体区域,MGSV与SIR值(P=0.0018)呈负相关。结论SIR和DTI的联合使用作为一种评估缺血性脑卒中多阶段髓鞘损伤的无创影像学方法,在大鼠实验中得到有效验证,为临床诊治提供影像学思路。 展开更多

关键词 缺血性脑卒中 脱髓鞘 MCAO模型 信号强度比 磁共振成像 扩散张量成像

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腹侧被盖区多巴胺能神经元参与调控焦虑样行为研究进展 被引量：5

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作者 张逸 杨璐 +3 位作者 彭劲涛 蒋宇婷 孙丰蛟 崔明湖 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期565-569,共5页

焦虑障碍、多巴胺能神经元和腹侧被盖区(ventral tegmental area,VTA)三者联系密切,VTA多巴胺能神经元在调控焦虑中发挥重要作用。动物研究结果表明VTA多巴胺能神经元参与多条神经投射环路,这些环路可分别对生理或病理状态下的焦虑样行... 焦虑障碍、多巴胺能神经元和腹侧被盖区(ventral tegmental area,VTA)三者联系密切,VTA多巴胺能神经元在调控焦虑中发挥重要作用。动物研究结果表明VTA多巴胺能神经元参与多条神经投射环路,这些环路可分别对生理或病理状态下的焦虑样行为起调控作用;多巴胺是VTA主要神经递质,可通过多巴胺D_1和D_2受体调控焦虑;此外,VTA中的谷氨酸、γ-氨基丁酸、乙酰胆碱在调控焦虑中也起到直接或间接作用。临床影像学研究发现焦虑障碍组多巴胺能VTA结构完整性低于健康对照组。目前,关于VTA多巴胺能神经元参与调控焦虑样行为的研究处于高速发展中,更深入地探索将进一步阐明焦虑障碍的发病机制,为焦虑障碍的防治提供新思路。 展开更多

关键词 焦虑 腹侧被盖区 多巴胺 神经环路 神经递质 神经生理学 神经病理学

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PPP5C对人肺腺癌H1299细胞迁移侵袭及肿瘤干性的影响及机制研究 被引量：1

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作者 曾莉莉 陈微微 +2 位作者 马向瑞 董洪亮 杜静 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第1期94-100,共7页

目的探讨磷酸蛋白磷酸酶催化亚基(PPP5C)对人肺腺癌H1299细胞迁移侵袭能力及肿瘤干性的影响及机制。方法构建PPP5C-pcDNA3.1过表达载体,转染PPP5C-pcDNA3.1和pcDNA3.1至H1299细胞,遗传霉素(G418)筛选H1299稳转细胞系。qRT-PCR和Western ... 目的探讨磷酸蛋白磷酸酶催化亚基(PPP5C)对人肺腺癌H1299细胞迁移侵袭能力及肿瘤干性的影响及机制。方法构建PPP5C-pcDNA3.1过表达载体,转染PPP5C-pcDNA3.1和pcDNA3.1至H1299细胞,遗传霉素(G418)筛选H1299稳转细胞系。qRT-PCR和Western blot法鉴定PPP5C mRNA和蛋白的表达水平,细胞生长曲线绘制和克隆形成实验检测细胞增殖活性;划痕和Transwell实验检测细胞迁移侵袭能力;诱导干细胞成球实验检测细胞干性。结果成功构建PPP5C-pcDNA3.1真核表达载体,转染H1299细胞后PPP5C的表达水平显著升高。H1299细胞过表达PPP5C后,生长曲线和克隆形成实验结果显示细胞增殖能力无变化;划痕和Transwell实验显示细胞迁移和侵袭能力显著增强,基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达升高;干细胞成球结果显示细胞干性显著增强,性别决定区Y-box 2(SOX2)的表达升高。结论人肺腺癌细胞H1299中过表达PPP5C不影响细胞增殖,但可通过调控MMP9和SOX2来增强其迁移侵袭能力及肿瘤干性。 展开更多

关键词 PPP5C 细胞增殖 迁移和侵袭 肿瘤干性 基质金属蛋白酶9 SOX2

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Sonic hedgehog信号通路中Gli蛋白活化和肿瘤相关性的研究进展 被引量：1

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作者 曾莉莉 董洪亮 +2 位作者 陈微微 马向瑞 杜静 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期712-717,共6页

Hedgehog(Hh)信号通路在脊椎动物的各种生理过程中都发挥着重要作用,包括细胞的生长和分化等。Sonic hedgehog(Shh)信号通路是Hh信号通路中研究最深入的成员之一,主要在真核生物中发挥生物学功能。国内外多项研究表明,人类各种肿瘤的发... Hedgehog(Hh)信号通路在脊椎动物的各种生理过程中都发挥着重要作用,包括细胞的生长和分化等。Sonic hedgehog(Shh)信号通路是Hh信号通路中研究最深入的成员之一,主要在真核生物中发挥生物学功能。国内外多项研究表明,人类各种肿瘤的发生发展都涉及Shh信号通路,多种因素引起的Shh异常活化会导致人体系统多种恶性肿瘤的发生。神经胶质瘤相关癌基因同源蛋白(glioma-associated oncogene homologue,Gli)是Shh信号通路的关键成员之一,参与调控肿瘤的发生和进展。该文总结了Shh信号通路中Gli蛋白激活的分子机制及其在肿瘤发生发展中的作用,并讨论了Gli蛋白与肿瘤干细胞的相互作用,以及Gli蛋白靶向治疗相关肿瘤的新思路。 展开更多

关键词 肿瘤 Sonic hedgehog信号通路 Gli蛋白 Gli抑制剂

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一例DMD基因Alu元件插入突变导致杜氏肌营养不良及其白发症状分析 被引量：1

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作者 李慧 张如意 +3 位作者 李长叶 张肖林 郑庆印 刘秀珍 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期570-580,共11页

杜氏肌营养不良(Duchenne muscular dystrophy,DMD)是由DMD基因突变引起的抗肌萎缩蛋白缺乏的一种严重X连锁隐性遗传病,突变形式主要包括外显子缺失和重复、点突变、插入突变等,这些突变通过不同方式影响了抗肌萎缩蛋白的正常表达,最终... 杜氏肌营养不良(Duchenne muscular dystrophy,DMD)是由DMD基因突变引起的抗肌萎缩蛋白缺乏的一种严重X连锁隐性遗传病,突变形式主要包括外显子缺失和重复、点突变、插入突变等,这些突变通过不同方式影响了抗肌萎缩蛋白的正常表达,最终导致疾病的发生。本研究报告了1例DMD基因第59号外显子(exon 59,E59)插入突变引起的DMD,该患儿相关生化指标明显异常,表现较为明显的DMD早期症状,并出现了多处白发。其母亲和姐姐为携带者,生化指标轻微异常,母亲有轻微临床症状,姐姐无临床症状。其他成员基因和身体状况正常。经测序和序列比对发现,该插入片段为AluYa5亚家族的Alu元件,该片段插入可产生两个终止密码子,末端含一段多聚腺苷酸尾(polyA)。为了解该插入突变对于DMD基因的影响以及与临床症状的关联,通过外显子剪接增强子(exonic splicing enhancer,ESE)预测发现,该插入并不影响E59的剪接,由此推测该插入序列会最终出现在DMD基因的mRNA序列中,插入序列中的2个终止子和polyA很可能会在翻译过程中发挥终止作用,不能产生有功能的抗肌萎缩蛋白,这可能是导致DMD发生的机制。另外该患儿除了典型的DMD症状外,还出现了过早白发症状。本研究首次报道了1例DMD基因编码区插入Alu元件导致的DMD,为研究Alu序列逆转座引发基因突变提供线索,同时扩展了对DMD基因突变的认识。 展开更多

关键词 杜氏肌营养不良 DMD基因 Alu元件 插入突变 白发

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低中度近视儿童青少年周边视网膜离焦状态及其影响因素分析 被引量：2

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作者 张守宽 刘千千 +4 位作者 彭庆生 高洪莲 孙昕 姜俊 张磊 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2024年第10期808-813,共6页

目的探讨低中度近视儿童青少年周边视网膜离焦状态及其影响因素。方法横断面研究。281例6~15周岁双眼近视儿童青少年纳入研究,仅选择右眼数据分析。进行睫状肌麻痹验光及眼轴长度(AL)、平均角膜曲率(AveK)测量后,按照等效球镜度(SE)分... 目的探讨低中度近视儿童青少年周边视网膜离焦状态及其影响因素。方法横断面研究。281例6~15周岁双眼近视儿童青少年纳入研究,仅选择右眼数据分析。进行睫状肌麻痹验光及眼轴长度(AL)、平均角膜曲率(AveK)测量后,按照等效球镜度(SE)分为低度近视(LM)组(-3.00 D≤SE≤-0.50 D)和中度近视(MM)组(-6.00 D≤SE<-3.00 D);根据AL[AL1组(23.00 mm≤AL≤24.00 mm)]、AL2组(24.00 mm0.05)外,TRDV、RDV-30、RDV-45、RDV-15-30、RDV-30-45、RDV-45-53、RDV-S、RDV-I、RDV-N均显著正向增加(均为P<0.05)。根据AL和AveK分组比较结果显示,AL2组患者TRDV、RDV-30、RDV-45、RDV-15-30、RDV-30-45、RDV-45-53、RDV-S、RDV-I、RDV-N均显著高于AL1组(均为P<0.05);AL3组患者TRDV、RDV-30、RDV-45、RDV-15-30、RDV-30-45、RDV-45-53、RDV-S、RDV-N均显著高于AL2组和AL1组,RDV-I、RDV-T均显著高于AL1组(均为P<0.05);AveK1组患者TRDV、RDV-30、RDV-45、RDV-15-30、RDV-30-45、RDV-45-53、RDV-S、RDV-I均显著高于AveK2组(均为P<0.05)。相关性分析结果显示,TRDV、RDV-45、RDV-30-45、RDV-45-53、RDV-S、RDV-N与年龄和AL均存在正相关,与SE和AveK均存在负相关;RDV-30、RDV-15-30、RDV-I与AL均存在正相关,与SE、AveK均存在负相关;RDV-T仅与AL存在正相关;RDV-15与年龄、SE、AL、AveK均不存在相关性。多元线性回归分析结果显示,年龄是RDV-45-53、RDV-S的影响因素;AL是TRDV、RDV-30、RDV-45、RDV-15-30、RDV-30-45、RDV-45-53、RDV-S、RDV-T的影响因素;AveK是RDV-I的影响因素;SE对各范围RDV均不存在显著影响。结论低中度近视儿童青少年周边视网膜离焦已基本达到远视离焦状态,其中AL相对较短的患者远视离焦量最少。在年龄、SE、AL、AveK四种因素中,年龄、AL和AveK均能影响低中度近视儿童青少年周边视网膜离焦,而AL是最重要的影响因素。 展开更多

关键词 近视 周边视网膜离焦 眼轴长度 等效球镜度 多光谱屈光地形图 角膜曲率

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亚硒酸钠对肺癌细胞迁移和血管生成的影响及其机制探究 被引量：1

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作者 韩宇晨 陈微微 +3 位作者 白玉 杜静 王飞 安佳佳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1598-1605,共8页

目的:探讨亚硒酸钠(SS)对人非小细胞肺癌H520和A549细胞活力、迁移和血管形成模式的影响,并初步阐明其作用机制。方法:体外培养H520细胞、A549细胞及人脐静脉内皮细胞(HUVEC),分为对照组(0μmol/L SS)、低剂量组(5μmol/L SS)、中剂量组... 目的:探讨亚硒酸钠(SS)对人非小细胞肺癌H520和A549细胞活力、迁移和血管形成模式的影响,并初步阐明其作用机制。方法:体外培养H520细胞、A549细胞及人脐静脉内皮细胞(HUVEC),分为对照组(0μmol/L SS)、低剂量组(5μmol/L SS)、中剂量组(10μmol/L SS)和高剂量组(20μmol/L SS)。采用CCK-8法检测各组细胞活力,计算半抑制浓度(IC_(50));细胞划痕实验检测各组细胞划痕愈合率;Transwell小室实验检测各组细胞迁移能力;血管形成实验检测亚硒酸钠对HUVEC血管管腔、肺癌细胞血管生成拟态管腔及肺癌细胞和HUVEC共同形成的“马赛克”血管管腔的影响;化学发光法检测各组肺癌细胞上清血管内皮生长因子(VEGF)表达量;RT-qPCR法检测VEGF、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)及血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)的mRNA表达水平;Western blot法检测H520和A549细胞中VEGF、p-PI3K和p-Akt蛋白水平。结果:SS处理48 h对HUVEC、A549细胞和H520细胞的IC_(50)值分别为6.762、9.003和7.356μmol/L。与各自对照组相比,SS处理48 h各组细胞划痕愈合率均降低(P<0.01);HUVEC中,中、高剂量组迁移细胞数减少(P<0.01);肺癌细胞系中,SS处理后各组迁移细胞数均减少(P<0.01);高剂量SS组VEGF、VEGFR2和Ang Ⅱ的mRNA水平表达量均降低(P<0.05,P<0.01);在H520细胞中,SS处理组VEGF、p-PI3K和p-Akt蛋白水平均降低(P<0.05,P<0.01)。结论:亚硒酸钠可抑制HUVEC、H520细胞及A549细胞活力及迁移,抑制肺癌细胞血管生成拟态及马赛克血管的形成,其机制可能与抑制PI3K-Akt信号通路激活及调控VEGF有关。 展开更多

关键词 亚硒酸钠 非小细胞肺癌 血管内皮生长因子 血管生成 PI3K/AKT信号通路

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尿石素C对人急性髓系白血病HL-60细胞增殖、凋亡和自噬的影响及其机制 被引量：1

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作者 于国兴 张鑫 +4 位作者 杜恒玮 崔冰洁 高娜 刘翠兰 杜静 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期908-916,共9页

目的:探讨尿石素C(UC)对急性髓系白血病(AML)HL-60细胞增殖、凋亡和自噬的影响,阐明其相关作用机制。方法:HL-60细胞分为不同浓度(0、20、40、60、80及100μmol·L^(-1))尿石素A(UA)、尿石素B(UB)和UC组,采用CCK-8法检测各组细胞增... 目的:探讨尿石素C(UC)对急性髓系白血病(AML)HL-60细胞增殖、凋亡和自噬的影响,阐明其相关作用机制。方法:HL-60细胞分为不同浓度(0、20、40、60、80及100μmol·L^(-1))尿石素A(UA)、尿石素B(UB)和UC组,采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性,光学显微镜观察不同浓度UC组细胞形态表现;HL-60细胞分为不同浓度(0、20、40及80μmol·L^(-1))UC组和3-甲基腺嘌呤(3-MA)联合不同浓度(0、20、40及80μmol·L^(-1))UC组,采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性。HL-60细胞分为对照组和不同浓度(20、40及80μmol·L^(-1))UC组,采用活/死细胞染色法检测各组死细胞率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,细胞自噬染色检测试剂盒[单丹磺酰戊二胺(MDC)法]检测各组细胞自噬情况,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中苄氯素1(Beclin 1)、自噬相关蛋白9(ATG9)和自噬相关蛋白7(ATG7)mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、活化的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、微管相关蛋白1轻链3(LC-3)、细胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)、AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)和磷酸化AMPK(p-AMPK)蛋白表达水平。结果:CCK-8法,培养24、48和72 h,分别与0μmol·L^(-1) UA、UB和UC组比较,不同浓度UA、UB和UC组细胞增殖活性均降低(P<0.05或P<0.01),且呈浓度和时间依赖性;48 h时,与UA和UB比较,UC半数抑制浓度(IC50)最低。细胞形态表现,与对照组比较,随着UC浓度升高,细胞间连接和细胞数量减少,细胞碎片增加。CCK-8法,与40和80μmol·L^(-1) UC组比较,3-MA联合40和80μmol·L^(-1) UC组细胞增殖活性升高(P<0.05或P<0.01)。活/死细胞染色,与对照组比较,40和80μmol·L^(-1) UC组死细胞率升高(P<0.01)。流式细胞术,与对照组比较,80μmol·L^(-1) UC组细胞凋亡率升高(P<0.01)。MDC法,与对照组比较,随着UC浓度升高,不同浓度UC组细胞绿色荧光逐渐增强。RT-qPCR法,与对照组比较,80μmol·L^(-1) UC组细胞中Beclin 1、ATG9和ATG7 mRNA表达水平升高(P<0.01)。Western blotting法,与对照组比较,20、40和80μmol·L^(-1) UC组细胞中Cleaved Caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.01),80μmol·L^(-1) UC组细胞中膜型LC3/胞浆型LC3(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ)比值升高(P<0.05),40和80μmol·L^(-1) UC组细胞中p-AMPK/AMPK及p-ERK/ERK比值升高(P<0.01)。结论:UC可抑制人AML HL-60细胞增殖,诱导其细胞凋亡和自噬,并可提高细胞中ERK和AMPK蛋白磷酸化水平。 展开更多

关键词 尿石素C 白血病细胞 细胞增殖 细胞凋亡 细胞自噬

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冬凌草甲素对人鼻咽癌HONE-1细胞增殖、迁移和凋亡的影响 被引量：1

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作者 梁超 代娟娟 +4 位作者 周宁 王丹丹 赵杰 安迪 武艳 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期917-924,共8页

目的:探讨冬凌草甲素对人鼻咽癌HONE-1细胞增殖、迁移、上皮-间质转化(EMT)和凋亡的影响,阐明其相关抗肿瘤机制。方法:鼻咽癌HONE-1细胞经不同浓度(0、5、10、20、40、80和160 mg·L^(-1))冬凌草甲素处理48 h后,采用CCK-8法检测各... 目的:探讨冬凌草甲素对人鼻咽癌HONE-1细胞增殖、迁移、上皮-间质转化(EMT)和凋亡的影响,阐明其相关抗肿瘤机制。方法:鼻咽癌HONE-1细胞经不同浓度(0、5、10、20、40、80和160 mg·L^(-1))冬凌草甲素处理48 h后,采用CCK-8法检测各组细胞增殖抑制率,确定后续实验的用药浓度。HONE-1细胞分为对照组、3 mg·L^(-1)冬凌草甲素组和6 mg·L^(-1)冬凌草甲素组,培养24和48 h后,采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性,5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)法检测各组细胞中EdU阳性细胞率,克隆形成实验检测各组细胞中克隆形成数,Transwell小室实验和细胞划痕实验检测各组细胞中迁移细胞数和划痕愈合率,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)和细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)和多腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP1)蛋白表达水平。结果:CCK-8法确定冬凌草甲素48 h半数抑制浓度(IC50)为12.18 mg·L^(-1),以1/4 IC50和1/2 IC50值为后续实验用药浓度。与对照组比较,24和48 h时3和6 mg·L^(-1)冬凌草甲素组细胞增殖活性降低(P<0.05或P<0.01),EdU阳性细胞率降低(P<0.05或P<0.01),细胞中克隆形成数和迁移细胞数减少(P<0.05或P<0.01),划痕愈合率降低(P<0.05或P<0.01),细胞中CDK1和CDK4 mRNA表达水平降低(P<0.05或P<0.01),E-cadherin、Caspase-3和PARP1蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01),Vimentin蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:冬凌草甲素可通过抑制细胞周期相关蛋白的表达及EMT,进而抑制人鼻咽癌HONE-1细胞增殖、克隆形成和迁移能力,促进细胞凋亡,发挥抗肿瘤作用。 展开更多

关键词 冬凌草甲素 鼻咽肿瘤 细胞周期 上皮-间质转化 细胞凋亡

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SOX2-OT/SOX2轴通过Gli1介导的上皮间质转化调控肺鳞癌H520细胞的迁移 被引量：5

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作者 董洪亮 曾莉莉 +5 位作者 武艳 苗双 倪娜 刘乃国 陈微微 杜静 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期1431-1439,共9页

目的 探讨SOX2-OT在肺鳞癌细胞H520迁移能力调控中的作用并阐明其机制。方法 选用肺癌细胞株中SOX2-OT高表达的肺鳞癌细胞H520,敲低其SOX2-OT转录水平,通过细胞划痕实验和穿膜实验对细胞迁移能力进行检测,qRT-PCR和免疫印迹方法检测上... 目的 探讨SOX2-OT在肺鳞癌细胞H520迁移能力调控中的作用并阐明其机制。方法 选用肺癌细胞株中SOX2-OT高表达的肺鳞癌细胞H520,敲低其SOX2-OT转录水平,通过细胞划痕实验和穿膜实验对细胞迁移能力进行检测,qRT-PCR和免疫印迹方法检测上皮间质转化(EMT)相关因子的表达。通过过表达Gli1进一步分析SOX2-OT的作用机制;用miR-200c抑制剂或类似物转染细胞,分析SOX2-OT对Gli的正向调控机制。结果 敲低SOX2-OT抑制了H520细胞的侵袭和迁移能力,同时伴随着细胞EMT表型的变化。SOX2-OT能够正向调控转录因子Gli1,Gli1过表达可逆转SOX2-OT敲低对细胞迁移能力的抑制作用。miR-200c抑制剂可有效逆转SOX2-OT敲低导致的SOX2下调。结论 SOX2-OT/SOX2轴通过Gli1介导的EMT过程来调控肺鳞癌细胞H520的迁移和侵袭能力。 展开更多

关键词 SOX2-OT H520细胞 GLI1 SOX2 上皮间质转化

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人lncRNA-GACAT2过表达载体的构建及其对肺癌细胞增殖和干性的影响

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作者 倪娜 董洪亮 +4 位作者 高海洋 陈微微 孟新宇 崔冰洁 杜静 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1147-1153,共7页

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)胃癌相关转录本2(GACAT2)基因对肺癌A549和H1299细胞增殖和干性的影响,阐明lncRNA GACAT2基因在肺癌发生发展中的作用。方法:实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法扩增lncRNAGACAT2基因的全长序列,克隆至pc3.1(+)... 目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)胃癌相关转录本2(GACAT2)基因对肺癌A549和H1299细胞增殖和干性的影响,阐明lncRNA GACAT2基因在肺癌发生发展中的作用。方法:实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法扩增lncRNAGACAT2基因的全长序列,克隆至pc3.1(+)真核表达载体,采用菌液PCR法和基因测序法检测GACAT2过表达载体的构建情况。将pc3.1-GACAT2过表达质粒和对照质粒pc3.1分别转入人肺癌A549和H1299细胞,采用G418筛选并建立稳定过表达GACAT2的A549和H1299细胞,分为空载体组(转染pc3.1空载体)和pc3.1-GACAT2组(转染pc3.1-GACAT2重组质粒)。采用RT-qPCR法检测2组A549和H1299细胞中GACAT2 mRNA表达水平,CCK-8法检测2组细胞增殖活性,细胞克隆形成实验检测各组细胞克隆形成数,干细胞成球实验观察2组细胞成球数。结果:成功构建GACAT2真核过表达载体。与空载体组比较,pc3.1-GACAT2组A549和H1299细胞中GACAT2 mRNA表达水平升高(P<0.05或P<0.01),细胞增殖活性降低(P<0.05或P<0.01),细胞克隆形成数明显降低(P<0.05或P<0.01),细胞成球数明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:过表达人lncRNA GACAT2基因能抑制肺癌A549和H1299细胞的增殖能力和细胞干性。 展开更多

关键词 肺肿瘤 长链非编码RNA GACAT2基因 细胞增殖 细胞干性

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