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ATPIF1通过调节糖酵解能力影响CAR-NK92细胞抗肿瘤活性研究
1
作者
刘彪
龚雪
+2 位作者
胡璧梁
郭春磊
钟根深
《细胞与分子免疫学杂志》
2025年第10期865-874,共10页
目的探究ATP合酶抑制因子1(ATPIF1)对于嵌合抗原受体(CAR)-NK92细胞抗肿瘤活性的影响。方法构建靶向HER2的ATPIF1过表达和敲低的CAR-NK92细胞;流式细胞术检查CAR阳性表达率;CCK-8法检测细胞增殖能力;Seahorse分析细胞糖酵解能力;线粒体...
目的探究ATP合酶抑制因子1(ATPIF1)对于嵌合抗原受体(CAR)-NK92细胞抗肿瘤活性的影响。方法构建靶向HER2的ATPIF1过表达和敲低的CAR-NK92细胞;流式细胞术检查CAR阳性表达率;CCK-8法检测细胞增殖能力;Seahorse分析细胞糖酵解能力;线粒体膜电位探针(JC-1)法检测细胞线粒体膜电位水平;萤火虫荧光素酶报告基因检测法检测靶细胞裂解率;流式细胞术检测细胞CD107a、自然杀伤细胞组2成员D(NKG2D)、颗粒酶B(GzmB)、穿孔素(perforin)、白细胞介素2(IL-2)表达水平;实时荧光定量PCR检测细胞干扰素诱导蛋白与四肽重复1(IFIT1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、ATPIF1、己糖激酶1(HK1)表达;2-脱氧-D-葡萄糖(2-DG)抑制糖酵解,检测对CAR-NK92细胞抗肿瘤能力影响。结果成功制备靶向HER2的对照组CAR-NK92细胞以及ATPIF1过表达和敲低表达的CAR-NK92细胞;ATPIF1过表达的CAR-NK92细胞靶细胞裂解率、NKG2D和CD107a的表达水平、GzmB和IL-2分泌能力、IFIT1和TNF-α的mRNA表达水平显著上调,ATPIF1敲低表达后结果相反。ATPIF1过表达引起CAR-NK92细胞代谢重编程,线粒体膜电位(Δψm)显著降低,HK1的mRNA表达水平显著上调,基础糖酵解和糖酵解能力增强。2-DG(5μmol/L)抑制糖酵解后,ATPIF1过表达和敲低表达的CAR-NK92细胞与对照组相比,NKG2D和CD107a表达水平无显著差异。结论ATPIF1通过调节糖酵解代谢能力来影响CAR-NK92细胞抗肿瘤活性,通过过表达ATPIF1可以增强CAR-NK92细胞的抗肿瘤活性。
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关键词
CAR-NK
NK92
ATPIF1
糖酵解
肿瘤
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题名
ATPIF1通过调节糖酵解能力影响CAR-NK92细胞抗肿瘤活性研究
1
作者
刘彪
龚雪
胡璧梁
郭春磊
钟根深
机构
河南省免疫与靶向药物重点实验室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
2025年第10期865-874,共10页
基金
湖南省自然科学基金项目(2023JJ30091,2022JJ80081)
国家自然科学基金-河南省联合基金项目(U1904131)。
文摘
目的探究ATP合酶抑制因子1(ATPIF1)对于嵌合抗原受体(CAR)-NK92细胞抗肿瘤活性的影响。方法构建靶向HER2的ATPIF1过表达和敲低的CAR-NK92细胞;流式细胞术检查CAR阳性表达率;CCK-8法检测细胞增殖能力;Seahorse分析细胞糖酵解能力;线粒体膜电位探针(JC-1)法检测细胞线粒体膜电位水平;萤火虫荧光素酶报告基因检测法检测靶细胞裂解率;流式细胞术检测细胞CD107a、自然杀伤细胞组2成员D(NKG2D)、颗粒酶B(GzmB)、穿孔素(perforin)、白细胞介素2(IL-2)表达水平;实时荧光定量PCR检测细胞干扰素诱导蛋白与四肽重复1(IFIT1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、ATPIF1、己糖激酶1(HK1)表达;2-脱氧-D-葡萄糖(2-DG)抑制糖酵解,检测对CAR-NK92细胞抗肿瘤能力影响。结果成功制备靶向HER2的对照组CAR-NK92细胞以及ATPIF1过表达和敲低表达的CAR-NK92细胞;ATPIF1过表达的CAR-NK92细胞靶细胞裂解率、NKG2D和CD107a的表达水平、GzmB和IL-2分泌能力、IFIT1和TNF-α的mRNA表达水平显著上调,ATPIF1敲低表达后结果相反。ATPIF1过表达引起CAR-NK92细胞代谢重编程,线粒体膜电位(Δψm)显著降低,HK1的mRNA表达水平显著上调,基础糖酵解和糖酵解能力增强。2-DG(5μmol/L)抑制糖酵解后,ATPIF1过表达和敲低表达的CAR-NK92细胞与对照组相比,NKG2D和CD107a表达水平无显著差异。结论ATPIF1通过调节糖酵解代谢能力来影响CAR-NK92细胞抗肿瘤活性,通过过表达ATPIF1可以增强CAR-NK92细胞的抗肿瘤活性。
关键词
CAR-NK
NK92
ATPIF1
糖酵解
肿瘤
Keywords
CAR-NK
NK92
ATPIF1
glycolysis
tumor
分类号
R392 [医药卫生]
R392.12 [医药卫生—免疫学]
R394 [医药卫生—基础医学]
Q493.9 [生物学]
Q493.4 [生物学—生理学]
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出处
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1
ATPIF1通过调节糖酵解能力影响CAR-NK92细胞抗肿瘤活性研究
刘彪
龚雪
胡璧梁
郭春磊
钟根深
《细胞与分子免疫学杂志》
2025
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