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Cdc2/cdk1和survivin特异性siRNA真核表达载体的设计、构建和鉴定 被引量:1
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作者 朱俊 袁玉林 +3 位作者 彭涛 陈树 黄铄 李双 《海南医学院学报》 CAS 2015年第3期291-295,共5页
目的:构建表达靶向cdc2/cdk mRNA和survivin mRNA的siRNA真核表达质粒。方法:从GenBank中搜索Cdc2/cdk1和survivin基因组标准序列,根椐siRNA设计原理构建siRNA真核表达质粒phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2、phU6-surviv... 目的:构建表达靶向cdc2/cdk mRNA和survivin mRNA的siRNA真核表达质粒。方法:从GenBank中搜索Cdc2/cdk1和survivin基因组标准序列,根椐siRNA设计原理构建siRNA真核表达质粒phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2、phU6-survivin-shRNA1和phU6-survivinshRNA。phU6-survivin-shRNA1、phU6-survivin-shRNA2、pU6-HK-shRNA质粒均含有增强绿色荧光基因作为报告基因和酶切位点,而phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2均含有红色荧光基因作为报告基因和酶切位点。质粒酶切、电泳、测序鉴定;用脂质体转染鼻咽癌CNE2细胞,荧光显微镜下观察、摄片、计数阳性细胞,计算转染效率,激光共聚焦显微镜检测质粒载体绿色和红色荧光蛋白的表达,免疫印迹法检测真核表达质粒对相应蛋白的抑制率。结果:荧光显微镜下计算转染效率显示在转染鼻咽癌细胞CNE2 48h转染率高达45.00%-57.45%;质粒phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2、phU6-survivin-shRNA1、phU6-survivin-shRNA2和pU6-HK-shRNA酶切后均可见400bp条带,与预期插入的目的基因大小一致,基因测序证实碱基序列与模板序列相符;在共聚焦显微镜下观察均见大量的细胞表达相应荧光;免疫印迹检测phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2、phU6-survivin-shRNA1和phU6-survivin-shRNA2对鼻咽癌CNE2细胞相应蛋白抑制率分别是33.00±1.41、38.31±1.01(survivin)、36.33±1.21和43.26±1.02(cdk1)。结论:本实验构建了靶向Cdc2/cdk1mRNA和survivin mRNA的真核表达质粒。重组质粒能有效转染人鼻咽癌细胞,phU6-cdc2/cdk1-shRNA2和phU6-survivin-shRNA2与phU6-cdc2/cdk1-shRNA1和phU6-survivin-shRNA1相比,转染CNE2 48h后其对相应蛋白的干扰率相对较高。 展开更多
关键词 鼻咽癌细胞株CNE2 RNA干扰 cdc2/cdk1 SURVIVIN
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脂肪来源干细胞对cyclin-D1、c-myc、p53、ATM和γ-H2AX蛋白在辐射诱发胸腺损伤修复中的影响
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作者 朱俊 袁玉林 +1 位作者 熊志 孔志华 《海南医学院学报》 CAS 2015年第8期1018-1022,共5页
目的:明确脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)在辐射诱发的C57小鼠胸腺瘤的形成过程中是否通过增强DNA损伤修复功能进而影响辐射诱导胸腺瘤的形成。方法:清洁级C57BL/6小鼠32只,随机分为4组:对照组8只,仅以假照射;照射组... 目的:明确脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)在辐射诱发的C57小鼠胸腺瘤的形成过程中是否通过增强DNA损伤修复功能进而影响辐射诱导胸腺瘤的形成。方法:清洁级C57BL/6小鼠32只,随机分为4组:对照组8只,仅以假照射;照射组8只,采用深部X射线治疗机照射;照射+ADSCs组8只,收集转染EGFP表达质粒48h后的ADSCs,将ADSCs的浓度调整为2.0×106个/mL,取0.5mL经尾静脉注射入末次照射后第1天的胸腺瘤模型小鼠;假照射+ADSCs组8只,ADSCs的注射方法同照射+ADSCs组。末次照射第7天后分别处死4组小鼠,各组小鼠胸腺组织中的细胞周期蛋白D1(cyclin-D1)、p53、c-myc、毛细血管共济失调突变期(ATM)和γ-H2AX蛋白水平采用Western blot进行检测。结果:照射组小鼠胸腺组织中ATM、γ-H2AX、cyclin-D1和c-myc水平高于照射+ADSCs组小鼠胸腺组织,而p53水平低于照射+ADSCs组小鼠胸腺组织,且差异有统计学意义(P<0.05)。通过流式细胞术检测,照射组小鼠胸腺G1期细胞的百分比相比于对照组明显降低(P<0.05),而照射+ADSCs组小鼠胸腺G1细胞的百分比较照射组增多。结论:ADSCs可能通过减轻DNA损伤程度,减少p53和c-myc蛋白的表达,使细胞G1期增加,并阻滞在G1期,修复胸腺细胞的DNA,抑制肿瘤的形成。 展开更多
关键词 脂肪来源干细胞 电离辐射 胸腺瘤
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ADSCs对辐射诱发C57小鼠胸腺瘤免疫功能的影响及其机制 被引量:1
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作者 孔志华 李应续 +2 位作者 熊志 朱俊 袁玉林 《海南医学院学报》 CAS 2015年第6期731-734,共4页
目的:观察脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)对辐射诱发小鼠胸腺瘤免疫功能的影响及其可能的机制,方法:清洁级C57BL/6小鼠32只,随机分为4组:对照组、照射组、照射+ADSCs组、假照射+ADSCs组,各8只,末次照射后第7天后分... 目的:观察脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)对辐射诱发小鼠胸腺瘤免疫功能的影响及其可能的机制,方法:清洁级C57BL/6小鼠32只,随机分为4组:对照组、照射组、照射+ADSCs组、假照射+ADSCs组,各8只,末次照射后第7天后分别处死4组小鼠,计算小鼠胸腺指数。刀豆素A(ConA)诱导的胸腺淋巴细胞转化率采用MTY法测定,运用流式细胞仪检测胸腺淋巴细胞的细胞周期以及T淋巴细胞亚群的变化。结果:照射+ADSCs组相对于照射组小鼠的胸腺淋巴细胞转化率和胸腺指数显著增高(P<0.05),并且CD4+T淋巴细胞的含量显著增加(P<0.05),CD8+T淋巴细胞明显下降(P<0.05),CD4+/CD8+T淋巴细胞比值显著升高(P<0.05)。结论:ADSCs可能通过调节小鼠胸腺内细胞水平的变化,保护小鼠胸腺细胞的免疫功能。 展开更多
关键词 脂肪来源干细胞 辐射 T淋巴细胞亚群
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阿昔洛韦治疗小儿病毒性脑膜炎临床疗效分析 被引量:12
4
作者 柯秋林 《海南医学院学报》 CAS 2014年第2期234-236,240,共4页
目的:分析阿昔洛韦在小儿病毒性脑膜炎中的临床疗效。方法:选取2010年8月2013年6月于本院进行治疗的76例病毒性脑膜炎患儿为研究对象,将76例患儿随机分为对照组(利巴韦林组,38例)和观察组(阿昔洛韦组,38例),比较两组患儿治疗... 目的:分析阿昔洛韦在小儿病毒性脑膜炎中的临床疗效。方法:选取2010年8月2013年6月于本院进行治疗的76例病毒性脑膜炎患儿为研究对象,将76例患儿随机分为对照组(利巴韦林组,38例)和观察组(阿昔洛韦组,38例),比较两组患儿治疗前和治疗后第3天、第7天的细胞免疫指标及血清、脑脊液神经元特异性烯醇化酶(NSE)、降钙素原(PCT)、白细胞介素一6(IL一6)及基质金属蛋白酶一9(MMP一9)的水平。结果:观察组治疗后第3天、第7天的细胞免疫指标均优于观察组治疗前及对照组治疗后,而治疗后第3天、第7天的血清、脑脊液NSE、PCT、IL一6及MMP一9水平均低于观察组治疗前及对照组治疗后,差异均有统计学意义(P均〈0.05)。结论:阿昔洛韦在小儿病毒性脑膜炎中的疗效相对较佳,对于改善神经功能及控制炎症均有积极的作用,且患儿的免疫状态也呈现出持续改善的状态。 展开更多
关键词 阿昔洛韦 小儿病毒性脑膜炎 免疫状态 神经功能 炎性反应
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ADSCs抑制辐射诱生胸腺瘤的作用分析
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作者 熊志 孔志华 +3 位作者 朱俊 袁玉林 王国祥 夏干清 《海南医学院学报》 CAS 2015年第8期1009-1013,共5页
目的:探讨脂肪来源干细胞(ADSCs)对辐射诱导形成胸腺瘤的影响。方法:清洁级C57BL/6小鼠160只随机分为4组:假照射组、照射组、照射+ADSCs组、假照射+ADSCs组,各40只,末次照射后第1、3、7、14天后分别处死4组小鼠,荧光显微镜下观察ADSCs... 目的:探讨脂肪来源干细胞(ADSCs)对辐射诱导形成胸腺瘤的影响。方法:清洁级C57BL/6小鼠160只随机分为4组:假照射组、照射组、照射+ADSCs组、假照射+ADSCs组,各40只,末次照射后第1、3、7、14天后分别处死4组小鼠,荧光显微镜下观察ADSCs在胸腺瘤组织中的定位;末次照射第1、7、14、21、28天及6个月后分别处死4组小鼠,石蜡包埋HE染色观察胸腺组织的病理变化,并行免疫组化分析。结果:照射组小鼠胸腺瘤的发生率(75%,12/16)明显高于ADSCs注射组(20%,3/15)(P<0.05)。在X线照射后第7天和6个月后,照射组和照射+ADSCs组胸腺组织中CD31染色阳性的血管管状结构及增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞数较假照射组和假照射+ADSCs组明显增多,并且照射+ADSCs组小鼠胸腺组织的PCNA阳性细胞数相对于照射组小鼠胸腺组织较低(P<0.05)。结论:本实验成功建立辐射诱发的小鼠胸腺瘤模型。ADSCs具有保护胸腺辐射损伤,抑制辐射诱发胸腺瘤的作用。 展开更多
关键词 脂肪来源干细胞 辐射 胸腺瘤
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MicroRNA-101抑制细胞增殖促进细胞凋亡及增强乳腺癌MDA-MB-231细胞对紫杉醇的药物敏感性研究 被引量:4
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作者 柯秋林 《海南医学院学报》 CAS 2016年第3期216-220,224,共6页
目的:探究miR-101抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖促进细胞凋亡并且增强紫杉醇对乳腺癌MDA-MB-231细胞化疗敏感性的影响,及其对靶基因Bcl2蛋白表达水平产生的影响。方法:人工合成miR-101并利用脂质体3000对MDA-MB-231细胞进行转染,将实验... 目的:探究miR-101抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖促进细胞凋亡并且增强紫杉醇对乳腺癌MDA-MB-231细胞化疗敏感性的影响,及其对靶基因Bcl2蛋白表达水平产生的影响。方法:人工合成miR-101并利用脂质体3000对MDA-MB-231细胞进行转染,将实验分为3组:空白对照组、阴性对照组、miR-101组。分别采用MTT法检测miR-101对MDA-MB-231细胞增殖和对紫杉醇介导的MDA-MB-231细胞对化疗敏感性的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡水平;Real-time PCR和Western bloting检测Bcl2mRNA和蛋白质表达水平的变化。结果:miR-101转染MDA-MB-231细胞后,细胞增殖能力较阴性对照组相比明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01);利用紫杉醇处理细胞后,用miR-101处理组细胞的IC50与空白对照组相比下降2.45倍,差异有统计学意义(P<0.05),空白对照组与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);流式细胞仪检测结果显示,miR-101组的MDAMB-231细胞无论是早期还是晚期凋亡率均明显高于阴性对照组细胞(P<0.05),并且早期凋亡率更加明显(P<0.01);转染miR-101后,MDA-MB-231细胞的Bcl2mRNA和蛋白质水平显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-101可能通过靶向下调Bcl2抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖,进而增强乳腺癌细胞对紫杉醇的化疗的敏感性,促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 乳腺癌 紫杉醇 miR-101 微RNAs BCL2 细胞增殖 细胞凋亡 药物敏感性
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