改革生物化学实验教学培养实验创新人才 被引量：14

1

作者 丁学知 《实验技术与管理》 CAS 2002年第3期127-129,132,共4页

本文主要阐述了我系生物化学实验课的教学内容、教学方法和教学手段的改革,加强对学生实验操作技能的考核,有效地提高了学生的实验动手能力、独立操作能力和创新能力,使生物化学实验课教学改革取得了显著成效.

关键词 实验教学 生物化学 实验课 教学改革 操作技能 创新人才 人才培养

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虎纹捕鸟蛛毒素IV突变体K27A-HWTX-IV的合成和复性及其生物学活性研究 被引量：1

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作者 陈再冉 王贤纯 梁宋平 《湖南师范大学自然科学学报》 EI CAS 北大核心 2003年第3期67-72,共6页

用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽合成的方法在固相多肽合成仪上合成了用丙氨酸代替虎纹捕鸟蛛毒素 IV的第27位的赖氨酸的突变体K27A HWTX IV,通过反相HPLC对不同条件下突变体的氧化复性结果进行监测,摸索出其最佳氧化复性条件为:0.1mol LTri... 用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽合成的方法在固相多肽合成仪上合成了用丙氨酸代替虎纹捕鸟蛛毒素 IV的第27位的赖氨酸的突变体K27A HWTX IV,通过反相HPLC对不同条件下突变体的氧化复性结果进行监测,摸索出其最佳氧化复性条件为:0.1mol LTris HCl,pH8.0,GSH1mmol LGSSG0.1mmol L的复性缓冲液,样品浓度为0.1mg mL.复性产物经HPLC纯化并用基质辅助激光解吸飞行时间质谱法进行鉴定,相对分子质量为4050.63Da.生物学活性实验小鼠离体膈神经 膈肌标本测活实验表明:10μg mL天然HWTX IV阻断小鼠离体膈神经 膈肌接头传递时间为16min,10μg mL复性后的突变体阻断小鼠离体膈神经 膈肌接头传递时间为120min,残基的替换导致突变体生物学活性比天然毒素少,证明了第27位的赖氨酸为虎纹捕鸟蛛毒素 IV活性相关的残基. 展开更多

关键词 虎纹捕鸟蛛毒素—Ⅳ 突变体 K27A—HWTX-Ⅳ 固相多肽合成法 氧化复性 生物学活性 肽类毒素

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化学合成虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅱ基因的克隆

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作者 徐辉明 陈嘉勤 +1 位作者 梁宋平 李敏 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 2000年第1期61-64,共4页

报道了全化学合成虎纹捕鸟蛛毒素 Ⅱ (HWTX Ⅱ )基因 ,在克隆载体pBluescript中的克隆 .但HWTX Ⅱ基因在表达载体pGEX KT中几乎无表达 .根据以前成功地表达全化学合成虎纹捕鸟蛛毒素 Ⅰ (HWTX Ⅰ )基因的实验结果 ,对在同一表达系统所... 报道了全化学合成虎纹捕鸟蛛毒素 Ⅱ (HWTX Ⅱ )基因 ,在克隆载体pBluescript中的克隆 .但HWTX Ⅱ基因在表达载体pGEX KT中几乎无表达 .根据以前成功地表达全化学合成虎纹捕鸟蛛毒素 Ⅰ (HWTX Ⅰ )基因的实验结果 ,对在同一表达系统所构建的HWTX Ⅰ与HWTX Ⅱ基因的表达产物进行比较 ,认为HWTX Ⅰ与HWTX Ⅱ在原核表达系统的表达行为上的差异有助于我们进一步探讨HWTX 展开更多

关键词 蜘蛛 虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅱ基因 化学合成 克隆

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一种新型促伤口愈合的多肽制备及鉴定

4

作者 朱跃霞 黄彪 +3 位作者 廖浴彬 王辰心 刘中华 廖琼 《中国生物化学与分子生物学报》 北大核心 2025年第10期1402-1409,共8页

伤口的修复和感染一直是临床医学中面临的巨大挑战。两栖动物生存环境复杂,长期的自然选择下,其皮肤系统进化出抵抗外界损伤和快速修复创伤的能力,成为挖掘促伤口愈合候选分子的重要来源。本研究以凹耳臭蛙(Odorrana tormota)的cDNA文... 伤口的修复和感染一直是临床医学中面临的巨大挑战。两栖动物生存环境复杂,长期的自然选择下,其皮肤系统进化出抵抗外界损伤和快速修复创伤的能力,成为挖掘促伤口愈合候选分子的重要来源。本研究以凹耳臭蛙(Odorrana tormota)的cDNA文库为研究对象,通过序列比对筛选出1条序列为“VGKAGLETAACKATNSCFNIDW”的新型多肽,由22个氨基酸组成,分子量为2299.6 D,命名为PN-VW22。进一步通过固相合成法制备多肽,利用细胞计数试剂盒-8法(cell counting kit-8,CCK-8)和细胞划痕实验测定PN-VW22多肽对人角质形成细胞(human keratinocyte,HaCaT)和小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,NIH3T3)的细胞增殖影响。采用最小抑菌浓度测定(minimum inhibitory concentration,MIC)评估多肽的抗菌活性。结果表明,不同浓度的PN-VW22对NIH3T3细胞活力无明显影响(P>0.05),但在0.5μmol/L的浓度下显著提高HaCaT的细胞活力(P<0.001)。同时PN-VW22能够诱导HaCaT细胞增殖,促进HaCaT细胞的伤口愈合,在0.5μmol/L的浓度孵育24 h后伤口愈合率为64.44%。此外,PN-VW22对金黄色葡萄球菌表现出一定的抗菌效果,其MIC值为13.92μmol/L。本研究成功鉴定了1条具备伤口修复和抗感染的双功能新型多肽PN-VW22,为伤口愈合药物开发提供了一种新的多肽模板。 展开更多

关键词 凹耳臭蛙 多肽 细胞增殖 伤口愈合

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细胞转染条件的优化 被引量：9

5

作者 刘云海 钟英丽 +3 位作者 任凯群 周建林 张健 韩梅 《湖南师范大学自然科学学报》 EI CAS 北大核心 2004年第2期84-88,共5页

通过对3种细胞转染方法(电穿孔法,磷酸钙法,阳离子性的脂质体法)的比较及优化,获得了理想的转染率,以进一步从细胞水平研究基因表达调控及小鼠ES细胞打靶.电压在350～450V,电穿孔法转染率与电压呈线性关系;用HEPES缓冲液能显著提高磷酸... 通过对3种细胞转染方法(电穿孔法,磷酸钙法,阳离子性的脂质体法)的比较及优化,获得了理想的转染率,以进一步从细胞水平研究基因表达调控及小鼠ES细胞打靶.电压在350～450V,电穿孔法转染率与电压呈线性关系;用HEPES缓冲液能显著提高磷酸钙法转染率;低质量的DNA与细胞过长时间接触降低阳离子性脂质体法的转染效率.根据各种方法的特点选择和优化合适的细胞转染方法,可以提高哺乳动物细胞的转染率. 展开更多

关键词 电穿孔法 磷酸钙法 脂质体法 细胞转染 哺乳动物

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苎麻基因组微卫星的分离与鉴定(英文) 被引量：10

6

作者 蒋彦波 揭雨成 +2 位作者 周建林 邢虎成 佘玮 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期158-162,共5页

以苎麻[Boehmeria nivea（L．）Gaud．]栽培品种芦竹青为材料，经Mse Ⅰ酶切并与相应接头连接，然后与生物素标记的探针（CT）15杂交，再用链亲和素包被磁珠（Dynabeads M-280）捕捉杂交产物，以21碱基接头寡核苷酸为引物经PCR扩增获得... 以苎麻[Boehmeria nivea（L．）Gaud．]栽培品种芦竹青为材料，经Mse Ⅰ酶切并与相应接头连接，然后与生物素标记的探针（CT）15杂交，再用链亲和素包被磁珠（Dynabeads M-280）捕捉杂交产物，以21碱基接头寡核苷酸为引物经PCR扩增获得了双链目的片段，回收300—1000bp DNA片段，然后克隆到pMD18-T载体上，转化至DH5α中，这样就构建了苎麻富含（GA）n微卫星的部分基因组文库。随机挑取36个克隆，以锚定简单重复序列为引物对其进行PCR筛选。测序分析了22个阳性克隆，每个克隆都含有微卫星DNA，阳性克隆率为61．1％，微卫星种类以与探针互补的（GA／CT）n为主，占83．3％，同时还存在（TG／AC）n和三碱基、六碱基为单元构成的苎麻微卫星，如（GAC）n、（ACG）n、（TCT）n、（TCG）n、（GAA）n、（CCGACG）n、（GAGAAA）n等。最后以18个微卫星位点设计了18对苎麻微卫星特异引物。GMCT重复单元的长度从7到40范围内变化，平均为19．2，显示了它们将产生良好多态性，为一种强有力的遗传标记。苎麻微卫星DNA标记可广泛应用于苎麻基因型鉴定，基因和QTL分析，分子标记辅助育种，系谱分析等。 展开更多

关键词 苎麻[Boehmeria nivea(L.)Gaud] 微卫星 磁珠 基因组文库 (CA)n重复序列

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用酵母双杂交筛选与AP-2α相互作用的因子 被引量：5

7

作者 钟英丽 刘云海 +2 位作者 胡翔 肖顺勇 张健 《湖南师范大学自然科学学报》 EI CAS 北大核心 2003年第3期73-77,共5页

AP 2α是重要的转录因子家族AP 2的成员之一.为了研究AP 2α在体内的转录调控方式及与其直接相互作用的蛋白因子,用AP 2α作为饵蛋白通过酵母双杂交系统筛选HeLa细胞的cDNA文库.筛选得到的一个阳性克隆中,经鉴定含有人TESTIN基因cDNA片... AP 2α是重要的转录因子家族AP 2的成员之一.为了研究AP 2α在体内的转录调控方式及与其直接相互作用的蛋白因子,用AP 2α作为饵蛋白通过酵母双杂交系统筛选HeLa细胞的cDNA文库.筛选得到的一个阳性克隆中,经鉴定含有人TESTIN基因cDNA片段自5876bp起始的完整3′端序列.将此TESTIN片段引入GST基因融合系统成功的进行了表达.得到大小约45kD的GST TESTIN融合蛋白,用于多克隆抗体的制备.用Western blot检测TES TIN和AP 2α在HeLa细胞中的表达和定位.结果表明:TESTIN的表达主要在细胞质中,细胞核内也有少量表达;而AP 2α表达主要集中于细胞核内.它们的相互作用可能与AP 2α在细胞内分布及其调控基因转录的方式有关. 展开更多

关键词 转录因子 AP—2α AP—2α 酵母双杂交 GST基因融合系统 CDNA文库 转录调控 基因表达

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动物肽类神经毒素基因工程研究进展 被引量：4

8

作者 聂东宋 梁宋平 李敏 《湖南师范大学自然科学学报》 EI CAS 北大核心 2001年第1期78-83,共6页

介绍了克隆动物肽类神经毒素cDNA和基因组基因克隆的方法 ,以及毒素cDNA结构和毒素蛋白前体的翻译后加工过程 .概述了毒素蛋白基因组基因的结构及其mRNA前体的加工过程 .综述了在毒素蛋白的基因工程方面已取得的进展 。

关键词 肽类神经毒素 CDNA 基因克隆 基因工程 动物神经系统 毒素蛋白基因

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利用飞行时间质谱进行蛋白质和多肽C端序列测定 被引量：5

9

作者 陈平 梁宋平 《湖南师范大学自然科学学报》 EI CAS 北大核心 2001年第1期58-61,共4页

用羧肽酶Y水解蛋白质和多肽 ,结合飞行时间质谱 (MALDI TOF MS)测定酶解后缩短肽的质量 ,根据相邻两肽峰的质量差别读出蛋白质和多肽的C端序列 ,在pmol水平下测定了人促肾上腺皮质激素片段以及人血管紧张肽片段 ,其中人促肾上腺皮质激... 用羧肽酶Y水解蛋白质和多肽 ,结合飞行时间质谱 (MALDI TOF MS)测定酶解后缩短肽的质量 ,根据相邻两肽峰的质量差别读出蛋白质和多肽的C端序列 ,在pmol水平下测定了人促肾上腺皮质激素片段以及人血管紧张肽片段 ,其中人促肾上腺皮质激素片段测到了C端 展开更多

关键词 飞行时间质谱 C端测序 羧肽酶Y 蛋白质 多肽 序列测定 结构 生理活性

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基因研究140年大事年表 被引量：3

10

作者 王身立 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2001年第1期69-77,共9页

关键词 基因研究 大事年表 遗传学 植物杂交 染色体 基因工程 遗传因子

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戊型肝炎病毒ORF2片段在毕赤酵母中的分泌表达及活性鉴定

11

作者 刘如石 邱义兰 +3 位作者 杨坤宇 梁良 张军 夏宁邵 《湖南师范大学自然科学学报》 EI CAS 北大核心 2005年第2期57-61,共5页

　为了寻求新型表达系统来研制戊型肝炎病毒基因工程疫苗,利用Pichiapastoris表达系统表达戊型肝炎病毒(HEV)结构区ORF2基因.利用PCR扩增HEVORF2基因,然后将ORF2基因按正确的阅读框融合到Pichiapastoris分泌型表达载体pPIC9K的а因子信... 　为了寻求新型表达系统来研制戊型肝炎病毒基因工程疫苗,利用Pichiapastoris表达系统表达戊型肝炎病毒(HEV)结构区ORF2基因.利用PCR扩增HEVORF2基因,然后将ORF2基因按正确的阅读框融合到Pichiapastoris分泌型表达载体pPIC9K的а因子信号肽编码序列3′端,重组表达载体在电击转化毕赤酵母,经过含G418的营养缺陷型培养基(RDB)筛选、重组酵母基因组总DNA进行PCR鉴定后,证实HEVORF2基因已经整合到酵母基因组中并得到重组转化子.表型鉴定后对G418具有不抗性的重组菌株诱导表达,用双抗体夹心法ELISA筛选了表达外源蛋白的重组菌株,再经SDS PAGE与Westernblot证实ORF2基因在Pichiapastoris中实现了分泌表达,而且重组蛋白具有较强的特异性与生物学活性;同时用双抗体夹心法证实在Pichiapastoris表达的上清中存在衣壳蛋白聚体. 展开更多

关键词 戊型肝炎病毒 衣壳蛋白 重组毕赤酵母

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脯氨酸乙内酰硫脲 (TH-Pro)的一种制备新方法

12

作者 刘宇 梁宋平 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 2000年第4期66-70,共5页

采用L 脯氨酸 (L Pro)为原料 ,硫氰酸铵 (NH4 SCN)为偶联试剂 ,制备脯氨酸乙内酰硫脲 (TH Pro) .产物经过反相HPLC纯化 ,并通过紫外光谱扫描 ,质谱和核磁共振等方法鉴定 ,证明成功制备了脯氨酸乙内酰硫脲 ,并对其反应机理进行了阐述 .... 采用L 脯氨酸 (L Pro)为原料 ,硫氰酸铵 (NH4 SCN)为偶联试剂 ,制备脯氨酸乙内酰硫脲 (TH Pro) .产物经过反相HPLC纯化 ,并通过紫外光谱扫描 ,质谱和核磁共振等方法鉴定 ,证明成功制备了脯氨酸乙内酰硫脲 ,并对其反应机理进行了阐述 .经过对反应条件的优化 ,使产率达到了 84 %. 展开更多

关键词 L-脯氨酸 硫氰酸氨 脯氨酸乙内酰硫脲 反相HPLC 质谱 核磁共振

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高产超氧化物歧化酶芽孢杆菌C328菌株产酶培养基的研究

13

作者 丁学知 高必达 《湖南师范大学自然科学学报》 EI CAS 北大核心 2003年第4期65-69,共5页

研究了芽孢杆菌(Bacilluscereus)C328SOD(Superoxidedismutase)生产菌株在发酵培养过程中培养基种类、碳氮比以及补充碳氮源对产酶的影响.结果表明,C328菌株发酵产酶率与培养基种类、复配碳氮比有密切关系.培养基浓度为10%时,对菌株生... 研究了芽孢杆菌(Bacilluscereus)C328SOD(Superoxidedismutase)生产菌株在发酵培养过程中培养基种类、碳氮比以及补充碳氮源对产酶的影响.结果表明,C328菌株发酵产酶率与培养基种类、复配碳氮比有密切关系.培养基浓度为10%时,对菌株生长及产酶有明显的促进作用,超过13%则抑制SOD酶产生.筛选出最佳产酶发酵农副产品培养基和优化配比组合产酶培养基. 展开更多

关键词 超氧化物歧化酶 芽孢杆菌C328 培养基 产酶 发酵

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ω-芋螺毒素MVIIA/虎纹捕鸟蛛毒素-I嵌合体HM-1227的合成及活性测定 被引量：1

14

作者 汤辉 王贤纯 梁宋平 《湖南师范大学自然科学学报》 EI CAS 北大核心 2002年第3期68-71,共4页

用Fmoc固相多肽合成的方法手工合成了一种ω 芋螺毒素MVIIA和虎纹捕鸟蛛毒素 I的嵌合体HM 1 2 2 7,经过RP HPLC纯化和氧化复性 ,小鼠隔神经 隔肌标本的阻断实验显示此嵌合体能实现二硫键完全配对与稳定折叠并具有微弱的神经毒活性 .实... 用Fmoc固相多肽合成的方法手工合成了一种ω 芋螺毒素MVIIA和虎纹捕鸟蛛毒素 I的嵌合体HM 1 2 2 7,经过RP HPLC纯化和氧化复性 ,小鼠隔神经 隔肌标本的阻断实验显示此嵌合体能实现二硫键完全配对与稳定折叠并具有微弱的神经毒活性 .实验结果表明 ,ω CtxMVIIA和HWTX I的分子框架稳定 ,部分序列交换后仍能实现二硫键配对与折叠 。 展开更多

关键词 HM-1227 活性测定 ω-芋螺毒素MVIIA 虎纹捕鸟蛛毒素-I 嵌合体 固相多肽合成 多肽类神经毒素 蛋白质工程

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