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慢性乙型肝炎患者树突状细胞诱导的HBV特异性细胞毒性T淋巴细胞PD-1的表达 被引量:8
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作者 彭建平 孙克伟 +1 位作者 伍玉南 张茜茜 《临床肝胆病杂志》 CAS 2012年第12期926-929,共4页
目的探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者树突状细胞(DC)诱导的HBV特异性细胞毒性T细胞(CTL)表面程序性死亡受体1(PD-1)的表达情况及其与HBV DNA的关系。方法采集30例CHB患者和10例健康人的抗凝外周静脉血,分离外周血单个核细胞(PBMC),在白细胞介... 目的探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者树突状细胞(DC)诱导的HBV特异性细胞毒性T细胞(CTL)表面程序性死亡受体1(PD-1)的表达情况及其与HBV DNA的关系。方法采集30例CHB患者和10例健康人的抗凝外周静脉血,分离外周血单个核细胞(PBMC),在白细胞介素(IL)-4和粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的作用下培养使DC增殖、成熟,培养第4 d加入纯化的HBsAg进行冲击。采同一患者外周血,分离出自体T淋巴细胞,用含重组人白细胞介素(rhIL)-2的培养基维持T细胞的生长,培养第5 d与HBsAg冲击的DC共培养。以流式细胞技术检测CTL的PD-1表达,并分析PD-1表达水平与HBV DNA的关系。结果与健康对照组比较,CHB组DC诱导的HBV特异CTL的PD-1的表达明显升高(P=0.000)。且HBeAg阳性组PD-1的表达率较HBeAg阴性组明显升高(P=0.000)。CHB患者DC诱导的HBV特异性CTL的PD-1表达率与血清HBV DNA拷贝数的对数值呈正相关(r=0.53,P=0.008)。结论 CHB患者DC诱导的HBV特异性CTL高表达PD-1分子,为HBV慢性感染过程中CTL功能低下,病毒难以清除提供了另一条重要线索。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 肝炎 乙型 慢性 树突细胞 T淋巴细胞 细胞毒性
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温法治疗乙型肝炎相关性肝衰竭理论探要 被引量:6
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作者 王雅 孙克伟 +2 位作者 张涛 陈斌 黄裕红 《中华中医药学刊》 CAS 2013年第6期1270-1272,共3页
中医治疗乙型肝炎相关性肝衰竭多从黄疸论治,"温法"属八法之一,在黄疸病论治中占有重要地位,通过黄疸历代文献的整理,结合黄疸病论治理论依据,以及现代医学研究、临床研究探讨温法在乙型肝炎相关性肝衰竭中的重要性,使其能更... 中医治疗乙型肝炎相关性肝衰竭多从黄疸论治,"温法"属八法之一,在黄疸病论治中占有重要地位,通过黄疸历代文献的整理,结合黄疸病论治理论依据,以及现代医学研究、临床研究探讨温法在乙型肝炎相关性肝衰竭中的重要性,使其能更好的服务于临床。 展开更多
关键词 黄疸 温法 辨证论治
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HBV对健康产妇脐带血浆细胞样树突状细胞Toll样受体9、干扰素调节因子7、干扰素α表达的影响 被引量:3
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作者 彭建平 孙克伟 +1 位作者 银思涵 伍玉南 《临床肝胆病杂志》 CAS 2016年第5期894-898,共5页
目的观察HBV对体外培养的健康产妇脐带血浆细胞样树突状细胞(pDC)Toll样受体(TLR)9、干扰素调节因子(IRF)7、干扰素(IFN)α表达的影响。方法体外培养Hep G 2.2.15细胞,收集各孔Hep G 2.2.15培养上清,超离心HBV病毒颗粒,PCR荧光探针法检... 目的观察HBV对体外培养的健康产妇脐带血浆细胞样树突状细胞(pDC)Toll样受体(TLR)9、干扰素调节因子(IRF)7、干扰素(IFN)α表达的影响。方法体外培养Hep G 2.2.15细胞,收集各孔Hep G 2.2.15培养上清,超离心HBV病毒颗粒,PCR荧光探针法检测HBV DNA浓度。将培养第7天的pDC与不同载量的HBV(1×105拷贝/ml、1×106拷贝/ml、1×107拷贝/ml和空白对照)共培养24 h。随后每组均加入终浓度为2μg/ml的Cp G ODN 2216继续培养24 h。Real Time-PCR检测pDC中TLR9、IRF7mRNA的表达,Western Blot检测TLR9、IRF7蛋白表达,ELISA法测IFNα水平。计量资料多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用SNK-q检验;对HBV DNA拷贝数取常用对数,相关指标与HBV DNA的常用对数值用Pearson直线相关分析法。结果HBV 1×106拷贝/ml组和1×107拷贝/ml组TLR9 mRNA、IRF7 mRNA、pDC TLR9和IRF7蛋白、IFNα的表达水平明显低于空白对照组及HBV 1×105拷贝/ml组,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。HBV对pDC TLR9 mRNA、IRF7 mRNA的表达和对pDC TLR9、IRF7蛋白的表达以及对pDC培养上清液IFNα的表达均呈浓度依赖性,HBV DNA载量越高,对TLR9 mRNA、IRF7 mRNA、TLR9和IRF7蛋白、IFNα表达的抑制效果越强(r值分别为-0.729、-0.761、-0.657、-0.703、-0.803,P值均<0.05)。结论 HBV体外干预后,正常pDC TLR9、IRF7 mRNA及蛋白表达下降,从而导致其下游IFNα的分泌减少。HBV能抑制正常pDC功能,导致HBV持续感染。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 树突细胞 TOLL样受体9 干扰素调节因子7 干扰素Α
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人脐带血浆细胞样树突状细胞亚群的体外诱导及鉴定 被引量:4
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作者 彭建平 孙克伟 +1 位作者 银丝丝 伍玉南 《临床肝胆病杂志》 CAS 2015年第11期1862-1866,共5页
目的建立浆细胞样树突状细胞(pDC)的体外培养方法。方法采集2014年6月-2015年2月于湖南中医药大学第一附属医院就诊的健康产妇脐带血40 ml,分离脐带血单个核细胞(CBMC),用含重组人FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt3-L)100ng/ml、白细胞... 目的建立浆细胞样树突状细胞(pDC)的体外培养方法。方法采集2014年6月-2015年2月于湖南中医药大学第一附属医院就诊的健康产妇脐带血40 ml,分离脐带血单个核细胞(CBMC),用含重组人FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt3-L)100ng/ml、白细胞介素(IL)3 10 ng/ml的RPMI1640完全培养基连续培养7 d,每隔1天半换液。第8天加入2μg/ml的CpG ODN,24 h后收集细胞行流式检测,同时检测pDC培养上清干扰素(IFN)α水平。在培养细胞的第1、3、5、7、8天,观察培养孔中的pDC形态特征变化。结果 CBMC培养2 h后可见圆形扁平细胞布满视野,24 h后细胞开始贴壁,细胞质伸展开,体积有所增大,圆形,透亮,并可见散在的小集落形成;培养第3~4天,细胞体积较前继续增大,多数为圆形,部分细胞表面可见小的突起,并可见少量梭形、蝌蚪状、星形或其他不规则形的细胞,培养液中集落较前明显增多、增大;培养第5~8天,集落数量及集落内细胞数逐渐减少,而培养液中圆形或具有小突起的悬浮细胞逐渐增多。流式细胞仪检测发现CD123、BDCA-2、BDCA-4均表达阳性的细胞,该细胞为pDC。在培养过程中,pDC比例不断增加,其在培养开始时仅占CBMC总数的1.08%,第4天升至5.32%,第8天时达到高峰,为19.8%。培养第8天时,pDC培养上清IFNα水平达(11 302.61±1745.31)pg/ml。结论以人CBMC为培养初始细胞,利用Flt3-L与IL-3联合,可成功体外诱导出pDC。 展开更多
关键词 胎血 树突细胞 细胞培养技术
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早期病毒学应答对乙型肝炎病毒感染相关肝衰竭患者预后及转归的影响 被引量:4
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作者 彭建平 孙克伟 伍玉南 《临床肝胆病杂志》 CAS 2012年第10期752-755,共4页
目的研究在HBV感染相关肝衰竭抗病毒治疗过程中,早期快速病毒学应答对治疗转归的影响。方法选择本院2007年6月至2010年12月住院治疗的HBV感染相关肝衰竭患者152例,在内科综合治疗基础上分别予拉米夫定(LAM)或恩替卡韦(ETV)抗病毒治疗。... 目的研究在HBV感染相关肝衰竭抗病毒治疗过程中,早期快速病毒学应答对治疗转归的影响。方法选择本院2007年6月至2010年12月住院治疗的HBV感染相关肝衰竭患者152例,在内科综合治疗基础上分别予拉米夫定(LAM)或恩替卡韦(ETV)抗病毒治疗。根据抗病毒治疗第4周时患者HBV DNA是否转阴,将患者分为HBV DNA阴性组和HBV DNA阳性组,比较两组治疗基线情况、治疗第4周时TBil、凝血酶原活动度(PTA)、Alb、MELD评分及治疗终点时两组临床转归,对影响治疗转归的所有因素进行多元Logistic逐步回归分析。结果在治疗第4周时,HBV DNA阴性组TBil水平较HBV DNA阳性组明显降低,两组差异有统计学意义(P=0.000);HBV DNA阴性组PTA较HBV DNA阳性组明显升高,差异有统计学意义(P=0.0001);两组Alb、MELD评分差异无统计学意义。治疗终点时HBV DNA阴性组好转率(74.2%)较HBV DNA阳性组(30.5%)明显升高,差异有统计学意义(χ2=28.15,P=0.0067)。对可能影响治疗转归的因素进行多元Logistic回归分析,筛选出有统计学意义的独立危险因素为病情分期和治疗第4周时HBV DNA转阴情况。结论核苷类似物对病毒的快速抑制作用可提高HBV相关肝衰竭治疗的疗效,改善预后,治疗第4周早期病毒学应答患者预后相对较好。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 肝功能衰竭
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