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题名奶牛β-干扰素在大肠杆菌中高效表达和生物活性分析
被引量：2
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作者
刘颖
刘华兰
杨利国
陈焕春
郭爱珍
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机构
湖北省华中农业大学农业微生物学国家重点实验室
湖北省华中农业大学动物医学院预防兽医学省重点实验室
湖北省华中农业大学动物科技学院
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出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2010年第1期123-128,共6页
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基金
国家973项目(2006CB504401)
湖北省自然基金重大项目(2008CDA073)
+1 种基金
艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治科技重大专项(2009ZX10602-14
2008ZX10301)
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文摘
提取经植物血凝素诱导培养的中国健康奶牛外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出奶牛β-干扰素成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上。测序结果表明,扩增片段为奶牛β-干扰素成熟蛋白序列,与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%。将其重组到原核表达载体pET32a(+)上,并在大肠杆菌BL21中实现了高效表达。表达产物以His-Tag融合蛋白的形式存在,表达量约占细菌总蛋白的40%。用镍亲和层析法对蛋白进行纯化,并利用VSV-MDBK/IBRV细胞系统分析其生物活性。重组奶牛β-干扰素抗病毒活性分别约3.16×105U/mL,7.5×104U/mL。结果表明,重组奶牛β-干扰素特异性好,而且抗病毒活性比较稳定。本研究为研制和开发重组奶牛β-干扰素类生物制品研发奠定了基础。
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关键词
奶牛
Β-干扰素
融合蛋白
抗病毒活性
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Keywords
bovine
interferon-beta
fusion protein
antiviral activity
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分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
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