甘蓝型油菜fad2基因片段的克隆和反义表达载体的构建 被引量：14

1

作者 熊兴华 官春云 +3 位作者 李栒 王学军 周小云 李家洋 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期1-4,共4页

从甘蓝型油菜湘油 15号基因组中分离总DNA ,以此为模板进行多聚酶链式反应 (PCR)。PCR产物与克隆载体 pGEM -TEasy连接 ,经NotI酶切后插入 pBluescriptIISK +。序列测定表明 ,PCR产物为 6 5 4bp的DNA片段 ,fad2基因片段只朝 pBluescript... 从甘蓝型油菜湘油 15号基因组中分离总DNA ,以此为模板进行多聚酶链式反应 (PCR)。PCR产物与克隆载体 pGEM -TEasy连接 ,经NotI酶切后插入 pBluescriptIISK +。序列测定表明 ,PCR产物为 6 5 4bp的DNA片段 ,fad2基因片段只朝 pBluescriptIISK +的T3-T7方向插入 ,经BamHI和SacI酶切后插入表达载体质粒pBI12 1相同的酶切位点 ,构建反义 fad2表达载体。 展开更多

关键词 FAD2基因 反义表达载体 甘蓝型油菜 PCR 基因克隆

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由ACC合成酶反义基因转化所得枣树其RNA表达量的测定 被引量：7

2

作者 何业华 林顺权 +2 位作者 林良斌 熊兴华 今石浩正 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期112-114,共3页

利用real timeRT PCR对转基因枣树中的anti ACSG的RNA表达量进行了定量测定.样品扩增产物荧光量随着扩增循环数的增加而呈现"S"形增加;经熔解曲线分析,其扩增产物中未检出非特异性产物和引物二聚体;扩增产物的CT值和模板cDNA... 利用real timeRT PCR对转基因枣树中的anti ACSG的RNA表达量进行了定量测定.样品扩增产物荧光量随着扩增循环数的增加而呈现"S"形增加;经熔解曲线分析,其扩增产物中未检出非特异性产物和引物二聚体;扩增产物的CT值和模板cDNA起始浓度两者之间呈线性相关(R2=0.9929);转化体中anti ACSGRNA表达量约为4500～10300拷贝/g组织. 展开更多

关键词 REAL-TIMEPCR RT-PCR 反义-ACSG RNA 定量分析 枣树 ACC合成酶 反义基因

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OsWAX2基因的植物表达载体构建及遗传转化 被引量：4

3

作者 向建华 高国赋 +3 位作者 周小云 刘爱玲 邹杰 陈信波 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期639-645,共7页

利用拟南芥的WAX2基因序列,BLAST检索出3个水稻同源基因,分别命名为OsWAX2-1,OsWAX2-2,OsWAX2-3,与拟南芥WAX2基因的同源性分别为56.0%,55.2%,52.0%;其预测的编码蛋白与WAX2蛋白的同源性分别为61.5%,60.5%,64.7%.这3个蛋白都存在4个跨... 利用拟南芥的WAX2基因序列,BLAST检索出3个水稻同源基因,分别命名为OsWAX2-1,OsWAX2-2,OsWAX2-3,与拟南芥WAX2基因的同源性分别为56.0%,55.2%,52.0%;其预测的编码蛋白与WAX2蛋白的同源性分别为61.5%,60.5%,64.7%.这3个蛋白都存在4个跨膜结构和2个固醇去饱和酶的保守区,说明这3个蛋白质都属于跨膜蛋白,并可能与角质层的蜡质合成有关.从全长cDNA数据库检索获得了3个OsWAX2的全长cDNA.以pCAMBIA-1300-multi为载体,构建了CaMV35S启动子驱动的3个OsWAX2的过表达载体pOEOSW2-1,pOEOSW2-2,pOEOSW2-3及3个RNAi表达载体pCROSW2-1,pCROSW2-2,pCROSW2-3,并通过冻融法将6个表达载体转化到根癌农杆菌EHA105,LBA4404和GV3101中,采用农杆菌介导法进行水稻日本晴品种的遗传转化,得到了具有Hyg抗性的水稻转基因苗,PCR检测到阳性植株. 展开更多

关键词 水稻 OsWAX2基因 过表达 RNAI 遗传转化

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转基因抗虫油菜的ELISA分析 被引量：5

4

作者 林良斌 周小云 +1 位作者 官春云 王学军 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期179-181,共3页

为选育高效抗虫油菜新品种 ,采用酶联免疫吸附法检测 Bt杀虫蛋白基因在转基因油菜植株中的表达 .结果表明 ,Bt杀虫蛋白基因在转基因抗虫油菜植株的表达随植株生长时期不同而发生变化 .在第 3～ 9叶期 Bt杀虫蛋白基因稳定、高效地表达 ,B... 为选育高效抗虫油菜新品种 ,采用酶联免疫吸附法检测 Bt杀虫蛋白基因在转基因油菜植株中的表达 .结果表明 ,Bt杀虫蛋白基因在转基因抗虫油菜植株的表达随植株生长时期不同而发生变化 .在第 3～ 9叶期 Bt杀虫蛋白基因稳定、高效地表达 ,Bt杀虫蛋白的表达量为 6 .6 8～ 10 .5 2 ng/ m g(以鲜叶计 ) ,占植物可溶性蛋白的0 .0 6 7%～ 0 .10 5 % .但从第 11叶期后 Bt杀虫蛋白表达量显著地降低 ,只有 0 .2 8～ 2 .0 0 ng/ mg,占植物可溶性蛋白的 0 .0 0 3%～ 0 .0 2 0 % 展开更多

关键词 转基因油菜 Bt杀虫蛋白基因 酶联免疫吸附法 ELISA 基因表达

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甘蓝型油菜GPAT6基因启动子的克隆与表达载体构建 被引量：1

5

作者 胡学芳 刘聪 +1 位作者 肖旦望 熊兴华 《作物研究》 2014年第5期467-471,共5页

通过同源PCR克隆的方法,首次从甘蓝型油菜中克隆了甘油-3-磷酸酰基转移酶6(sn-glycerol-3-phosphate acyltransferase 6,GPAT6)基因长1 110 bp的启动子,并将其成功构建到植物表达载体pBI121上。重组载体可用于转化拟南芥,探究甘蓝型油菜... 通过同源PCR克隆的方法,首次从甘蓝型油菜中克隆了甘油-3-磷酸酰基转移酶6(sn-glycerol-3-phosphate acyltransferase 6,GPAT6)基因长1 110 bp的启动子,并将其成功构建到植物表达载体pBI121上。重组载体可用于转化拟南芥,探究甘蓝型油菜GPAT6基因的组织表达特征。 展开更多

关键词 甘蓝型油菜 GPAT6基因 启动子 基因克隆 表达载体构建

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水稻OsWAX2-1基因过表达及RNAi研究 被引量：1

6

作者 高国赋 陈信波 +2 位作者 刘爱玲 周小云 邹杰 《湖南农业科学》 2008年第3期1-3,共3页

为了研究水稻OsWAX2-1基因的功能,采用农杆菌介导法,以日本晴为材料,利用OsWAX2-1基因过表达及RNAi载体进行了遗传转化,并以PCR及半定量RT-PCR方法对具有Hyg抗性的转基因水稻植株进行了检测,结果表明:OsWAX2-1基因及RNAi片段均已整合到... 为了研究水稻OsWAX2-1基因的功能,采用农杆菌介导法,以日本晴为材料,利用OsWAX2-1基因过表达及RNAi载体进行了遗传转化,并以PCR及半定量RT-PCR方法对具有Hyg抗性的转基因水稻植株进行了检测,结果表明:OsWAX2-1基因及RNAi片段均已整合到水稻基因组,RT-PCR检测到转OsWAX2-1基因在T1代转基因水稻中有不同程度的过表达,为进一步研究OsWAX2-1基因的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 水稻 农杆菌介导法 过表达 RNAI RT—PCR

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籼稻R996转Pi9基因纯系的筛选及稻瘟病抗性鉴定

7

作者 潘素君 李魏 +1 位作者 高佳 戴良英 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期589-592,共4页

采用农杆菌介导法将抗稻瘟病Pi9基因导入籼稻品种R996,获得转基因植株,并对这些转基因植株进行遗传分析。结果表明:Pi9基因已经整合到受体细胞基因组中,并在转录水平上得到了有效表达;对转基因植株后代进行潮霉素抗性、GUS染色和PCR检... 采用农杆菌介导法将抗稻瘟病Pi9基因导入籼稻品种R996,获得转基因植株,并对这些转基因植株进行遗传分析。结果表明:Pi9基因已经整合到受体细胞基因组中,并在转录水平上得到了有效表达;对转基因植株后代进行潮霉素抗性、GUS染色和PCR检测分析,鉴定出Pi9基因阳性转化子;经稻瘟病抗性鉴定,从T1代符合孟德尔分离比(1∶2∶1)的分离群体中,成功筛选出转Pi9基因的籼稻R996纯系。 展开更多

关键词 籼稻R996 Pi9基因 转基因植株 稻瘟病抗性

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禽流感抗原基因NA导入生菜的研究 被引量：1

8

作者 范亚丽 李进 +1 位作者 阮颖 刘春林 《湖南农业科学》 2012年第3期13-16,共4页

以生菜子叶为转化受体材料,利用农杆菌介导的方法将禽流感抗原基因NA导入生菜,通过用特异引物进行PCR检测,获得6株转基因植株。经PT-PCR检测,证明外源基因已整合到了生菜基因组中,且能够正常表达。

关键词 禽流感抗原基因NA 农杆菌介导遗传转化 生菜

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甘蓝型油菜BnGPAT9基因表达模式及其苗期非生物胁迫表达分析 被引量：6

9

作者 邢蔓 周雪晴 +6 位作者 何婷 张泽荣 岳宁燕 曾祥拱 邬贤梦 官春云 熊兴华 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期454-461,共8页

为揭示油菜BnGPAT9基因的功能及其在非生物胁迫中的表达变化,克隆甘蓝型油菜BnGPAT9基因(GenBank:KX344511.1)并分析表达模式。发现该基因全长1 131bp,编码376个氨基酸残基。序列比对及系统进化树分析表明BnGPAT9与其它植物的GPAT9有很... 为揭示油菜BnGPAT9基因的功能及其在非生物胁迫中的表达变化,克隆甘蓝型油菜BnGPAT9基因(GenBank:KX344511.1)并分析表达模式。发现该基因全长1 131bp,编码376个氨基酸残基。序列比对及系统进化树分析表明BnGPAT9与其它植物的GPAT9有很大的相似性,在生物进化过程中具有很高的保守性。实时荧光定量PCR分析表明,BnGPAT9基因在甘蓝型油菜中的表达具有组织特异性,在开花后1~4周幼嫩的种子中表达较强,而在茎、花、叶、根和角果皮中表达较弱;5~6片真叶期盆栽苗的非生物胁迫表达分析显示,短期干旱和高温能够诱导和促进叶片BnGPAT9基因的表达;低温、6-BA、ABA和盐胁迫抑制其表达;水渍对BnGPAT9基因的表达影响呈"Z"字形,12h出现最低值,但24h后又开始回升。 展开更多

关键词 甘蓝型油菜 甘油三磷酸酰基转移酶 BnGPAT9基因 表达分析 逆境胁迫

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GEO水稻相关基因表达数据研究现状

10

作者 李嘉平 张先文 陈信波 《湖南农业科学》 2012年第5期4-6,共3页

水稻基因表达数据为深入研究水稻基因的表达调控提供了必要的条件。GEO(Gene Expression Omnibus)数据库目前已经积累了相当数量的水稻基因表达数据,但没有相关的数据统计信息。针对GEO数据库中与水稻相关的平台、样品、系列数据进行了... 水稻基因表达数据为深入研究水稻基因的表达调控提供了必要的条件。GEO(Gene Expression Omnibus)数据库目前已经积累了相当数量的水稻基因表达数据,但没有相关的数据统计信息。针对GEO数据库中与水稻相关的平台、样品、系列数据进行了统计和总结,综述了目前的研究动态,以及未来的发展趋势,为新研究的开展提供了参考。 展开更多

关键词 GEO 水稻 基因表达数据

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稻叶表皮蜡质提取方法及含量的比较 被引量：25

11

作者 周小云 陈信波 +3 位作者 徐向丽 刘爱玲 邹杰 高国赋 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期273-276,共4页

以水稻成熟叶片为材料,用氯仿和正己烷两种溶剂,采用常温法、加热法和常温加热结合法提取稻叶表皮蜡质.结果表明,氯仿作溶剂的提取效果好于正己烷,常温加热结合法提取表皮蜡质含量最高,加热法居中,常温法最低.扫描电镜观察结果表明,采... 以水稻成熟叶片为材料,用氯仿和正己烷两种溶剂,采用常温法、加热法和常温加热结合法提取稻叶表皮蜡质.结果表明,氯仿作溶剂的提取效果好于正己烷,常温加热结合法提取表皮蜡质含量最高,加热法居中,常温法最低.扫描电镜观察结果表明,采用常温加热结合法,用两种溶剂都能将叶表皮蜡质完全提取干净;采用加热法,用氯仿为溶剂能将叶表皮蜡质提取干净,而用正己烷为溶剂,叶片表皮蜡质还有少量呈不规则的小粒状残存;用常温法则两种溶剂都不能将稻叶表皮蜡质提取干净.提取时间对蜡质提取效果有明显影响,高温下(氯仿60℃或正己烷67℃)提取超过30 s,导致细胞内脂溶性成分渗出.综合蜡质含量和扫描电镜分析的结果,以氯仿为溶剂、60℃30 s提取是有效且简单易行的稻叶表皮蜡质提取方法. 展开更多

关键词 水稻 表皮蜡质 氯仿 正己烷 显微结构

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油菜RAPD反应体系的优化研究 被引量：10

12

作者 刘春林 阮颖 +2 位作者 官春云 周小云 王学军 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期432-433,共2页

针对 RAPD反应体系中 Taq聚合酶、d NTP和引物这 3个影响较大的因素 ,设计了一组 3因素 3水平试验 .根据试验结果 ,筛选出了油菜 random amplified polymorphic DNA(RAPD)反应体系中 3因素的最佳浓度配比 ,即 Taq 1.6 U ,d NTP 0 .2 mm ... 针对 RAPD反应体系中 Taq聚合酶、d NTP和引物这 3个影响较大的因素 ,设计了一组 3因素 3水平试验 .根据试验结果 ,筛选出了油菜 random amplified polymorphic DNA(RAPD)反应体系中 3因素的最佳浓度配比 ,即 Taq 1.6 U ,d NTP 0 .2 mm ol/ L ,引物 0 .3μm ol/ L . 展开更多

关键词 油菜 优化 RAPD反应体系

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植物硫代葡萄糖苷-黑芥子酶底物酶系统 被引量：22

13

作者 阮颖 周朴华 刘春林 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期18-23,78,共7页

硫代葡萄糖苷-黑芥子酶系统是十字花科植物中一种特有的底物酶系统.在植物体内,硫代葡萄糖苷存在于液泡中,而黑芥子酶分布在特定的黑芥子酶细胞中.在细胞内,黑芥子酶往往与黑芥子酶结合蛋白和黑芥子酶协助蛋白形成黑芥子酶复合体催化硫... 硫代葡萄糖苷-黑芥子酶系统是十字花科植物中一种特有的底物酶系统.在植物体内,硫代葡萄糖苷存在于液泡中,而黑芥子酶分布在特定的黑芥子酶细胞中.在细胞内,黑芥子酶往往与黑芥子酶结合蛋白和黑芥子酶协助蛋白形成黑芥子酶复合体催化硫代葡萄糖苷的水解.当植物组织受到损伤时,硫代葡萄糖苷与黑芥子酶直接接触,并使硫代葡萄糖苷水解为异硫氰酸、腈等有毒物质来保护自身免遭食草动物进一步的伤害. 展开更多

关键词 芥子油苷 黑芥子酶 底物酶系统

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油菜菌核病致病机理研究进展 被引量：7

14

作者 张源 阮颖 +2 位作者 彭琦 伍林涛 刘春林 《作物研究》 2006年第5期549-551,共3页

将核盘菌的侵染分为三个阶段:前腐生期、致病期、后腐生期。在前腐生期核盘菌产生附着胞分泌水解酶软化细胞壁,为致病期的菌丝生长提供条件,菌丝的生长导致整个环境的改变,当菌丝在植物中占主导地位时核盘菌进入后腐生期,水解的产物诱... 将核盘菌的侵染分为三个阶段:前腐生期、致病期、后腐生期。在前腐生期核盘菌产生附着胞分泌水解酶软化细胞壁,为致病期的菌丝生长提供条件,菌丝的生长导致整个环境的改变,当菌丝在植物中占主导地位时核盘菌进入后腐生期,水解的产物诱导了菌核的产生,核盘菌生命周期完成。 展开更多

关键词 油菜 菌核病 多聚半乳糖醛酸酶 草酸 CAMP

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根癌农杆菌对结球白菜的转化 被引量：2

15

作者 成细华 周小云 +1 位作者 刘凡 姚磊 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期463-466,共4页

为了给外源有用基因导入结球白菜并高效稳定地表达提供依据 ,以结球白菜的子叶—子叶柄为外植体 ,采用农杆菌共培养法把外源基因 C5 8/ p V11导入结球白菜 .在选择最优的转化条件——根癌农杆菌侵染外植体 15min,农杆菌培养和共培养时... 为了给外源有用基因导入结球白菜并高效稳定地表达提供依据 ,以结球白菜的子叶—子叶柄为外植体 ,采用农杆菌共培养法把外源基因 C5 8/ p V11导入结球白菜 .在选择最优的转化条件——根癌农杆菌侵染外植体 15min,农杆菌培养和共培养时在培养基中均加入 AS,培养基 p H为 5 .2 ,共培养 3d的条件下 ,获得转基因植株 .其中抗性植株的抗草丁膦试验、转基因植株 DNA的 PCR及 PCR- Southern斑点杂交鉴定等结果表明 ,5 0 %的抗性植株的基因组中有外源基因的整合 . 展开更多

关键词 根癌农杆菌 结球白菜 转基因植株 筛选

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植物抗病机制与信号传导研究进展 被引量：4

16

作者 李智强 戴良英 +1 位作者 刘雄伦 王国梁 《作物研究》 2011年第5期526-530,共5页

植物抗病分子机制与信号传导途径的研究一直是分子植物病理学关注的热点,近十年来,该领域的研究取得了显著进展。本文主要从植物抗病基因与病原菌无毒基因的分子克隆与结构分析、二者之间互作模型、SA信号传导途径与JA信号传导途径的研... 植物抗病分子机制与信号传导途径的研究一直是分子植物病理学关注的热点,近十年来,该领域的研究取得了显著进展。本文主要从植物抗病基因与病原菌无毒基因的分子克隆与结构分析、二者之间互作模型、SA信号传导途径与JA信号传导途径的研究等方面概述了植物抗病机制的研究进展。 展开更多

关键词 植物 抗病机制 信号传导 抗病基因

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野生细叶结缕草再生体系的建立 被引量：1

17

作者 张瑜 杨知建 +1 位作者 张志扬 张志飞 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期105-108,共4页

以适合南方地区夏季种植的采自泰国北部的一种野生的细叶结缕草为供试材料,以匍匐茎节为外植体建立其再生体系.结果表明:在MS基本培养基上添加5.0 mg/L 2,4-D和NB培养基上添加0.2 mg/L IAA所产生的愈伤组织最好,而添加2.0 mg/L 2,4-D+1.... 以适合南方地区夏季种植的采自泰国北部的一种野生的细叶结缕草为供试材料,以匍匐茎节为外植体建立其再生体系.结果表明:在MS基本培养基上添加5.0 mg/L 2,4-D和NB培养基上添加0.2 mg/L IAA所产生的愈伤组织最好,而添加2.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L BA时分化效果最好,1/2MS+0.5 mg/L NAA培养基最适于生根. 展开更多

关键词 野生细叶结缕草 组织培养 诱导 分化

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烟草中主要挥发酸的分析方法 被引量：2

18

作者 彭艳 廖雅桦 +1 位作者 肖遂 柳立 《作物研究》 2012年第6期675-678,共4页

以云南4个产区(曲靖、昭通、文山和昆明)云烟87的C3F初烤烟叶为对象,比较了常见的5种不同挥发性有机酸的提取和分离方法(水蒸气蒸馏法、超声波提取法、酸碱分离法、同时蒸馏萃取法以及同时蒸馏萃取和酸碱分离相结合的方法)的差别。结果... 以云南4个产区(曲靖、昭通、文山和昆明)云烟87的C3F初烤烟叶为对象,比较了常见的5种不同挥发性有机酸的提取和分离方法(水蒸气蒸馏法、超声波提取法、酸碱分离法、同时蒸馏萃取法以及同时蒸馏萃取和酸碱分离相结合的方法)的差别。结果表明:在前处理方法选择上,以同时蒸馏萃取和酸碱分离相结合提取效果最佳,且在定量分析上有较好的回收率和重复性,实验结果可信,可以用于烟草样品挥发性有机酸的定性定量分析。 展开更多

关键词 烤烟 挥发酸 分析方法

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亚麻韧皮纤维细胞发育分子生物学研究进展 被引量：2

19

作者 李翔 陈信波 +2 位作者 邹杰 龙松华 邓欣 《湖南农业科学》 2011年第5期4-7,共4页

亚麻纤维是初生韧皮纤维,具有良好的纺织性能。由于亚麻具有二倍体、植株小、基因组小、自花授粉等特点,作为研究韧皮纤维发育的模式植物。亚麻韧皮纤维细胞的发育,经历细胞延长和次生细胞壁加厚两个不重叠时期。形态学上这两阶段是被... 亚麻纤维是初生韧皮纤维,具有良好的纺织性能。由于亚麻具有二倍体、植株小、基因组小、自花授粉等特点,作为研究韧皮纤维发育的模式植物。亚麻韧皮纤维细胞的发育,经历细胞延长和次生细胞壁加厚两个不重叠时期。形态学上这两阶段是被分界点(the snap point)分开的,分界点以上细胞伸长,分界点以下的细胞次生细胞壁加厚。这两个时期决定了韧皮纤维的长度和强度,对纤维的品质起着重要作用。综述了亚麻韧皮纤维细胞这两个发育时期的分子生物学方面的研究进展。 展开更多

关键词 亚麻 韧皮纤维 次生细胞壁 分界点

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水稻耐热性研究进展 被引量：10

20

作者 王加龙 陈信波 《湖南农业科学》 2006年第6期23-26,共4页

综述了高温热害对水稻生长发育及生理生化特性的影响、水稻高温适应及水稻耐热性遗传研究进展,介绍了克服水稻高温危害的技术措施,提出了今后水稻耐热性研究的主要方向。

关键词 水稻 高温热害 耐热性

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