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miR-27a靶向调控SFRP1对结直肠癌生物学行为的影响
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作者 司马学琴 苏延停 曾智 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第3期418-423,共6页
目的探讨miR-27a在结直肠癌中的表达,并分析其靶向调控分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)对人结直肠癌细胞HCT116生物学行为的影响。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结直肠癌组织及癌旁正常组织中miR-27a和SFRP1 mRNA的表达情况;Western blo... 目的探讨miR-27a在结直肠癌中的表达,并分析其靶向调控分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)对人结直肠癌细胞HCT116生物学行为的影响。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结直肠癌组织及癌旁正常组织中miR-27a和SFRP1 mRNA的表达情况;Western blot检测结直肠癌组织及癌旁正常组织中SFRP1蛋白表达水平;运用TargetScan预测软件及双荧光素酶报告基因实验检测miR-27a对SFRP1的靶向调控作用;将miR27a模拟物(miR-27a mimic)、miR-27a抑制物(miR-27a inhibitor)及阴性对照(NC)转染至HCT116细胞中;采用qRT-PCR测定各组细胞中miR-27a和SFRP1 mRNA的表达水平;运用四唑盐(MTT)比色法检测各组细胞增殖情况;Transwell实验评估各组细胞侵袭和迁移能力;Western blot检测各组细胞中SFRP1、Wnt/β-catenin信号通路中的关键因子Wnt4和β-catenin的蛋白表达水平。结果与癌旁正常组织相比,miR-27a在结直肠癌组织中高表达,而SFRP1在结直肠癌组织中低表达(P<0.05);TargetScan预测软件和双荧光素酶报告基因实验表明miR-27a靶向调控SFRP1;与NC组相比,miR-27a mimic组miR-27a表达水平升高,细胞增殖、侵袭和迁移能力增强,SFRP1蛋白表达降低,Wnt4和β-catenin蛋白表达增加(P<0.05);与miR-27a mimic组相比,miR-27a inhibitor组细胞内miR-27a表达下降,细胞增殖、侵袭和迁移能力降低,SFRP1蛋白表达增加,Wnt4和β-catenin蛋白表达降低(P<0.05)。结论miR-27a能够靶向调控SFRP1,通过上调SFRP1,阻断下游的Wnt/β-catenin信号通路,抑制结直肠癌细胞的增殖、侵袭和迁移等生物学过程,从而发挥抑癌作用。为临床治疗提供了新方向。 展开更多
关键词 miR-27a SFRP1 结直肠癌 Wnt4 Β-CATENIN
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阿司匹林诱发GSDME依赖性细胞焦亡对结肠癌细胞增殖的影响
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作者 司马学琴 苏延停 李成武 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第12期2019-2023,共5页
目的探讨阿司匹林诱发焦孔素E(GSDME)依赖性细胞焦亡对结肠癌细胞增殖的影响及其相关机制。方法体外培养人结肠癌细胞Caco-2;运用MTT法检测不同浓度(1.0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0 mmol/L)阿司匹林干预对结肠癌细胞增殖活性的影响;... 目的探讨阿司匹林诱发焦孔素E(GSDME)依赖性细胞焦亡对结肠癌细胞增殖的影响及其相关机制。方法体外培养人结肠癌细胞Caco-2;运用MTT法检测不同浓度(1.0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0 mmol/L)阿司匹林干预对结肠癌细胞增殖活性的影响;显微镜下观察阿司匹林干预对结肠癌细胞形态学的影响;乳酸脱氢酶(LDH)释放实验观察阿司匹林干预对结肠癌细胞膜完整性的影响;Western blot实验检测阿司匹林对结肠癌细胞中焦亡相关通路基因NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、焦孔素E-N(GSDME-N)的蛋白表达;酶联免疫吸附实验(ELISA)测定Caco-2细胞上清中白介素-1β(IL-1β)和白介素-18(IL-18)的水平;沉默GSDME后在显微镜下观察细胞形态学变化情况;LDH释放实验观察细胞细胞膜完整性情况;ELISA法测定GSDME沉默后细胞上清中IL-1β和IL-18的水平。结果MTT结果显示,阿司匹林能够降低结肠癌细胞Caco-2的增殖活性,且呈浓度依赖性(P<0.01);形态学观察结果与LDH实验显示阿司匹林能够促进细胞焦亡的发生(P<0.01);Western blot结果显示阿司匹林能够升高焦亡相关通路基因NLRP3、Caspase-1、GSDME-N的蛋白表达(P<0.05);ELISA检测显示阿司匹林能够提高细胞上清中IL-1β和IL-18的含量(P<0.01);结肠癌细胞Caco-2细胞在沉默GSDME后,细胞焦亡受到抑制(P<0.05),IL-1β和IL-18表达下降(P<0.01)。结论阿司匹林能够诱发GSDME依赖性细胞焦亡,抑制结肠癌细胞Caco-2的增殖,从而发挥抑癌作用。 展开更多
关键词 阿司匹林 焦孔素E 结肠癌 CACO-2细胞 细胞焦亡
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