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湖北道地药材贝母ISSR反应体系优化及多态性引物筛选 被引量:2
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作者 蒋小刚 王华 +1 位作者 郭坤元 张美德 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期642-650,共9页
【目的】优化湖北贝母ISSR-PCR体系,并筛选适用于湖北贝母的多态性引物,为后续湖北贝母的分子辅助育种及遗传多样性和亲缘关系分析等提供科学依据。【方法】采用U12(43)均匀设计和单因素试验结合的方法,获得PCR体系各组分(2×Taq Ma... 【目的】优化湖北贝母ISSR-PCR体系,并筛选适用于湖北贝母的多态性引物,为后续湖北贝母的分子辅助育种及遗传多样性和亲缘关系分析等提供科学依据。【方法】采用U12(43)均匀设计和单因素试验结合的方法,获得PCR体系各组分(2×Taq Master Mix,模板DNA,引物)的最佳用量,在此基础上通过梯度退火温度实验探究引物的最佳退火温度。【结果】湖北贝母ISSR-PCR最佳反应体系为:20μL反应体系中,2×Taq Master Mix 10.5μL,模板DNA 0.8μL(40.0 ng),引物2.2μL(5.5μmol),ddH2O 6.5μL,ISSR-PCR扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃变性0.75 min,54.3℃~60.0℃退火0.75 min,72℃延伸1.5 min,40个循环;72℃延伸10 min,4℃保存。利用优化的反应体系筛选了6条多态性较好、扩增稳定的引物(UBC848、UBC850、UBC853、UBC857、UBC859、UBC866),其最佳退火温度分别为59.3、58.2、56.9、54.3、59.3和60.0℃。用优化的ISSR-PCR体系对12份不同产地的湖北贝母资源进行PCR扩增,结果表明,该反应体系稳定可靠,不同产地湖北贝母具有较丰富的遗传多样性。【结论】优化的湖北贝母ISSR-PCR反应体系可用于湖北贝母种质资源鉴定、亲缘关系和遗传多样性分析等研究。 展开更多
关键词 湖北贝母 ISSR 分子标记 体系优化
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湖北贝母活性成分与内生菌次级代谢产物研究 被引量:2
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作者 袁名远 李宇 +4 位作者 谭旭辉 刘玉 方昕悦 冉亚兰 何美军 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期27-34,共8页
为探究湖北贝母不同组织贝母素乙含量、内生菌组成及其次级代谢产物的抑菌活性,采用气相色谱法测定湖北贝母鳞茎、花、叶的贝母素乙含量,分别利用16S rDNA和ITS测序技术鉴定内生细菌和真菌,并通过琼脂扩散法、微量二倍稀释法研究内生菌... 为探究湖北贝母不同组织贝母素乙含量、内生菌组成及其次级代谢产物的抑菌活性,采用气相色谱法测定湖北贝母鳞茎、花、叶的贝母素乙含量,分别利用16S rDNA和ITS测序技术鉴定内生细菌和真菌,并通过琼脂扩散法、微量二倍稀释法研究内生菌次级代谢产物对10株供试菌的抑菌活性。结果表明:湖北贝母叶中贝母素乙含量最高,达(3.99±0.10)mg/g,其含量是鳞茎的1.78倍、花的4.24倍;从湖北贝母中分离鉴定了4株内生菌,分别为Pseudomonas sp.BM-X-6、Arthrinium sp.BM-Z-5、Aspergillus sp.BM-Z-1、Aspergillus sp.BM-Z-3;3株内生真菌次级代谢产物抑菌活性均优于细菌Pseudomonas sp.BM-X-6,其中Arthrinium sp.BM-Z-5的次级代谢产物抑菌谱最广,对肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、鲍曼不动杆菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌有中度抑制活性。 展开更多
关键词 湖北贝母 贝母素乙 内生菌 次级代谢产物 抑菌活性 药用植物 新型抗菌药物
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湖北贝母石油醚段化学成分研究
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作者 李宇 彭湘敏 +4 位作者 张娜 刘丹 冉亚兰 赵仁君 何美军 《农业与技术》 2020年第21期4-6,共3页
探究湖北贝母石油醚段的化学成分。本文将湖北贝母经60%乙醇超声提取获得总浸膏,再采用石油醚萃取获得石油醚段浸膏;利用1D和2D NMR等对湖北贝母石油醚段的成分进行了探索。结果表明,石油醚段经硅胶柱色谱及半制备高效液相分离到2个化合... 探究湖北贝母石油醚段的化学成分。本文将湖北贝母经60%乙醇超声提取获得总浸膏,再采用石油醚萃取获得石油醚段浸膏;利用1D和2D NMR等对湖北贝母石油醚段的成分进行了探索。结果表明,石油醚段经硅胶柱色谱及半制备高效液相分离到2个化合物,利用1D和2D NMR波谱数据分析,鉴定其结构分别为beta-Sitosterol(1)、ethyl ferulate(2)。该研究可为湖北贝母药材的开发利用、临床使用提供理论依据。 展开更多
关键词 湖北贝母 抗菌活性 石油醚段 化合物
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尖吻蝮蛇蛇毒酒的安全性评价研究
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作者 杨静丽 方昕悦 +7 位作者 李治宽 张中华 谭发祥 戴奎 李宇 王晴芳 罗凯 何美军 《湖北农业科学》 2024年第12期158-162,共5页
系统评价尖吻蝮蛇蛇毒酒(Deinagkistrodon acutus snake venom wine,DSVW)的出血、水肿、肌肉、肝肾毒性,为DSVW的安全生产和运用提供参考。取尖吻蝮蛇的新鲜蛇毒,加入高粱酒炮制获得DSVW;运用小鼠模型皮下注射DSVW研究出血、水肿、肌... 系统评价尖吻蝮蛇蛇毒酒(Deinagkistrodon acutus snake venom wine,DSVW)的出血、水肿、肌肉、肝肾毒性,为DSVW的安全生产和运用提供参考。取尖吻蝮蛇的新鲜蛇毒,加入高粱酒炮制获得DSVW;运用小鼠模型皮下注射DSVW研究出血、水肿、肌肉毒性等急性毒性,通过口服21 d研究其对肝、肾组织的慢性毒性。结果表明,DSVW注射(5 mg/mL)的小鼠背部皮肤都没有明显的出血点(≤2.4 cm^(2)),小鼠小腿增重与空白对照组无显著差异,肌酸激酶为(0.32±0.03)U/mL与CK组(0.34±0.02)U/mL无显著差异,DSVW无显著的急性出血、水肿、肌肉毒性;DSVW灌胃[0.024 mg(/g·d)]的小鼠血清尿素、肌酐、谷丙转氨酶、谷草转氨酶分别为(6.04±0.83)μmol/L、(13.00±2.93)mmol/L、(36.67±9.29)U/L、(89.67±7.09)U/L,与CK组无显著差异,且体重、肾肝质量、肝肾/体重、肝肾组织病理切片均无显著差异,DSVW无显著的慢性肝、肾毒性。经炮制获得的DSVW的无出血、水肿、肌肉、肝肾毒性,为尖吻蝮蛇蛇毒酒安全生产和使用提供了理论依据。 展开更多
关键词 尖吻蝮蛇蛇毒酒(Deinagkistrodon acutus snake venom wine DSVW) 出血毒性 水肿毒性 肌肉毒性 肝肾毒性
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3种重楼属药用植物挥发性成分和抑菌活性研究 被引量:2
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作者 何银生 邱姣 +4 位作者 李宇 袁名远 何美军 张美德 杨旭 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2022年第8期80-83,共4页
目的 比较3种5年生重楼属药用植物的挥发性成分和抑菌活性差异,为推动重楼资源在医药方面的开发和合理利用提供参考。方法 采用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术研究七叶一枝花、啟良重楼、黑籽重楼3种重楼属药用植物提取物挥发性成分,采... 目的 比较3种5年生重楼属药用植物的挥发性成分和抑菌活性差异,为推动重楼资源在医药方面的开发和合理利用提供参考。方法 采用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术研究七叶一枝花、啟良重楼、黑籽重楼3种重楼属药用植物提取物挥发性成分,采用滤纸片法研究3种提取物对11种供试菌的抑菌活性。结果 从七叶一枝花、啟良重楼、黑籽重楼中分别鉴定出33、29、22种挥发性成分,占其相对百分含量29.35%、30.13%、20.09%,三者相同挥发性成分14种;酯类化合物为主要挥发性成分,其中己二酸二(2-乙基己)酯含量最高,七叶一枝花、啟良重楼、黑籽重楼中分别为4.28%、4.94%、5.43%。七叶一枝花对苏云金芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、藤黄微球菌、金黄色葡萄球菌等4株供试菌有良好抑制效果,啟良重楼对苏云金芽孢杆菌、多耐铜绿假单胞菌、藤黄微球菌等3株供试菌有良好抑制效果,黑籽重楼对苏云金芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌2株供试菌有良好抑制效果。结论 3种重楼属药用植物提取物挥发性成分的组成和含量存在很大差异;对11株供试菌的抑菌效果依次为七叶一枝花、啟良重楼、黑籽重楼。 展开更多
关键词 啟良重楼 七叶一枝花 黑籽重楼 挥发性成分 抑菌活性
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