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猪肺炎支原体P46-P65重组蛋白的表达及间接ELISA抗体检测方法的建立
被引量：
2
1
作者
杨振宇
李璇
+7 位作者
刘一宁
谢邵波
郑金
刘春燕
林美婷
刘腾
唐红剑
余兴龙
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第7期709-715,共7页
为建立猪肺炎支原体(Mhp)血清学调查及免疫评估方法,本研究利用DNAStar生物学软件对Mhp的P46和P65进行抗原表位分析,利用重叠延伸PCR(SOE-PCR)获得P46-P65融合基因,构建重组表达质粒pETP46-P65,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经...
为建立猪肺炎支原体(Mhp)血清学调查及免疫评估方法,本研究利用DNAStar生物学软件对Mhp的P46和P65进行抗原表位分析,利用重叠延伸PCR(SOE-PCR)获得P46-P65融合基因,构建重组表达质粒pETP46-P65,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经诱导后获得了可溶性表达的重组P46(aa33~aa419)-P65(aa307~aa627)蛋白(rP46-P65)。以纯化的r P46-P65为包被抗原,经优化各反应条件后建立了检测Mhp抗体的间接ELISA方法。特异性试验结果显示所建立的方法与CSFV、FMDV、PEDV、PCV2、PRV、PRRSV和APP等阳性血清均无交叉反应。该方法可检测到最高稀释至6 400倍的Mhp阳性血清,批内和批间变异系数均小于5%。利用IDEXX试剂盒和本研究建立的方法同时检测298份临床血清样品,前者的检测阳性率为62.4%(186/298),后者的检测阳性率为73.8%(220/298),两者检测结果的总符合率为88.6%。IDEXX检测为阳性的血清,采用本研究建立的ELISA方法检测也均为阳性;而部分Mhp阳性猪经IDEXX试剂盒检测为阴性的血清,该ELISA方法检测结果却为阳性,其中79.4%(27/34)检测结果有差异的血清经Mhp颜色变化试验证明均为阳性,表明本研究建立的ELISA方法的敏感性明显高于IDEXX方法。本研究建立的检测猪Mhp抗体的间接ELISA方法与目前广泛使用的方法相比优势明显,为临床血清流行病学调查及血清抗体水平评估提供了可行方法。
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关键词
猪肺炎支原体
重组
融合蛋白P46-P65
间接ELISA
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职称材料
基于胞内劳森菌重组flgE蛋白间接ELISA检测方法的建立及应用
被引量：
5
2
作者
廖荣莉
郑金
+6 位作者
熊梦霞
罗灵芝
赵墩
周阳
唐红剑
葛猛
余兴龙
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第2期150-157,共8页
为建立以胞内劳森菌(LI)重组鞭毛钩基体复合蛋白flgE为包被抗原的间接ELISA检测方法,本研究将flgE基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET28a-flgE,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经诱导后获得了可溶性表达的flg...
为建立以胞内劳森菌(LI)重组鞭毛钩基体复合蛋白flgE为包被抗原的间接ELISA检测方法,本研究将flgE基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET28a-flgE,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经诱导后获得了可溶性表达的flgE重组蛋白。以纯化的重组flgE蛋白为包被抗原,经优化各反应条件后建立了检测LI抗体的间接ELISA方法。特异性试验结果显示所建立的ELISA方法与CSFV、PRV、PRRSV、PCV2、FMDV、Mhp和APP等阳性血清均无交叉反应。该方法能检测到1600倍稀释的LI阳性血清,批内和批间变异系数均小于10%。利用该方法检测多个不同类型猪场的猪血清(血清来源:2个种猪场1~5胎次的母猪;3个商品猪场30日龄~140日龄的猪;仔猪30头,从30日龄跟踪至80日龄,共采集4次血清),结果显示,母猪和育肥猪的感染率较高可达100%;母源抗体下降后,自50日龄~70日龄起到育肥猪阶段,LI阳性率和抗体水平随着日龄的增长而不断上升;30头跟踪仔猪在单独密闭的饲养条件下,从开始到全群感染LI所需的时间较短(35 d左右)。这些结果与目前已报道的LI血清流行病学调查研究一致,表明该方法能较准确反映LI感染猪的抗体水平。上述结果表明本研究建立的间接ELISA抗体检测方法,具有良好的特异性、敏感性和重复性,可初步用于临床LI血清流行病学的调查。
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关键词
猪增生性肠病
胞内劳森菌
鞭毛蛋白flgE
间接ELISA
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职称材料
题名
猪肺炎支原体P46-P65重组蛋白的表达及间接ELISA抗体检测方法的建立
被引量：
2
1
作者
杨振宇
李璇
刘一宁
谢邵波
郑金
刘春燕
林美婷
刘腾
唐红剑
余兴龙
机构
湖南
农业大学动物医学院
湖南康保特生物科技有限公司
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第7期709-715,共7页
基金
湖南省重点领域研发计划项目(2022NK2049)。
文摘
为建立猪肺炎支原体(Mhp)血清学调查及免疫评估方法,本研究利用DNAStar生物学软件对Mhp的P46和P65进行抗原表位分析,利用重叠延伸PCR(SOE-PCR)获得P46-P65融合基因,构建重组表达质粒pETP46-P65,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经诱导后获得了可溶性表达的重组P46(aa33~aa419)-P65(aa307~aa627)蛋白(rP46-P65)。以纯化的r P46-P65为包被抗原,经优化各反应条件后建立了检测Mhp抗体的间接ELISA方法。特异性试验结果显示所建立的方法与CSFV、FMDV、PEDV、PCV2、PRV、PRRSV和APP等阳性血清均无交叉反应。该方法可检测到最高稀释至6 400倍的Mhp阳性血清,批内和批间变异系数均小于5%。利用IDEXX试剂盒和本研究建立的方法同时检测298份临床血清样品,前者的检测阳性率为62.4%(186/298),后者的检测阳性率为73.8%(220/298),两者检测结果的总符合率为88.6%。IDEXX检测为阳性的血清,采用本研究建立的ELISA方法检测也均为阳性;而部分Mhp阳性猪经IDEXX试剂盒检测为阴性的血清,该ELISA方法检测结果却为阳性,其中79.4%(27/34)检测结果有差异的血清经Mhp颜色变化试验证明均为阳性,表明本研究建立的ELISA方法的敏感性明显高于IDEXX方法。本研究建立的检测猪Mhp抗体的间接ELISA方法与目前广泛使用的方法相比优势明显,为临床血清流行病学调查及血清抗体水平评估提供了可行方法。
关键词
猪肺炎支原体
重组
融合蛋白P46-P65
间接ELISA
Keywords
Mycoplasma hyopneumoniae
recombinant
P46-P65 fusion protein
indirect ELISA
分类号
S852.62 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
基于胞内劳森菌重组flgE蛋白间接ELISA检测方法的建立及应用
被引量：
5
2
作者
廖荣莉
郑金
熊梦霞
罗灵芝
赵墩
周阳
唐红剑
葛猛
余兴龙
机构
湖南
农业大学动物医学院
湖南康保特生物科技有限公司
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第2期150-157,共8页
基金
国家自然科学基金面上项目(31972713)。
文摘
为建立以胞内劳森菌(LI)重组鞭毛钩基体复合蛋白flgE为包被抗原的间接ELISA检测方法,本研究将flgE基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET28a-flgE,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经诱导后获得了可溶性表达的flgE重组蛋白。以纯化的重组flgE蛋白为包被抗原,经优化各反应条件后建立了检测LI抗体的间接ELISA方法。特异性试验结果显示所建立的ELISA方法与CSFV、PRV、PRRSV、PCV2、FMDV、Mhp和APP等阳性血清均无交叉反应。该方法能检测到1600倍稀释的LI阳性血清,批内和批间变异系数均小于10%。利用该方法检测多个不同类型猪场的猪血清(血清来源:2个种猪场1~5胎次的母猪;3个商品猪场30日龄~140日龄的猪;仔猪30头,从30日龄跟踪至80日龄,共采集4次血清),结果显示,母猪和育肥猪的感染率较高可达100%;母源抗体下降后,自50日龄~70日龄起到育肥猪阶段,LI阳性率和抗体水平随着日龄的增长而不断上升;30头跟踪仔猪在单独密闭的饲养条件下,从开始到全群感染LI所需的时间较短(35 d左右)。这些结果与目前已报道的LI血清流行病学调查研究一致,表明该方法能较准确反映LI感染猪的抗体水平。上述结果表明本研究建立的间接ELISA抗体检测方法,具有良好的特异性、敏感性和重复性,可初步用于临床LI血清流行病学的调查。
关键词
猪增生性肠病
胞内劳森菌
鞭毛蛋白flgE
间接ELISA
Keywords
porcine proliferative enteropathy
Lawsonia intracellularis
flagellar hook-basal body complex protein flgE
indirect ELISA
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪肺炎支原体P46-P65重组蛋白的表达及间接ELISA抗体检测方法的建立
杨振宇
李璇
刘一宁
谢邵波
郑金
刘春燕
林美婷
刘腾
唐红剑
余兴龙
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024
2
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职称材料
2
基于胞内劳森菌重组flgE蛋白间接ELISA检测方法的建立及应用
廖荣莉
郑金
熊梦霞
罗灵芝
赵墩
周阳
唐红剑
葛猛
余兴龙
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021
5
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职称材料
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