目的:法尼酯X受体(farnesoid X receptor,FXR)是配体激活转录因子核受体超家族成员,属于胆汁酸受体。FXR在肾组织中表达,可通过调节糖脂代谢、抑制炎症反应、拮抗氧化应激及肾纤维化等机制减轻肾损伤。但FXR是否参与肾脏疾病中的自噬尚...目的:法尼酯X受体(farnesoid X receptor,FXR)是配体激活转录因子核受体超家族成员,属于胆汁酸受体。FXR在肾组织中表达,可通过调节糖脂代谢、抑制炎症反应、拮抗氧化应激及肾纤维化等机制减轻肾损伤。但FXR是否参与肾脏疾病中的自噬尚不明确。本研究旨在探讨FXR在顺铂所致急性肾损伤中的作用,并探讨其机制是否与调控自噬相关。方法:选取12周雄性野生型(wild type,WT)或FXR基因敲除(knockout ofFXR,FXR-KO)小鼠各12只,随机分为WT组、WT+顺铂组、FXR-KO组、FXR-KO+顺铂组,每组6只,WT+顺铂组和FXR-KO+顺铂组予腹腔注射顺铂(20 mg/kg),WT组和FXR-KO组予腹腔注射等体积的顺铂溶剂。72 h后处死小鼠,留取血液和肾组织标本。采用免疫比浊法检测血清BUN和SCr水平,HE染色后在光学显微镜下观察肾组织病理改变,采用蛋白质印迹法和免疫组织化学法检测LC3、p62的蛋白质表达水平,在电子显微镜下观察受损线粒体清除和溶酶体底物聚集的情况,采用TUNEL检测肾小管上皮细胞凋亡的情况。结果:WT+顺铂组相较于WT组,FXR-KO+顺铂组相较于FXR-KO组,小鼠SCr和BUN均明显升高(P<0.01或P<0.001),且FXR-KO+顺铂组小鼠SCr和BUN明显高于WT+顺铂组(均P<0.05)。在光学显微镜下可见WT组和FXR-KO组小鼠肾组织无明显病理改变,WT+顺铂组和FXR-KO+顺铂组小鼠均存在肾小管上皮细胞空泡样或颗粒样变性,细胞扁平,管腔扩张,刷状缘脱落,甚至出现基底膜裸露,管型形成。WT+顺铂组相较于WT组,FXR-KO+顺铂组相较于FXR-KO组,小鼠肾小管损伤评分均明显升高(均P<0.001),且FXR-KO+顺铂组评分明显高于WT+顺铂组(P<0.05)。在透射电镜下可见WT+顺铂组和FXR-KO+顺铂组小鼠小管上皮细胞线粒体肿胀变圆、空泡化、嵴断裂或消失,溶酶体呈不均匀、高密度团块状,且以FXR-KO+顺铂组改变更为明显。蛋白质印迹法结果显示:WT+顺铂组相较于WT组,FXR-KO+顺铂组相较于FXR-KO组,小鼠肾皮质LC3-II/LC3-I比值下降,p62表达增加(P<0.05或P<0.01);且相较于FXR-KO组,FXR-KO+顺铂组小鼠LC3-II/LC3-I比值下降,p62表达增加更为明显(均P<0.05)。免疫组织化学结果显示:WT+顺铂组和FXR-KO+顺铂组小鼠肾皮质总LC3和p62表达均明显增加,且以FXR-KO+顺铂组增加更为显著。TUNEL结果显示:WT组和FXR-KO组小鼠染色阴性或仅见数个小管上皮细胞凋亡,WT+顺铂组和FXR-KO+顺铂组凋亡细胞数量均增多;WT+顺铂组相较于WT组,FXR-KO+顺铂组相较于FXR-KO组,肾小管上皮细胞凋亡率明显增加(均P<0.001),且FXR-KO+顺铂组凋亡率明显高于WT+顺铂组(P<0.05)。结论:FXR基因敲除加重顺铂所致急性肾损伤,其机制可能与抑制自噬和促进凋亡有关。展开更多
