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长链非编码RNA LINC00973对上皮性卵巢癌迁移、侵袭和远端转移的促进作用及其分子机制
1
作者
夏云秀
张硕
+3 位作者
张桓海
王飞
董洪亮
杜静
《吉林大学学报(医学版)》
北大核心
2025年第4期866-878,共13页
目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC00973对上皮性卵巢癌迁移、侵袭和远端转移的影响,并阐明其分子机制。方法:将人卵巢癌SKOV3和OVCAR3细胞分为EF1a-FH空载体对照组、LINC00973 OE组、U6-shRNA空载体对照组(SHV组)和LINC00973 KD组。...
目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC00973对上皮性卵巢癌迁移、侵袭和远端转移的影响,并阐明其分子机制。方法:将人卵巢癌SKOV3和OVCAR3细胞分为EF1a-FH空载体对照组、LINC00973 OE组、U6-shRNA空载体对照组(SHV组)和LINC00973 KD组。分别转染插入无义序列的pLent-EF1a-FH-CMV-copGFP-P2A-Puro、LINC00973过表达、插入无义序列的pLentU6-shRNA-CMV-copGFP-P2A-Puro和LINC00973小发夹RNA(shRNA)慢病毒,经嘌呤霉素筛选得到稳定转染的SKOV3和OVCAR3细胞。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中目的基因mRNA表达水平,细胞划痕实验检测各组细胞迁移率,Transwell小室实验检测各组细胞穿膜细胞数。小鼠腹腔注射SKOV3野生型(WT组)、LINC00973 OE(LINC00973 OE组)和LINC00973 KD(LINC00973 KD组)细胞,构建上皮性卵巢癌腹腔种植转移模型,采用HE染色观察各组小鼠结肠和肝脏组织形态表现,RNA测序(RNA-seq)分析SHV和LINC00973 KD组SKOV3细胞差异基因,RT-qPCR法检测正常卵巢上皮细胞IOSE-80和上皮性卵巢癌SKOV3、A2780及OVCAR3细胞中LINC00973 mRNA表达水平,各组细胞中LINC00973、波形蛋白(Vimentin),蜗牛家族转录因子1(Snail)、Twist家族碱性螺旋-环-螺旋转录因子1(Twist)、锌指E盒结合蛋白1(ZEB1)、锌指E盒结合蛋白2(ZEB2),趋化因子CXCL8和基质金属蛋白酶(MMP)16 mRNA表达水平及各组小鼠肝脏和结肠组织中LINC00973、Vimentin和Twist mRNA表达水平。结果:与正常卵巢上皮IOSE-80细胞比较,上皮性卵巢癌SKOV3、OVCAR3和A2780细胞中LINC00973 mRNA表达水平均明显升高(P<0.01),SKOV3和OVCAR3细胞中LINC00973 mRNA表达水平最高,因此选择该2种细胞进行后续实验。SKOV3和OVCAR3细胞中,与对照组比较,LINC00973 OE组细胞中LINC00973 mRNA表达水平升高(P<0.01);与SHV组比较,LINC00973 KD组细胞中LINC00973 mRNA表达水平降低(P<0.05或P<0.01),表明SKOV3和OVCAR3 LINC00973过表达及敲低细胞系构建成功。在SKOV3细胞中,与对照组比较,LINC00973 OE组细胞中Vimentin和Twist mRNA表达水平升高(P<0.05或P<0.01),Snail mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05);与SHV组比较,LINC00973 KD组细胞中Vimentin、Snail和Twist mRNA表达水平降低(P<0.01)。在OVCAR3细胞中,与对照组比较,LINC00973 OE组细胞中Vimentin、Snail和Twist mRNA表达水平升高(P<0.01);与SHV组比较,LINC00973 KD组细胞中Vimentin、Snail和Twist mRNA表达水平降低(P<0.01)。细胞划痕实验,在SKOV3和OVCAR3细胞中,与对照组比较,LINC00973 OE组细胞划痕愈合率均明显升高(P<0.01);与SHV组比较,LINC00973 KD组细胞划痕愈合率均明显降低(P<0.01)。Transwell小室实验,在SKOV3和OVCAR3细胞中,与对照组比较,LINC00973 OE组穿膜细胞数均明显增加(P<0.01);与SHV组比较,LINC00973 KD组穿膜细胞数均明显减少(P<0.01)。与WT组比较,LINC00973 OE组小鼠腹腔形成的结节数增多,肝脏表面粗糙,有多处结节形成,肠系膜和结肠表面也有结节形成,结肠组织中LINC00973、Vimentin和Twist m RNA表达水平均升高(P<0.01);与WT组比较,LINC00973 KD组小鼠腹腔无结节形成,肝脏表面光滑、无结节,且肝脏组织中LINC00973、Vimentin和Twist m RNA表达水平降低(P<0.01),肠系膜和结肠表面也无结节形成。HE染色,与WT组比较,LINC00973 OE组小鼠肝脏和结肠出现多处病变,表现为细胞大小不一、形状不规则、细胞边界不清,细胞核分裂增多,细胞质出现深浅不一的红色;LINC00973 KD组小鼠肝脏和结肠组织细胞排列整齐、形状规则,细胞核和细胞质分布均匀。RNA-seq测序,与SHV组比较,LINC00973 KD组未富集到与肿瘤转移相关的关键信号通路,而与肿瘤转移相关的基因CXCL8、MMP16、ZEB1和ZEB2转录水平降低。RTq PCR法,与对照组比较,LINC00973 OE组细胞中ZEB1、ZEB2、CXCL8和MMP16 m RNA表达水平明显升高(P<0.01);与SHV组比较,LINC00973 KD组细胞中ZEB1、ZEB2、CXCL8和MMP16的m RNA表达水平明显降低(P<0.01)。结论:LINC00973可以上调转移相关因子Vimentin、Snail、Twist、ZEB1、ZEB2、CXCL8和MMP16表达,促进上皮性卵巢癌的迁移、侵袭和远端转移。
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关键词
卵巢肿瘤
转移
LINC00973
实时荧光定量PCR
基质金属蛋白酶
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职称材料
酪酸梭菌通过调控内源性硫化氢酶影响小鼠DSS结肠炎肠道屏障
2
作者
沈媛媛
程凯
+1 位作者
李丽霞
孙华波
《中国病理生理杂志》
北大核心
2025年第1期90-96,共7页
目的:探讨酪酸梭菌(Clostridium butyricum)调控内源性硫化氢酶对葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)诱导的小鼠结肠炎肠道屏障的影响及作用机制。方法:将40只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、DSS结肠炎组、低剂量(1×10^(1...
目的:探讨酪酸梭菌(Clostridium butyricum)调控内源性硫化氢酶对葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)诱导的小鼠结肠炎肠道屏障的影响及作用机制。方法:将40只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、DSS结肠炎组、低剂量(1×10^(10)CFU/L)酪酸梭菌组和高剂量(1×10^(11)CFU/L)酪酸梭菌组,每组10只。小鼠自由饮用含3.5%DSS的饮用水建立DSS结肠炎模型。酪酸梭菌组小鼠给予10 mL/kg酪酸梭菌溶液灌胃,每日1次,连续14 d。实验结束后,记录各组小鼠疾病活动度指数(disease activity index,DAI)和结肠长度;HE染色观察结肠组织病理形态;qRT-PCR检测结肠组织中内源性硫化氢酶[胱硫醚β-合成酶(cystathionineβ-synthase,CSE)和胱硫醚γ-裂解酶(cystathionineγ-lyase,CBS)]及黏液屏障标志物Lypd8(LY6/PLAUR domain containing 8)的mRNA表达;Western blot检测结肠组织CSE、CBS及巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)蛋白表达;免疫组化法检测结肠组织紧密连接蛋白[闭锁小带蛋白1(zonula occludens-1,ZO-1)和闭合蛋白(occludin)]表达。结果:与对照组比较,DSS结肠炎组小鼠DAI显著升高,结肠长度显著缩短(P<0.05);肠黏膜上皮缺失,隐窝排列紊乱,大量炎症细胞浸润。与DSS结肠炎组相比,酪酸梭菌组小鼠DAI及结肠缩短程度显著下降(P<0.05);肠黏膜上皮相对完整,炎症细胞浸润减少,隐窝排列紊乱减轻;结肠组织中CSE和CBS的mRNA表达水平显著下降,Lypd8的mRNA表达水平显著升高(P<0.05);Western blot检测CSE、CBS和MIF蛋白表达下调;免疫组化检测ZO-1和occludin表达增多。结论:酪酸梭菌能够显著抑制小鼠DSS结肠炎,主要通过下调内源性硫化氢酶CSE和CBS表达,改善肠黏液屏障,维持肠上皮完整性。
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关键词
酪酸梭菌
内源性硫化氢酶
结肠炎
肠道屏障
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职称材料
题名
长链非编码RNA LINC00973对上皮性卵巢癌迁移、侵袭和远端转移的促进作用及其分子机制
1
作者
夏云秀
张硕
张桓海
王飞
董洪亮
杜静
机构
滨州医学院
附属
医院
妇科
滨州医学院
附属
医院
医学
研究中心
滨州医学院烟台附属医院甲状腺乳腺外科
出处
《吉林大学学报(医学版)》
北大核心
2025年第4期866-878,共13页
基金
国家自然科学基金资助项目(82373097)
山东省科技厅泰山学者人才项目(tsqn202103191)。
文摘
目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC00973对上皮性卵巢癌迁移、侵袭和远端转移的影响,并阐明其分子机制。方法:将人卵巢癌SKOV3和OVCAR3细胞分为EF1a-FH空载体对照组、LINC00973 OE组、U6-shRNA空载体对照组(SHV组)和LINC00973 KD组。分别转染插入无义序列的pLent-EF1a-FH-CMV-copGFP-P2A-Puro、LINC00973过表达、插入无义序列的pLentU6-shRNA-CMV-copGFP-P2A-Puro和LINC00973小发夹RNA(shRNA)慢病毒,经嘌呤霉素筛选得到稳定转染的SKOV3和OVCAR3细胞。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中目的基因mRNA表达水平,细胞划痕实验检测各组细胞迁移率,Transwell小室实验检测各组细胞穿膜细胞数。小鼠腹腔注射SKOV3野生型(WT组)、LINC00973 OE(LINC00973 OE组)和LINC00973 KD(LINC00973 KD组)细胞,构建上皮性卵巢癌腹腔种植转移模型,采用HE染色观察各组小鼠结肠和肝脏组织形态表现,RNA测序(RNA-seq)分析SHV和LINC00973 KD组SKOV3细胞差异基因,RT-qPCR法检测正常卵巢上皮细胞IOSE-80和上皮性卵巢癌SKOV3、A2780及OVCAR3细胞中LINC00973 mRNA表达水平,各组细胞中LINC00973、波形蛋白(Vimentin),蜗牛家族转录因子1(Snail)、Twist家族碱性螺旋-环-螺旋转录因子1(Twist)、锌指E盒结合蛋白1(ZEB1)、锌指E盒结合蛋白2(ZEB2),趋化因子CXCL8和基质金属蛋白酶(MMP)16 mRNA表达水平及各组小鼠肝脏和结肠组织中LINC00973、Vimentin和Twist mRNA表达水平。结果:与正常卵巢上皮IOSE-80细胞比较,上皮性卵巢癌SKOV3、OVCAR3和A2780细胞中LINC00973 mRNA表达水平均明显升高(P<0.01),SKOV3和OVCAR3细胞中LINC00973 mRNA表达水平最高,因此选择该2种细胞进行后续实验。SKOV3和OVCAR3细胞中,与对照组比较,LINC00973 OE组细胞中LINC00973 mRNA表达水平升高(P<0.01);与SHV组比较,LINC00973 KD组细胞中LINC00973 mRNA表达水平降低(P<0.05或P<0.01),表明SKOV3和OVCAR3 LINC00973过表达及敲低细胞系构建成功。在SKOV3细胞中,与对照组比较,LINC00973 OE组细胞中Vimentin和Twist mRNA表达水平升高(P<0.05或P<0.01),Snail mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05);与SHV组比较,LINC00973 KD组细胞中Vimentin、Snail和Twist mRNA表达水平降低(P<0.01)。在OVCAR3细胞中,与对照组比较,LINC00973 OE组细胞中Vimentin、Snail和Twist mRNA表达水平升高(P<0.01);与SHV组比较,LINC00973 KD组细胞中Vimentin、Snail和Twist mRNA表达水平降低(P<0.01)。细胞划痕实验,在SKOV3和OVCAR3细胞中,与对照组比较,LINC00973 OE组细胞划痕愈合率均明显升高(P<0.01);与SHV组比较,LINC00973 KD组细胞划痕愈合率均明显降低(P<0.01)。Transwell小室实验,在SKOV3和OVCAR3细胞中,与对照组比较,LINC00973 OE组穿膜细胞数均明显增加(P<0.01);与SHV组比较,LINC00973 KD组穿膜细胞数均明显减少(P<0.01)。与WT组比较,LINC00973 OE组小鼠腹腔形成的结节数增多,肝脏表面粗糙,有多处结节形成,肠系膜和结肠表面也有结节形成,结肠组织中LINC00973、Vimentin和Twist m RNA表达水平均升高(P<0.01);与WT组比较,LINC00973 KD组小鼠腹腔无结节形成,肝脏表面光滑、无结节,且肝脏组织中LINC00973、Vimentin和Twist m RNA表达水平降低(P<0.01),肠系膜和结肠表面也无结节形成。HE染色,与WT组比较,LINC00973 OE组小鼠肝脏和结肠出现多处病变,表现为细胞大小不一、形状不规则、细胞边界不清,细胞核分裂增多,细胞质出现深浅不一的红色;LINC00973 KD组小鼠肝脏和结肠组织细胞排列整齐、形状规则,细胞核和细胞质分布均匀。RNA-seq测序,与SHV组比较,LINC00973 KD组未富集到与肿瘤转移相关的关键信号通路,而与肿瘤转移相关的基因CXCL8、MMP16、ZEB1和ZEB2转录水平降低。RTq PCR法,与对照组比较,LINC00973 OE组细胞中ZEB1、ZEB2、CXCL8和MMP16 m RNA表达水平明显升高(P<0.01);与SHV组比较,LINC00973 KD组细胞中ZEB1、ZEB2、CXCL8和MMP16的m RNA表达水平明显降低(P<0.01)。结论:LINC00973可以上调转移相关因子Vimentin、Snail、Twist、ZEB1、ZEB2、CXCL8和MMP16表达,促进上皮性卵巢癌的迁移、侵袭和远端转移。
关键词
卵巢肿瘤
转移
LINC00973
实时荧光定量PCR
基质金属蛋白酶
Keywords
Ovarian neoplasm
Neoplasm metastasis
LINC00973
Real-time fluorescence quantitative PCR
Matrix metalloproteinases
分类号
R737.31 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
酪酸梭菌通过调控内源性硫化氢酶影响小鼠DSS结肠炎肠道屏障
2
作者
沈媛媛
程凯
李丽霞
孙华波
机构
滨州医学院
烟台
附属
医院
消化内科
滨州医学院烟台附属医院甲状腺乳腺外科
滨州医学院
烟台
附属
医院
病理科
出处
《中国病理生理杂志》
北大核心
2025年第1期90-96,共7页
基金
山东省中医药科技项目(No.M-2023262)。
文摘
目的:探讨酪酸梭菌(Clostridium butyricum)调控内源性硫化氢酶对葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)诱导的小鼠结肠炎肠道屏障的影响及作用机制。方法:将40只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、DSS结肠炎组、低剂量(1×10^(10)CFU/L)酪酸梭菌组和高剂量(1×10^(11)CFU/L)酪酸梭菌组,每组10只。小鼠自由饮用含3.5%DSS的饮用水建立DSS结肠炎模型。酪酸梭菌组小鼠给予10 mL/kg酪酸梭菌溶液灌胃,每日1次,连续14 d。实验结束后,记录各组小鼠疾病活动度指数(disease activity index,DAI)和结肠长度;HE染色观察结肠组织病理形态;qRT-PCR检测结肠组织中内源性硫化氢酶[胱硫醚β-合成酶(cystathionineβ-synthase,CSE)和胱硫醚γ-裂解酶(cystathionineγ-lyase,CBS)]及黏液屏障标志物Lypd8(LY6/PLAUR domain containing 8)的mRNA表达;Western blot检测结肠组织CSE、CBS及巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)蛋白表达;免疫组化法检测结肠组织紧密连接蛋白[闭锁小带蛋白1(zonula occludens-1,ZO-1)和闭合蛋白(occludin)]表达。结果:与对照组比较,DSS结肠炎组小鼠DAI显著升高,结肠长度显著缩短(P<0.05);肠黏膜上皮缺失,隐窝排列紊乱,大量炎症细胞浸润。与DSS结肠炎组相比,酪酸梭菌组小鼠DAI及结肠缩短程度显著下降(P<0.05);肠黏膜上皮相对完整,炎症细胞浸润减少,隐窝排列紊乱减轻;结肠组织中CSE和CBS的mRNA表达水平显著下降,Lypd8的mRNA表达水平显著升高(P<0.05);Western blot检测CSE、CBS和MIF蛋白表达下调;免疫组化检测ZO-1和occludin表达增多。结论:酪酸梭菌能够显著抑制小鼠DSS结肠炎,主要通过下调内源性硫化氢酶CSE和CBS表达,改善肠黏液屏障,维持肠上皮完整性。
关键词
酪酸梭菌
内源性硫化氢酶
结肠炎
肠道屏障
Keywords
Clostridium butyricum
endogenous hydrogen sulfide enzymes
colitis
intestinal barrier
分类号
R574.62 [医药卫生—消化系统]
Q936 [生物学—微生物学]
R363 [医药卫生—病理学]
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长链非编码RNA LINC00973对上皮性卵巢癌迁移、侵袭和远端转移的促进作用及其分子机制
夏云秀
张硕
张桓海
王飞
董洪亮
杜静
《吉林大学学报(医学版)》
北大核心
2025
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职称材料
2
酪酸梭菌通过调控内源性硫化氢酶影响小鼠DSS结肠炎肠道屏障
沈媛媛
程凯
李丽霞
孙华波
《中国病理生理杂志》
北大核心
2025
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