高迁移率族蛋白B4(high mobility group box,HMGB4)是HMGB家族的新成员,研究表明其可能在睾丸发育和精子发生等方面发挥重要作用.为进一步研究HMGB4的结构、功能及与其相互作用的蛋白而进行his-HMGB4融合蛋白表达载体的构建.序列鉴定分...高迁移率族蛋白B4(high mobility group box,HMGB4)是HMGB家族的新成员,研究表明其可能在睾丸发育和精子发生等方面发挥重要作用.为进一步研究HMGB4的结构、功能及与其相互作用的蛋白而进行his-HMGB4融合蛋白表达载体的构建.序列鉴定分析后,用该重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导产生his-HMGB4融合蛋白,继而纯化获得相对分子质量约25 000的融合蛋白.将此融合蛋白免疫新西兰兔,经Western印迹和ELISA检测,制备的抗体可特异性识别HMGB4蛋白,其效价达1∶20 000.获得的高效价、高特异性的兔抗HMGB4蛋白多克隆抗体为下阶段研究HMGB4的功能奠定了基础.展开更多
利用反相高效液相色谱(RP HPLC)与电喷雾质谱(ESI MS和MS MS)联用技术直接分析用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽合成方法手工偶联合成的一个十三肽(Lys Lys Glu Ser Asp Phe Leu Met Phe Val Tyr Leu Val,Mr1617.8)粗产品,以探索RP HPLC ESI...利用反相高效液相色谱(RP HPLC)与电喷雾质谱(ESI MS和MS MS)联用技术直接分析用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽合成方法手工偶联合成的一个十三肽(Lys Lys Glu Ser Asp Phe Leu Met Phe Val Tyr Leu Val,Mr1617.8)粗产品,以探索RP HPLC ESI MS和MS MS在固相多肽合成产物分析和副反应机制研究中的应用.RP HPLC结果显示:合成粗产物中含有1个主成分,2个次要成分和多个微量成分;与之联用的电喷雾质谱同步准确地测定出各成分的相对分子质量(m z)并自动对各主要成分的化学结构进行了串联质谱分析.结果证明,粗产物中的主成分即为目标十三肽,另外几个主要副产物为十三肽的残缺肽或氧化肽.对色谱和生物质谱联用技术分析合成多肽的意义和副产物形成的可能机制进行了讨论.展开更多
文摘利用反相高效液相色谱(RP HPLC)与电喷雾质谱(ESI MS和MS MS)联用技术直接分析用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽合成方法手工偶联合成的一个十三肽(Lys Lys Glu Ser Asp Phe Leu Met Phe Val Tyr Leu Val,Mr1617.8)粗产品,以探索RP HPLC ESI MS和MS MS在固相多肽合成产物分析和副反应机制研究中的应用.RP HPLC结果显示:合成粗产物中含有1个主成分,2个次要成分和多个微量成分;与之联用的电喷雾质谱同步准确地测定出各成分的相对分子质量(m z)并自动对各主要成分的化学结构进行了串联质谱分析.结果证明,粗产物中的主成分即为目标十三肽,另外几个主要副产物为十三肽的残缺肽或氧化肽.对色谱和生物质谱联用技术分析合成多肽的意义和副产物形成的可能机制进行了讨论.
