1,25-(OH)_2D_3对肺纤维化大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞中Ca^(2+)浓度和PI3K/AKT/mTOR通路的影响 被引量：10

1

作者 董洪亮 刘乃国 +4 位作者 苗双 倪娜 郑静 王楠 李新静 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2016年第10期1040-1045,共6页

目的特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是一种慢性炎症性疾病,病因不明,缺乏有效的治疗方法。文中旨在探讨肺泡Ⅱ型上皮细胞中Ca^(2+)和PI3K/AKT/mTOR通路在大鼠IPF中的作用,以及1,25-(OH)_2D_3对Ca^(2+)浓度和PI3K/AK... 目的特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是一种慢性炎症性疾病,病因不明,缺乏有效的治疗方法。文中旨在探讨肺泡Ⅱ型上皮细胞中Ca^(2+)和PI3K/AKT/mTOR通路在大鼠IPF中的作用,以及1,25-(OH)_2D_3对Ca^(2+)浓度和PI3K/AKT/mTOR通路的影响。方法 150只雄性SD大鼠随机分为:预防组(对照组Ⅰ、模型组Ⅰ、给药组Ⅰ,每组20只)和治疗组(对照组Ⅱ、模型组Ⅱ、给药组Ⅱ,每组30只)。对照组Ⅰ/Ⅱ行气管暴露手术,气管内给以200μL/只的无菌等渗盐水,并分别于第2和14天开始腹腔注射等渗盐水(200μL/只);模型组Ⅰ/Ⅱ气管内灌注博来霉素(5 mg/kg),并分别于手术后第2和14天开始腹腔注射维生素D3的溶剂(0.1%乙醇和99.9%的丙二醇,1μL/g体重);给药组Ⅰ/Ⅱ气管内灌注博来霉素(5 mg/kg),并分别于手术后第2和14天开始腹腔注射1,25-(OH)_2D_3(2μg/kg体重)。大鼠气管内注射博来霉素建立IPF模型,给药组腹腔注射1,25-(OH)_2D_3进行预防和治疗。检测各组大鼠肺组织中羟脯氨酸的含量,分离肺泡Ⅱ型上皮细胞并用Fluo-3AM荧光负载,激光共聚焦显微镜检测细胞内Ca^(2+)浓度。RT-PCR方法检测PI3K、AKT、mTOR mRNA的表达水平。结果模型组Ⅰ/Ⅱ和给药组Ⅰ/Ⅱ中大鼠肺组织中羟脯氨酸的含量、肺泡Ⅱ型上皮细胞内Ca^(2+)浓度以及PI3K、AKT、mTOR mRNA表达,在各时间点与相应对照组Ⅰ/Ⅱ相比均明显升高(P<0.05或P<0.01);给药组Ⅰ/Ⅱ与模型组Ⅰ/Ⅱ相比,上述指标均有显著降低(P<0.05或P<0.01)。模型组Ⅰ/Ⅱ和给药组Ⅰ/Ⅱ中Ca^(2+)浓度与PI3K、AKT、mTOR mRNA表达之间具有显著正相关(r=0.598 8、r=0.623 0、r=0.6603,P<0.01;r=0.7012、r=0.6323、r=0.7403,P<0.01)。结论 PI3K-AKT-mTOR通路在大鼠IPF的发生发展中起重要作用,1,25-(OH)_2D_3可以降低肺泡Ⅱ型上皮细胞内Ca^(2+)的浓度,抑制PI3K-AKT-mTOR通路,进而抑制IPF的发生发展。 展开更多

关键词 1 25-(OH)2D3 SD大鼠 肺纤维化 肺泡II型上皮细胞 CA^2+浓度 PI3K/AKT/mTOR信号通路

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基质金属蛋白酶1、3,基质金属蛋白酶组织抑制剂1和miR-29在大鼠肺纤维化中及活性维生素D3处理后的表达与作用 被引量：10

2

作者 许梦婷 刘乃国 +2 位作者 刘营 龚悦 李新静 《解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第3期266-270,285,F0002,共7页

目的:探讨大鼠肺纤维化发生发展中基质金属蛋白酶1(MMP1)、MMP3、基质金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP1)及miR-29的表达和作用以及活性维生素D3[1,25(OH)_2D_3]处理对这些基因表达的影响。方法:雄性SD大鼠随机分为预防组和治疗组。预防组分... 目的:探讨大鼠肺纤维化发生发展中基质金属蛋白酶1(MMP1)、MMP3、基质金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP1)及miR-29的表达和作用以及活性维生素D3[1,25(OH)_2D_3]处理对这些基因表达的影响。方法:雄性SD大鼠随机分为预防组和治疗组。预防组分为对照组Ⅰ、模型组Ⅰ和给药组Ⅰ,治疗组分为对照组Ⅱ、模型组Ⅱ和给药组Ⅱ。模型组Ⅰ/Ⅱ和给药组Ⅰ/Ⅱ经气管注入博莱霉素,对照组Ⅰ/Ⅱ经气管注入生理盐水。预防组和治疗组分别于术后第2和14天腹腔注射给药,给药组给予活性维生素D3,模型组给予活性维生素D3溶剂,对照组给予生理盐水。预防组的各组分别于术后第14、21、28天处死大鼠取材,治疗组的各组分别于术后第21和28天处死大鼠取材。实时定量PCR检测大鼠肺组织中miR-29a及TIMP1 mRNA表达水平,免疫组织化学检测组织中MMP1、MMP3和TIMP1的表达水平。结果:模型组Ⅰ/Ⅱ和给药组Ⅰ/Ⅱ中的MMP1、MMP3和TIMP1的表达均明显高于相同时间点对照组Ⅰ/Ⅱ中的表达,而miR-29a的表达明显低于相应的对照组Ⅰ/Ⅱ;给药组Ⅰ/Ⅱ中MMP1、MMP3和TIMP1的表达均低于相应时间点的模型组Ⅰ/Ⅱ的表达,而给药组Ⅰ/Ⅱ中miR-29a的表达则高于模型组Ⅰ/Ⅱ中的表达。结论:MMP1、MMP3、TIMP1和miR-29在大鼠肺纤维化发生发展中具有重要作用,活性维生素D3可以促进miR-29表达,抑制MMP1、MMP3、TIMP1的表达;可能是通过miR-29调节包括MMP1、MMP3、TIMP1在内的多种靶基因来发挥抑制纤维化的作用。 展开更多

关键词 肺纤维化 活性维生素D3 MIR-29 基质金属蛋白酶1 基质金属蛋白酶3 基质金属蛋白酶组织抑制剂1 大鼠

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活性维生素D3对大鼠肺纤维化中蛋白激酶D1介导的抗氧化通路的影响 被引量：3

3

作者 倪娜 刘乃国 +3 位作者 高海洋 董洪亮 郑静 王楠 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期534-538,567,共6页

目的：探讨肺纤维化发生发展中蛋白激酶D1（PKD1）介导的线粒体抗氧化通路的作用以及活性维生素D3在纤维化过程中对该通路的影响。方法：雄性SD大鼠随机分成对照组、模型组和治疗组。应用实时荧光定量PCR和免疫组织化学分别从mRNA和蛋... 目的：探讨肺纤维化发生发展中蛋白激酶D1（PKD1）介导的线粒体抗氧化通路的作用以及活性维生素D3在纤维化过程中对该通路的影响。方法：雄性SD大鼠随机分成对照组、模型组和治疗组。应用实时荧光定量PCR和免疫组织化学分别从mRNA和蛋白质水平检测大鼠肺组织中PKD1、核转录因子（NF-κB）和锰超氧化物歧化酶（MnSOD）的表达。结果：在第14天，治疗组和模型组中PKD1、NF-κB和MnSOD的表达量都显著低于对照组，而治疗组中3种因子的表达量又明显高于模型组；在第21天，3种因子在模型组和治疗组中的表达量明显高于对照组。在第28天，3种因子在模型组和治疗组中的表达量与对照组相比两两之间均没有差异。结论：PKD1-MnSOD线粒体抗氧化通路在博莱霉素引起的大鼠肺纤维化早期发挥重要作用，活性维生素D3能够上调这一抗氧化通路，具有一定的抗氧化作用，对大鼠肺纤维化的发生发展具有一定的抑制作用。 展开更多

关键词 肺纤维化 活性维生素D3 蛋白激酶D1 锰超氧化物歧化酶 核转录因子-ΚB 大鼠

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羊水细胞原位培养及核型制备方法的改进 被引量：4

4

作者 郑静 卓越 刘艳妮 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2019年第3期282-285,共4页

目的羊水染色体核型分析是产前诊断染色体疾病的金标准,但由于羊水培养的影响因素较多,故其成功率较低。探讨影响羊水细胞原位培养成功率的相关因素,探索核型制备的条件,建立一种成功率高且较为稳定的羊水细胞染色体制备方法。方法对具... 目的羊水染色体核型分析是产前诊断染色体疾病的金标准,但由于羊水培养的影响因素较多,故其成功率较低。探讨影响羊水细胞原位培养成功率的相关因素,探索核型制备的条件,建立一种成功率高且较为稳定的羊水细胞染色体制备方法。方法对具有产前诊断指征的435例孕妇行羊膜腔穿刺术抽取羊水进行细胞培养。根据羊水沉淀物的颜色和大小分为5～10 mm^3白色团块、5～10 mm^3棕色团块、10～15 mm^3棕色团块、5～10 mm^3鲜红色团块、10～15 mm^3鲜红色团块组,根据采集羊水过程中使用器具的材质分为塑料组、塑料联合玻璃组、玻璃组,各30例,分析羊水离心后沉淀情况及不同材质操作器具的培养结局。选取培养良好的培养瓶和培养皿共100例,根据制片时环境温度和湿度分为20℃室湿20%组(室温:20℃,室湿:20%)、28℃室湿20%组、20℃湿度50%组、28℃湿度50%组,每组25例,对核型制备过程中不同温度和湿度下的核型分散程度评分。结果 435例羊水培养中成功406例,培养成功率93.3%。培养结果显示,10～15mm^3棕色团块组和10～15mm^3鲜红色团块组细胞培养成功率(72.72%、56.25%)较5～10 mm^3白色团块组培养的成功率(95.98%)明显降低(P<0.01);10～15 mm^3鲜红色团块组细胞培养成功率较5～10 mm^3鲜红色团块组培养的成功率明显降低(56.25%vs 90.48%,P<0.01)。塑料组和塑料联合玻璃组细胞培养成功率(56.67%、70.00%)较玻璃组细胞培养成功率(93.33%)均明显降低(P<0.01)。20℃室湿20%组、28℃室湿20%组、20℃湿度50%组载玻片核型分散程度的得分[(52.48±2.44、66.36±2.25、71.60±2.34)分]明显低于28℃湿度50%组[(86.36±1.59)分],差异有统计学意义(P<0.01);20℃室湿20%组、28℃室湿20%组载玻片核型分散程度的得分明显低于20℃湿度50%组(P<0.01)。结论对于有明显鲜血性的羊水,立即加入0.5 mL无菌肝素可提高羊水培养的成功率;全部采用玻璃器具可有效地提高羊水细胞培养的成功率;控制好分散过程中环境的温度和湿度(28℃、50%),可以制作出合格的核型分析载玻片。 展开更多

关键词 羊水 原位培养 核型 制备方法

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TRIM22与HIV衣壳蛋白p24在脑胶质瘤细胞中的表达特点及共定位研究

5

作者 安新业 纪冰 孙大康 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期382-386,共5页

目的观察外源性三基序蛋白22(TRIM22)与HIV衣壳蛋白p24在U-251脑胶质瘤细胞中的表达特点及共定位情况。方法分别将pEGFP-N3-TRIM22或pDsRed1p24载体转染U-251细胞,通过激光共聚焦显微镜观察TRIM22-EGFP和p24-DsRed1的表达和分布情况。... 目的观察外源性三基序蛋白22(TRIM22)与HIV衣壳蛋白p24在U-251脑胶质瘤细胞中的表达特点及共定位情况。方法分别将pEGFP-N3-TRIM22或pDsRed1p24载体转染U-251细胞,通过激光共聚焦显微镜观察TRIM22-EGFP和p24-DsRed1的表达和分布情况。通过激光共聚焦xyz轴扫描,经ImageJ 1.50i软件进行3D结构重建,观察p24-Dsred1在U-251细胞中的分布特点。将pEGFP-N3-TRIM22和pDsRed1p24载体在U-251细胞中共表达,观察TRIM22-EGFP和p24-DsRed1是否存在共定位关系。结果单独转染pEGFP-N3-TRIM22或pDsRed1p24载体时,TRIM22-EGFP和p24-DsRed1在U-251细胞的胞体或突起中均有较高水平的表达;且3D结构重建显示外源性p24-DsRed1可迁移至U-251细胞的足突。在U-251细胞共转染pEGFP-N3-TRIM22和pDsRed1p24载体时,TRIM22-EGFP与p24-DsRed1存在共定位关系,并能以出胞形式脱离细胞。结论 TRIM22与HIV衣壳蛋白p24在U-251脑胶质瘤细胞中存在共定位关系。 展开更多

关键词 HIV 衣壳蛋白p24 三基序蛋白22 共定位 脑胶质瘤细胞

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细胞自噬调节上皮细胞间充质转化过程对特发性肺纤维化的作用机制 被引量：20

6

作者 苗双 丁国建 +3 位作者 宋殿芳 张传厚 刘乃国 董洪亮 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2019年第10期1025-1030,共6页

目的特发性肺纤维化(IPF)确切的发病机制尚不明确。探讨IPF中细胞自噬对上皮细胞间充质转化过程(EMT)的调控作用及机制。方法实验分为对照组、肺纤维化组、自噬诱导组、自噬抑制组。对照组细胞(A549)常规培养,肺纤维化组、自噬诱导组、... 目的特发性肺纤维化(IPF)确切的发病机制尚不明确。探讨IPF中细胞自噬对上皮细胞间充质转化过程(EMT)的调控作用及机制。方法实验分为对照组、肺纤维化组、自噬诱导组、自噬抑制组。对照组细胞(A549)常规培养,肺纤维化组、自噬诱导组、自噬抑制组细胞(A549)均加入5 ng/mL的TGF-β1进行诱导,肺纤维化组不做进一步处理,自噬诱导组、自噬抑制组分别加入终浓度10μg/L Rapamycin、10 mmol/L 3-Methyladenine来诱导或抑制细胞自噬;12、24、48 h,检测各组羟脯氨酸含量,Real-time PCR方法及Western blot方法检测各组α-肌动蛋白(α-SMA),α-SMA、LC3-Ⅱ或LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、Vimentin的mRNA转录及蛋白表达水平。结果与对照组比较,肺纤维化组、自噬诱导组、自噬抑制组12、24、48 h羟脯氨酸含量、α-SMA、Vimentin的mRNA转录水均升高(P<0.05),Beclin1、LC3-Ⅱ、E-cadherin的mRNA转录均降低(P<0.05)。与肺纤维化组比较,自噬诱导组在12、24、48 h羟脯氨酸含量、α-SMA、Vimentin的mRNA转录水平降低(P<0.05),Beclin1、LC3-Ⅱ、E-cadherin的mRNA转录水平升高(P<0.05);而自噬抑制组12、24、48 hα-SMA、Vimentin的mRNA转录水均升高(P<0.05),Beclin1、LC3-Ⅱ、E-cadherin的mRNA转录水均降低(P<0.05)。Western blot检测结果表明,与对照组24 hα-SMA(1.21±0.17)比较,肺纤维化组(2.57±0.34)、自噬诱导组(1.69±0.31)、自噬抑制组(3.41±0.52)表达水均明显升高(P<0.05);与对照组24 h Vimentin的蛋白表达水平(0.27±0.07)比较,肺纤维化组(1.74±0.31)、自噬诱导组(1.03±0.25)、自噬抑制组(2.43±0.61)表达水均明显升高(P<0.05)。对照组、肺纤维化组、自噬诱导组、自噬抑制组Beclin1的表达分别为2.31±0.31、0.54±0.29、0.91±0.23、0.28±0.07,E-cadherin的表达分别为3.07±0.41、0.74±0.35、1.21±0.51、0.35±0.07,LC3-Ⅱ的表达分别1.15±0.14、0.53±0.11、0.76±0.09和0.17±0.08,以上数据提示Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、E-cadherin的蛋白水均较对照组降低(P<0.05);与肺纤维化组比较,自噬诱导组α-SMA、Vimentin的蛋白表达水均降低(P<0.05),Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、E-cadherin的蛋白表达水均升高(P<0.05);自噬抑制组α-SMA、Vimentin的蛋白表达升高(P<0.05),Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、E-cadherin的蛋白表达降低(P<0.05)。结论细胞自噬和EMT过程在IPF中起重要作用,IPF中诱导或抑制细胞自噬,可以通过抑制或激活上皮细胞的EMT过程,来抑制或促进IPF的发病进程。 展开更多

关键词 特发性肺纤维化 A549细胞 细胞自噬 上皮细胞间充质转化

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肺纤维化中1,25-(OH)_2D_3对内质网应激及ATG12表达的影响 被引量：5

7

作者 刘营 刘乃国 王楠 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2018年第4期391-397,共7页

目的 1,25-(OH)2D3是否影响肺纤维化中内质网应激及自噬仍不清楚。文章探讨内质网应激及自噬在大鼠肺纤维化发生发展中的作用,研究了1,25-(OH)2D3对内质网应激相关分子及ATG12表达的影响。方法雄性SD大鼠区组随机分为对照组、模型组和... 目的 1,25-(OH)2D3是否影响肺纤维化中内质网应激及自噬仍不清楚。文章探讨内质网应激及自噬在大鼠肺纤维化发生发展中的作用,研究了1,25-(OH)2D3对内质网应激相关分子及ATG12表达的影响。方法雄性SD大鼠区组随机分为对照组、模型组和治疗组,每组30只。模型组、治疗组经气管灌注博来霉素(5.0 mg/kg),对照组经气管灌注等渗盐水200μL/只。自气管灌注后第2天起,治疗组腹腔注射1,25-(OH)2D32μg/kg,模型组腹腔注射1,25-(OH)2D3溶剂(0.1%乙醇、99.9%丙二醇)200μL/只,对照组腹腔注射等渗盐水200μL/只,各种注射均为隔天1次,直至处死。用实时定量PCR方法检测PERK、ATF4及ATG12的mRNA表达状况,用免疫组化方法检测PERK、ATF4的蛋白质表达水平。结果与对照组14、21、28 d的PERK水平(1.01±0.23、1.05±0.09、1.04±0.08)比较,模型组(2.30±0.19、3.59±0.27、4.63±0.19)和治疗组(1.44±0.34、1.92±0.17、2.52±0.15)表达均增加(P<0.05);与对照组14、21、28 d的ATF4水平(1.04±0.07、1.05±0.08、1.03±0.10)比较,模型组(2.10±0.12、3.91±0.14、6.20±0.28)和治疗组(1.49±0.27、2.52±0.42、4.02±0.31)表达均增加(P<0.05)。模型组和治疗组14、21、28 d组内不同时间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,14 d模型组、治疗组中ATG12的mRNA表达明显升高(P<0.05),而21、28 d ATG12的mRNA表达均显著降低(P<0.05)。模型组肺组织中PERK、ATF4蛋白质在肺泡上皮细胞、肺间质细胞,尤其是肺巨噬细胞中表达,可见大量棕褐色颗粒,较正常肺组织中两种蛋白质阳性信号明显增强。14、21、28 d模型组和治疗组中PERK、ATF4的蛋白质表达均明显高于对照组(P<0.05),且随建模时间的延长蛋白质的表达递增,14、21、28 d组内两两比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 1,25-(OH)2D3可能通过抑制PERK-e IF2α-ATF4信号通路来抑制肺纤维化的发生发展。 展开更多

关键词 内质网应激 肺纤维化 PERK-eIF2α-ATF4通路 ATG12 1 25-(OH)2D3

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组蛋白H3Ser10磷酸化对猪卵母细胞减数分裂的影响 被引量：1

8

作者 田明明 孙大康 +5 位作者 孟玮 王楠 倪娜 李清春 王雁林 孙洪亮 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2020年第5期466-470,共5页

目的组蛋白磷酸化修饰在卵母细胞减数分裂过程中作用机制的研究较少。文中旨在探讨猪卵母细胞中组蛋白H3的磷酸化模式及对卵母细胞减数分裂过程的调控。方法首先采用免疫组化法鉴定组蛋白H3Ser10(H 3S10)磷酸化在猪卵母细胞减数分裂过... 目的组蛋白磷酸化修饰在卵母细胞减数分裂过程中作用机制的研究较少。文中旨在探讨猪卵母细胞中组蛋白H3的磷酸化模式及对卵母细胞减数分裂过程的调控。方法首先采用免疫组化法鉴定组蛋白H3Ser10(H 3S10)磷酸化在猪卵母细胞减数分裂过程的表达情况,随后体外成熟猪卵母细胞,将卵丘卵母细胞复合体(COCs)分为4个组,一组正常培养作为对照组,另外3组分别添加5、10、30μmol/L ZM447439的成熟液,体外培养27 h,分别为5、10、30μmol/L ZM447439处理组。统计卵母细胞在减数分裂各个时期所占的比例,并进一步检测猪卵母细胞组蛋白H3S10磷酸化的表达模式及蛋白激酶Aurora B基因表达的情况。结果与GVBD期组蛋白H3S10磷酸化水平比较,MI期和AI期明显升高(P<0.05),AI期较MⅡ期明显升高(P<0.05)。与对照组相比,10、30μmol/L ZM447439处理组GVBD期卵母细胞比例[(32.14±0.51)%、(95.34±0.59)%]较对照组[(2.56±0.03)%]增加(P<0.05),MI[(66.88±0.13)%、(4.66±0.04)%]较对照组[(87.42±0.14)%]明显下降(P<0.05)、AI期[(1.01±0.03)%、(0.00±0.00)%]较对照组[(10.02±0.21)%]明显下降(P<0.05)。与对照组卵母细胞发生H3S10去磷酸化修饰比例(0)比较,10μmol/L、30μmol/L ZM447439处理组[(35.2±0.39)%、(95.4±0.65)%]明显升高(P<0.05)。与对照组相比,10、30μmol/L ZM447439处理组Aurora B基因的相对表达量显著降低(P<0.05)。结论组蛋白H3S10磷酸化修饰在哺乳动物卵母细胞成熟过程起着一定作用。Aurora B激酶抑制剂ZM447439处理引起组蛋白H3S10磷酸化水平及Aurora-B激酶的表达降低导致卵母细胞成熟障碍。 展开更多

关键词 猪卵母细胞 成熟 组蛋白 H3S10磷酸化 减数分裂

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雷帕霉素对豚鼠形觉剥夺性近视的干预作用及相关机制研究 被引量：3

9

作者 李欣蒙 高洪莲 +2 位作者 刘奇奇 于睿 张磊 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2021年第3期212-217,共6页

目的探讨球结膜下注射雷帕霉素对豚鼠形觉剥夺性近视(FDM)的干预作用及相关机制。方法选取2~3周龄豚鼠80只(80眼),雌雄不限,随机分为4组空白对照组、FDM组、雷帕霉素组、FDM+雷帕霉素组;空白对照组不做任何处理;FDM组单纯缝合豚鼠右眼眼... 目的探讨球结膜下注射雷帕霉素对豚鼠形觉剥夺性近视(FDM)的干预作用及相关机制。方法选取2~3周龄豚鼠80只(80眼),雌雄不限,随机分为4组空白对照组、FDM组、雷帕霉素组、FDM+雷帕霉素组;空白对照组不做任何处理;FDM组单纯缝合豚鼠右眼眼睑;雷帕霉素组于实验第1天、第7天豚鼠右眼球结膜下注射雷帕霉素50μg;FDM+雷帕霉素组于实验第1天、第7天豚鼠右眼球结膜下注射雷帕霉素50μg后再缝合右眼眼睑。记录各组豚鼠实验前及实验第7天、第14天的眼轴长度、屈光度;并取各组豚鼠视网膜行过碘酸-雪夫染色(PAS染色)及透射电镜检查,观察各组豚鼠视网膜形态变化;取各组豚鼠巩膜行RT-PCR检测巩膜组织中mTOR、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及转化生长因子β1(TGF-β1)的mRNA表达;利用Western blot检测各组豚鼠巩膜组织中AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR的蛋白表达。结果FDM组与空白对照组相比,实验第7天、第14天豚鼠的右眼眼轴长度、屈光度增加,形成了相对近视;FDM组巩膜中MMP-2、α-SMA的mRNA相对表达量与空白对照组相比均增加,TGF-β1 mRNA相对表达量减少,差异均具有统计学意义(均为P<0.05);与空白对照组相比,FDM组豚鼠巩膜中mTOR mRNA和AKT、P-AKT、mTOR、p-mTOR蛋白的相对表达量变化不大,差异均无统计学意义(均为P>0.05),但视网膜变薄,各层结构排列紊乱、疏松。雷帕霉素组与空白对照组相比,实验第7天、第14天豚鼠右眼眼轴长度、屈光度差异均无统计学意义(均为P>0.05),且视网膜形态无明显变化。FDM+雷帕霉素组与FDM组相比,实验第7天豚鼠右眼眼轴长度、屈光度差异均无统计学意义(均为P>0.05),实验第14天右眼眼轴长度和屈光度均减小,差异均有统计学意义(均为P<0.05),TGF-β1 mRNA的相对表达量增多,MMP-2、α-SMA、mTOR的mRNA和AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR的蛋白相对表达量均减少,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论雷帕霉素球结膜下注射可延缓豚鼠FDM的形成,可能是通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路、调节巩膜中的MMP-2、TGF-β1、α-SMA的表达而发挥作用的,且对正常豚鼠视网膜结构没有影响。 展开更多

关键词 形觉剥夺性近视 雷帕霉素 雷帕霉素靶蛋白 基质金属蛋白酶-2 Α-平滑肌肌动蛋白 转化生长因子β1 MTOR信号通路

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康柏西普对豚鼠形觉剥夺性近视的干预作用及相关机制分析 被引量：3

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作者 刘奇奇 高洪莲 +3 位作者 刘蓓 李欣蒙 于睿 张磊 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2020年第8期722-726,共5页

目的探讨抗新生血管生长因子融合蛋白康柏西普(Conbercept)球结膜下注射对豚鼠形觉剥夺性近视的干预作用及其可能的作用机制。方法普通级3周龄断乳花色豚鼠48只随机分为空白对照组、单纯手术组、生理盐水组、Conbercept组,每组各12只。... 目的探讨抗新生血管生长因子融合蛋白康柏西普(Conbercept)球结膜下注射对豚鼠形觉剥夺性近视的干预作用及其可能的作用机制。方法普通级3周龄断乳花色豚鼠48只随机分为空白对照组、单纯手术组、生理盐水组、Conbercept组,每组各12只。其中空白对照组豚鼠不作处理,单纯手术组、生理盐水组、Conbercept组使用眼睑缝合法遮盖右眼,生理盐水组、Conbercept组分别在缝合时、缝合后7 d右眼球结膜下注射0.05 mL生理盐水、0.5 mg(0.05 mL)Conbercept。记录各组眼睑缝合前及缝合后7 d、14 d时的眼轴长度、屈光度,并取后极部巩膜组织采用RT-PCR、Western blot方法检测各组豚鼠巩膜中基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)、转化生长因子(TGF)-β1、TGF-β2 mRNA和蛋白表达情况。结果眼睑缝合后7 d、14 d,单纯手术组较空白对照组豚鼠右眼眼轴长度、屈光度均增加,MMP-2、TGF-β2 mRNA和蛋白相对表达量均增加,TGF-β1、TIMP-2相对表达量均减少,差异均具有统计学意义(均为P<0.05);单纯手术组与生理盐水组各指标相比差异均无统计学意义(均为P>0.05)。眼睑缝合后7 d,与生理盐水组相比,Conbercept组眼轴长度、屈光度及TIMP-2、TGF-β1 mRNA和蛋白相对表达量差异均无统计学意义(均为P>0.05),MMP-2、TGF-β2 mRNA和蛋白相对表达量均减少,差异均有统计学意义(均为P<0.05);眼睑缝合后14 d时,与生理盐水组相比,Conbercept组眼轴长度、屈光度及MMP-2、TGF-β2、TGF-β1 mRNA和蛋白相对表达量差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论0.5 mg Conbercept球结膜下注射可延缓豚鼠形觉剥夺性近视形成,且可能是通过调节巩膜中的MMP-2、TGF-β1、TGF-β2表达而发挥作用。 展开更多

关键词 康柏西普 形觉剥夺性近视 基质金属蛋白酶-2 基质金属蛋白酶抑制剂-2 转化生长因子-Β

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PPAR-γ受体激动剂罗格列酮对兔准分子激光角膜切削术后角膜上皮下雾状混浊的影响 被引量：1

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作者 隋文君 高洪莲 +1 位作者 刘奇奇 张磊 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2019年第8期732-736,共5页

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ)激动剂罗格列酮对兔准分子激光角膜切削术(photorefractive keratectomy,PRK)术后角膜上皮下雾状混浊(haze)的影响。方法选取普通级新... 目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ)激动剂罗格列酮对兔准分子激光角膜切削术(photorefractive keratectomy,PRK)术后角膜上皮下雾状混浊(haze)的影响。方法选取普通级新西兰大白兔64只(64眼),随机分为28μmol·L^-1罗格列酮组、14μmol·L^-1罗格列酮组、1 g·L^-1二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)+生理盐水组、单纯PRK组,每组16只(16眼)。均行右眼PRK手术,术后分别给予28μmol·L^-1罗格列酮、14μmol·L^-1罗格列酮、1 g·L^-1DMSO+生理盐水滴眼,单纯PRK组未作任何特殊处理。术后各组用裂隙灯观察并比较角膜上皮愈合情况;分别于PRK术后7 d、28 d比较各组haze情况并行眼前节照相;每组分别于PRK术后7 d、28 d分批处死8只兔,取角膜行免疫组织化学法比较各组转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)的表达。结果 PRK术后角膜上皮愈合时间组间差异无统计学意义(P>0.05);PRK术后7 d、28 d,各组haze分级及TGF-β1、α-SMA、MMP-2的表达情况,组间差异均有统计学意义(均为P<0.05),其中28μmol·L^-1罗格列酮组haze最轻,14μmol·L^-1罗格列酮组其次,明显轻于1 g·L^-1 DMSO+生理盐水组及单纯PRK组,除1 g·L^-1DMSO+生理盐水组及单纯PRK组组间差异均无统计学意义(均为P>0.05)外,其余组间两两比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 PPAR-γ受体激动剂罗格列酮对兔PRK术后haze有抑制作用,呈浓度依赖性,可能由TGF-β1/Smad通路介导。 展开更多

关键词 准分子激光角膜切削术 角膜上皮下雾状混浊 过氧化物酶体增殖物激活受体激动剂 转化生长因子-β1 Α-平滑肌肌动蛋白 基质金属蛋白酶-2 SMAD通路

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糖基化终末产物在青光眼中的研究进展 被引量：1

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作者 韩明月 董洪亮 +1 位作者 于金璐 王强 《国际眼科杂志》 CAS 北大核心 2020年第6期990-994,共5页

糖基化终末产物(AGEs)体内多种组织中累积,通过调节相关因子表达及激活信号通路等诱发一系列生物学反应,引起年龄相关性疾病及神经退行性病变,如阿尔茨海默病、帕金森病、动脉粥样硬化。青光眼是一种视神经退行性病变,最终导致不可逆的... 糖基化终末产物(AGEs)体内多种组织中累积,通过调节相关因子表达及激活信号通路等诱发一系列生物学反应,引起年龄相关性疾病及神经退行性病变,如阿尔茨海默病、帕金森病、动脉粥样硬化。青光眼是一种视神经退行性病变,最终导致不可逆的视野缺失,是全球仅次于白内障导致视力丧失的主要原因。青光眼患者视网膜等眼组织中过多AGEs累积,通过激活信号通路、引发生物反应,对组织、细胞的结构及功能造成损伤,参与青光眼发生发展的病理过程。本文主要阐述AGEs在青光眼发病机制、治疗、筛查等相关研究中的最新进展,为青光眼的防治提供新的思路和研究方法。 展开更多

关键词 糖基化终末产物 青光眼 发病机制 青光眼防治

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