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mPD-1/mPD-L1体外分子结合模型的建立
被引量：
2
1
作者
覃晓琳
刘朝奇
+1 位作者
杨凡
郑兰英
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第4期385-389,共5页
目的建立小鼠PD-1/PD-L1(mPD-1/mPD-L1)体外分子结合模型,为研究PD-1/PD-L1生物学活性及建立高通量药物筛选分子模型奠定基础。方法重组质粒在原核细胞表达mPD-1和mPD-L1蛋白,利用亲和层析及切胶方法纯化相应蛋白;应用ELISA和GSTPull-d...
目的建立小鼠PD-1/PD-L1(mPD-1/mPD-L1)体外分子结合模型,为研究PD-1/PD-L1生物学活性及建立高通量药物筛选分子模型奠定基础。方法重组质粒在原核细胞表达mPD-1和mPD-L1蛋白,利用亲和层析及切胶方法纯化相应蛋白;应用ELISA和GSTPull-down方法验证mPD-1与其配体mPD-L1蛋白的结合活性;以Alamar blue法检测纯化mPD-1和mPD-L1蛋白混合物对混合淋巴细胞增殖的影响。结果SDS-PAGE和Western印迹结果显示原核表达的重组蛋白与预期基本一致,经过亲和层析和切胶、复性等方式获得了纯化的mPD-1和mPD-L1蛋白。ELISA和GSTpull-down结果表明,mPD-1和mPD-L1蛋白具有体外结合的活性。淋巴细胞增殖试验进一步说明两蛋白的结合可一定程度上降低单独蛋白对淋巴细胞增殖的影响(P<0.05)。结论利用原核细胞高效表达并纯化的mPD-1、mPD-L1蛋白成功建立体外mPD-1/mPD-L1分子结合模型,为高通量药物初筛奠定了基础。
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关键词
mPD-1
mPD-L1
分子模型
淋巴细胞增殖
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职称材料
黄连碱经活性氧中介物-线粒体途径诱导肺癌NCI-H1650细胞凋亡
被引量：
3
2
作者
杨凡
李欣
+4 位作者
章婷婷
李建荣
祝艺华
胡亚辉
刘华
《实用医学杂志》
CAS
北大核心
2017年第24期4033-4037,共5页
目的研究黄连碱对人非小细胞肺癌NCI-H1650细胞增殖的影响和其用于人非小细胞肺癌临床治疗的潜在价值。方法 MTT法分析黄连碱处理对NCI-H1650细胞增殖的影响,Western blot检测细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2和细胞色素C的蛋白表达水平。流...
目的研究黄连碱对人非小细胞肺癌NCI-H1650细胞增殖的影响和其用于人非小细胞肺癌临床治疗的潜在价值。方法 MTT法分析黄连碱处理对NCI-H1650细胞增殖的影响,Western blot检测细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2和细胞色素C的蛋白表达水平。流式细胞术分析Annexin V/PI标记的细胞凋亡。荧光酶标仪分析细胞内活性氧中介物水平。结果黄连碱能够以时间和剂量依赖性的方式显著抑制NCIH1650细胞增殖。黄连碱处理24 h诱导NCI-H1650细胞内活性氧中介物水平增加和细胞凋亡,同时细胞内Bax基因表达上调、Bcl-2基因表达下调,并发生细胞色素C从线粒体向细胞浆的转移。流式细胞术检测发现黄连碱处理导致NCI-H1650细胞凋亡发生。使用活性氧抑制物N-乙酰半胱氨酸则可显著抵抗黄连碱对NCI-H1650细胞的增殖抑制和细胞凋亡。结论黄连碱通过诱导活性氧中介物水平增加激发NCI-H1650细胞发生线粒体途径介导的细胞凋亡。黄连碱具有用于抗人非小细胞肺癌临床治疗的潜在价值。
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关键词
黄连碱
细胞凋亡
活性氧中介物
非小细胞肺癌
NCI-H1650细胞
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职称材料
题名
mPD-1/mPD-L1体外分子结合模型的建立
被引量：
2
1
作者
覃晓琳
刘朝奇
杨凡
郑兰英
机构
三峡大学分子生物学研究所
湖北省宜昌市第二人民医院放化疗科
湖北省
长阳土家族自治县
人民医院
护理部
出处
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第4期385-389,共5页
基金
湖北省自然科学基金(2008CDB118)
三峡大学研究生科研创新基金(2009-36)~~
文摘
目的建立小鼠PD-1/PD-L1(mPD-1/mPD-L1)体外分子结合模型,为研究PD-1/PD-L1生物学活性及建立高通量药物筛选分子模型奠定基础。方法重组质粒在原核细胞表达mPD-1和mPD-L1蛋白,利用亲和层析及切胶方法纯化相应蛋白;应用ELISA和GSTPull-down方法验证mPD-1与其配体mPD-L1蛋白的结合活性;以Alamar blue法检测纯化mPD-1和mPD-L1蛋白混合物对混合淋巴细胞增殖的影响。结果SDS-PAGE和Western印迹结果显示原核表达的重组蛋白与预期基本一致,经过亲和层析和切胶、复性等方式获得了纯化的mPD-1和mPD-L1蛋白。ELISA和GSTpull-down结果表明,mPD-1和mPD-L1蛋白具有体外结合的活性。淋巴细胞增殖试验进一步说明两蛋白的结合可一定程度上降低单独蛋白对淋巴细胞增殖的影响(P<0.05)。结论利用原核细胞高效表达并纯化的mPD-1、mPD-L1蛋白成功建立体外mPD-1/mPD-L1分子结合模型,为高通量药物初筛奠定了基础。
关键词
mPD-1
mPD-L1
分子模型
淋巴细胞增殖
Keywords
mPD-1
mPD-L1
molecular models
lymphocyte proliferation
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
黄连碱经活性氧中介物-线粒体途径诱导肺癌NCI-H1650细胞凋亡
被引量：
3
2
作者
杨凡
李欣
章婷婷
李建荣
祝艺华
胡亚辉
刘华
机构
湖北省
宜昌市
第二
人民医院
放
化疗
一
科
湖北省
宜昌市
第二
人民医院
检验
科
出处
《实用医学杂志》
CAS
北大核心
2017年第24期4033-4037,共5页
基金
宜昌市科技局公益类科技项目基金资助(编号:A16-301-29)
文摘
目的研究黄连碱对人非小细胞肺癌NCI-H1650细胞增殖的影响和其用于人非小细胞肺癌临床治疗的潜在价值。方法 MTT法分析黄连碱处理对NCI-H1650细胞增殖的影响,Western blot检测细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2和细胞色素C的蛋白表达水平。流式细胞术分析Annexin V/PI标记的细胞凋亡。荧光酶标仪分析细胞内活性氧中介物水平。结果黄连碱能够以时间和剂量依赖性的方式显著抑制NCIH1650细胞增殖。黄连碱处理24 h诱导NCI-H1650细胞内活性氧中介物水平增加和细胞凋亡,同时细胞内Bax基因表达上调、Bcl-2基因表达下调,并发生细胞色素C从线粒体向细胞浆的转移。流式细胞术检测发现黄连碱处理导致NCI-H1650细胞凋亡发生。使用活性氧抑制物N-乙酰半胱氨酸则可显著抵抗黄连碱对NCI-H1650细胞的增殖抑制和细胞凋亡。结论黄连碱通过诱导活性氧中介物水平增加激发NCI-H1650细胞发生线粒体途径介导的细胞凋亡。黄连碱具有用于抗人非小细胞肺癌临床治疗的潜在价值。
关键词
黄连碱
细胞凋亡
活性氧中介物
非小细胞肺癌
NCI-H1650细胞
Keywords
coptisine
apoptosis
ROS
non-small cell lung cancer
NCI-H1650 cells
分类号
R734.2 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
mPD-1/mPD-L1体外分子结合模型的建立
覃晓琳
刘朝奇
杨凡
郑兰英
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
黄连碱经活性氧中介物-线粒体途径诱导肺癌NCI-H1650细胞凋亡
杨凡
李欣
章婷婷
李建荣
祝艺华
胡亚辉
刘华
《实用医学杂志》
CAS
北大核心
2017
3
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