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高糖对人脐静脉内皮细胞NADPH氧化酶表达和活性氧生成的影响
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作者 王蕾 苏华斌 +1 位作者 卢琼 吴和平 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1253-1258,共6页
目的:探讨高糖对内皮细胞活性氧生成和NADPH氧化酶(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase,NOX)表达的影响。方法:本实验以人脐静脉内皮细胞为研究对象,分为正常对照组、20 mmol/L甘露醇处理4 h高渗对照组、20 mmol/L葡... 目的:探讨高糖对内皮细胞活性氧生成和NADPH氧化酶(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase,NOX)表达的影响。方法:本实验以人脐静脉内皮细胞为研究对象,分为正常对照组、20 mmol/L甘露醇处理4 h高渗对照组、20 mmol/L葡萄糖处理2 h组、20 mmol/L葡萄糖处理4 h组、20 mmol/L葡萄糖处理6 h组和NOX特异性抑制剂二苯基碘(diphenylene iodonium,DPI)5 mol/L预处理0.5 h再加入20 mmol/L葡萄糖处理组(DPI预处理组)。用流式细胞仪检测各组细胞内活性氧的浓度;反转录聚合酶链反应及Western印迹法分别检测各组细胞内NOX各亚基m RNA和蛋白的表达变化。结果:1)与正常对照组相比,20 mmol/L葡萄糖处理2,4和6 h组活性氧增高(均P<0.05),而DPI组活性氧生成与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);2)与正常对照组相比,20 mmol/L葡萄糖处理4 h组NOX4 m RNA和蛋白的表达明显增加(均P<0.05),NADPH氧化酶亚基NOX2,P67phox,P22phox和Rac表达差异均无统计学意义(均P>0.05);3)与正常对照组相比,DPI预处理组NOX4,NOX2,P67phox,P22phox和Rac表达差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:高糖可能通过上调NOX4表达以增加活性氧生成而发挥氧化应激作用。 展开更多
关键词 尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶 活性氧 葡萄糖 二苯基碘
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白藜芦醇对人胚肺成纤维细胞株MRC-5生长的抑制作用 被引量:9
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作者 刘理静 钱红 +1 位作者 张平 王在岩 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期673-679,共7页
目的探讨白藜芦醇(Res)对人胚肺成纤维细胞生长的抑制作用及相关机制。方法以人胚肺成纤维细胞MRC-5为研究对象,分别予20μL二甲基亚砜(DMSO)及0、12.5、25、50、100、200μmol·L-1Res处理细胞24、48、72 h,通过MTT法分析细胞增殖... 目的探讨白藜芦醇(Res)对人胚肺成纤维细胞生长的抑制作用及相关机制。方法以人胚肺成纤维细胞MRC-5为研究对象,分别予20μL二甲基亚砜(DMSO)及0、12.5、25、50、100、200μmol·L-1Res处理细胞24、48、72 h,通过MTT法分析细胞增殖抑制率。另外,以20μL DMSO(溶媒组)及50、100μmol·L-1Res孵育细胞48 h,采用流式细胞术检测细胞周期和凋亡率,行原位缺口末端标记法(TUNEL)测定细胞凋亡指数(AI),应用荧光实时定量PCR和Western blot分别检测细胞周期蛋白D1(cell cycle protein D1,Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)mRNA与蛋白表达,Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果随着Res浓度的升高和处理时间的延长,细胞增殖抑制率逐渐增加(P<0.01)。在共同培养48h后,50、100μmol·L-1Res处理组S、G2/M期DNA比例及Cyclin D1、CDK4 mRNA与蛋白表达水平、Bcl-2蛋白表达水平降低,而G0/G1期DNA比例、AI、凋亡率及Bax蛋白表达水平增加,与溶媒组比较,差异均有显著性(P<0.01),并且100μmol·L-1Res效果强于50μmol·L-1(P<0.01)。结论Res能抑制MRC-5细胞增殖,其机制可能与阻碍细胞周期进展及促进细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 白藜芦醇 人胚肺成纤维细胞 增殖 细胞周期 凋亡 细胞周期蛋白D1
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大黄素对肺纤维化大鼠的保护作用及部分机制研究 被引量:50
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作者 刘理静 钱红 张平 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期266-272,共7页
目的观察大黄素对博莱霉素所致大鼠肺纤维化的影响,并探讨其保护机制。方法将60只♂SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组、大黄素低剂量干预组、大黄素高剂量干预组和泼尼松组,每组10只,后4组经气管内注入博莱霉素建立大鼠肺纤... 目的观察大黄素对博莱霉素所致大鼠肺纤维化的影响,并探讨其保护机制。方法将60只♂SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组、大黄素低剂量干预组、大黄素高剂量干预组和泼尼松组,每组10只,后4组经气管内注入博莱霉素建立大鼠肺纤维化模型,从d 2开始,低、高剂量干预组大鼠分别予20、80 mg·kg-1大黄素2 m L灌胃,泼尼松组以5 mg·kg-1醋酸泼尼松2 m L灌胃,其余2组予2m L生理盐水灌胃,d 28处死所有大鼠,取出肺组织行HE染色和Masson染色,测定肺组织羟脯氨酸(HYP)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)含量,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-6、IL-17浓度,通过Western blot分析肺组织中Kelch样ECH联合蛋白1(Keap 1)、NF-E2相关因子2(Nrf2)、核因子-κB(NF-κB)p65表达。结果低、高剂量干预组及泼尼松组肺泡炎症和肺纤维化程度明显轻于模型组(P<0.05或P<0.01)。与正常对照组或假手术组比较,模型组肺组织HYP、MDA含量、胞核Nrf2、NF-κB p65表达水平及血清TNF-α、IL-6、IL-17浓度增加(P<0.01),而肺组织SOD、GSH-Px、CAT含量及胞质Keap 1表达水平降低(P<0.01)。经低、高剂量大黄素或泼尼松处理后,肺组织HYP、MDA含量、胞质Keap 1表达水平、胞核NF-κB p65表达水平及血清TNF-α、IL-6、IL-17浓度减少,肺组织SOD、GSH-Px、CAT含量及胞核Nrf2表达水平升高,与模型组比较,差异均有显著性(P<0.01)。高剂量干预组、泼尼松组上述指标改善程度优于低剂量干预组(P<0.05),但高剂量干预组与泼尼松组比较,差异无显著性(P>0.05)。结论大黄素可能通过增强抗氧化能力及抑制炎症反应对肺纤维化大鼠产生保护作用。 展开更多
关键词 大黄素 肺纤维化 羟脯氨酸 NF-E2相关因子2 氧化应激 核因子-ΚB 炎症反应
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上调miR-21表达促进肺成纤维细胞增殖和胶原蛋白合成 被引量:20
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作者 刘理静 钱红 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期918-922,共5页
目的探讨miR-21在肺纤维化小鼠肺组织中的表达及其在肺成纤维细胞增殖、转分化、胶原蛋白合成中的作用。方法将30只C57BL/6小鼠随机分为对照组(n=5)和模型组(n=25)。经气管内注入博莱霉素A5建立肺纤维化模型,分别于第3、7、14、28... 目的探讨miR-21在肺纤维化小鼠肺组织中的表达及其在肺成纤维细胞增殖、转分化、胶原蛋白合成中的作用。方法将30只C57BL/6小鼠随机分为对照组(n=5)和模型组(n=25)。经气管内注入博莱霉素A5建立肺纤维化模型,分别于第3、7、14、28、56天随机处死5只小鼠,而对照组于第56天全部处死作为总体对照,采用荧光实时定量PCR测定肺组织中miR-21表达。另外,NIH3T3肺成纤维细胞分别予Lipofectamine^TM 2000转染试剂(空白对照组)以及miR-21阴性对照物、模拟物、抑制物处理,通过MTY法检测细胞增殖能力,应用荧光实时定量PCR和Western blot法分别检测d平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、含1型血小板结合蛋白基序的去整合素和金属蛋白酶1(ADAMTS-1)、1型胶原蛋白(Coll)、3型胶原蛋白(C013)mRNA与蛋白表达情况。结果模型组第7~56天,肺组织中miR-21表达水平明显高于对照组,第28天达到高峰。在共同培养24、48、72、96h后,miR-21模拟物组细胞活力较空白对照组增加,而miR-21抑制物组细胞活力较空白对照组降低。与空白对照组比较,miR-21模拟物组α-SMA、Coll、CoBmRNA与蛋白表达水平升高,ADAMTS-1 mRNA与蛋白表达水平减少;然而miR-21抑制物组α-SMA、Coll、Co13 mRNA与蛋白表达水平下降,ADAMTS-1 mRNA与蛋白表达水平上升。阴性对照组上述指标与空白对照组比较,无显著性差异。结论miR-21在肺纤维化小鼠肺组织中表达上调,miR-21高表达可促进肺成纤维细胞增殖、转分化以及胶原蛋白的合成。 展开更多
关键词 MIR-21 肺纤维化 Α平滑肌肌动蛋白 ADAMTS-1 1型胶原蛋白 3型胶原蛋白
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