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题名苹果酸酶2乙酰化调控脑胶质瘤细胞增殖的机制
被引量：1
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作者
张成
牛朝诗
梅加明
司文霞
魏祥品
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机构
安徽医科大学附属省立医院神经外科
阜阳市第五人民医院神经外科
湖北理工学院医学院湖北省肾脏疾病发生与干预重点实验室
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出处
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2021年第6期920-924,共5页
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基金
国家自然科学基金青年项目(编号:81902860)
安徽省自然科学基金(编号:1708085MH189)。
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文摘
目的研究苹果酸酶2(ME2)的乙酰化修饰在恶性脑胶质瘤细胞系U87MG增殖中的功能及其分子机制。方法基于序列保守性并结合质谱数据库,预测ME2的乙酰化修饰位点,再构建点突变体,转染细胞,通过免疫沉淀(IP)和Western blot确定修饰位点;通过293T细胞纯化ME2野生型和突变体,检测乙酰化修饰对ME2酶活的影响;通过共转染、富集纯化并结合酶活实验,检测去乙酰化酶Sirtuin3(SIRT3)对ME2酶活、细胞内活性氧(ROS)及NADH水平的影响;在U87MG细胞中用shRNA敲低内源ME2后,回转野生型和模拟乙酰化突变型,检测ME2的乙酰化对细胞增殖的影响,并通过裸鼠成瘤在动物水平验证;通过Western blot在恶性脑胶质瘤临床样本中检测癌与癌旁组织中ME2的乙酰化水平差异。结果K156是ME2主要的乙酰化修饰位点,该位点的乙酰化会抑制ME2活性并抑制U87MG细胞增殖。SIRT3去乙酰化ME2,提高ME2活性,促进NADH的生成,降低细胞内ROS水平。结论SIRT3调控的ME2乙酰化修饰通过提高自身酶的活性,上调细胞NADH水平,降低ROS水平,从而促进U87MG细胞增殖。
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关键词
代谢酶
乙酰化
苹果酸酶
脑胶质瘤
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Keywords
metabolic enzyme
acetylation
malic enzyme
glioblastoma
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分类号
R739.4
[医药卫生—肿瘤]
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