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甘蓝型油菜乙酰辅酶A羧化酶3个亚基基因的克隆及其表达被引量：3: 1; 作者武玉永谭秀华马立新《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第10期4002-4006,共5页; [目的]为构建乙酰辅酶A羧化酶的叶绿体表达载体奠定基础：[方法]以从甘蓝型油菜叶片中提取的叶绿体基因组DNA为模板进行PCR扩增，克隆羧基转移酶β亚基基因.以从开花20～29d后油菜幼胚中提取的总RNA为模板进行RT-PCR扩增，克隆生物素羧... 展开更多; 关键词甘蓝型油莱乙酰辅酶A羧化酶基因克隆基因表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

甘蓝型油菜叶绿体多顺反子单交换表达载体构建被引量：2: 2; 作者武玉永姚庆收马立新《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第11期4431-4434,共4页; [目的]为研究质体定位的乙酰辅酶A羧化酶转化叶绿体奠定基础。[方法]根据GeneBank上的甘蓝型油菜的叶绿体DNA序列设计1对引物,通过PCR扩增获得与甘蓝型油菜叶绿体基因组可发生同源重组的DNA片段,构建甘蓝型油菜叶绿体多顺反子单交换表... 展开更多; 关键词甘蓝型油菜叶绿体DNA 多顺反子单交换表达载体; 在线阅读下载PDF 职称材料

油菜叶绿体乙酰辅酶A羧化酶单交换表达载体的构建: 3; 作者武玉永谭秀华马立新《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期609-617,共9页; 根据已知序列设计引物,通过PCR扩增获得质体定位的乙酰辅酶A羧化酶的4个亚基的基因序列。先将该酶4个亚基的基因进行拼接,然后将这4个拼接好的片段,克隆到pMD18-T载体上,得到质粒pH BM714。再以质粒pHBM714 DNA为模板,用分别带有CpoI和A... 展开更多; 关键词油菜叶绿体乙酰辅酶A羧化酶单交换表达载体构建; 在线阅读下载PDF 职称材料

油菜RNA干扰(RNAi)文库的构建: 4; 作者谭秀华武玉永 +1 位作者单长民马立新《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第5期920-924,共5页; 为了通过构建高通量RNAi(RNA干扰)双元载体来得到油菜RNAi文库,对PCR引物设计时,在目的片段5′端和3′端分别引入合适的酶切位点序列,在3种中间载体的基础上构建高通量RNAi双元载体pHBMT4。该载体Bsu36Ⅰ酶切位点间的片段可被油菜的任... 展开更多; 关键词 RNAi文库构建油菜双元载体; 在线阅读下载PDF 职称材料

一种植物RNAi双元载体的构建: 5; 作者谭秀华宋晓冬 +2 位作者杨玥于敏马立新《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第8期3474-3476,3519,共4页; [目的]为利用RNAi技术研究植物基因组功能奠定基础。[方法]通过PCR技术克隆一系列RNAi双元载体所需要的元件:绿色荧光蛋白基因(gfp)、花椰菜花叶病毒启动子(CamV35S)、氨基糖苷3′-腺苷酰基转移酶基因(aada)、胭脂碱合成酶基因终止信号(... 展开更多; 关键词 RNAI 构建基因克隆双元载体; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名甘蓝型油菜乙酰辅酶A羧化酶3个亚基基因的克隆及其表达被引量：3: 1; 作者武玉永谭秀华马立新; 机构滨州医学院遗传学教研室湖北大学生命科学学院分子微生物学与基因工程实验室; 出处《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第10期4002-4006,共5页; 基金湖北省自然科学基金项目(2003ABA118); 文摘 [目的]为构建乙酰辅酶A羧化酶的叶绿体表达载体奠定基础：[方法]以从甘蓝型油菜叶片中提取的叶绿体基因组DNA为模板进行PCR扩增，克隆羧基转移酶β亚基基因.以从开花20～29d后油菜幼胚中提取的总RNA为模板进行RT-PCR扩增，克隆生物素羧化酶和生物素羧基载体蛋白的。cDNA序列。最后，乙酰辅酶A羧化酶的3个亚基基因被克隆到大肠杆菌表达载体中：[结果]SDS-PAGE分析结果表明乙酰辅酶A羧化酶的3个亚基基因分别被克隆到大肠杆菌表达载体中。乙酰辅酶A羧化酶的3个亚基基因在大肠杆菌中的表达产物分别为76．6、44．0和81．5kD，其融合蛋白分别占总菌体蛋白的12％、10％和6％。; 关键词甘蓝型油莱乙酰辅酶A羧化酶基因克隆基因表达; Keywords Brassica L. Acetvl-CoA carboxylase Gene cloning Gene expression; 分类号 S168 [农业科学—农业气象学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名甘蓝型油菜叶绿体多顺反子单交换表达载体构建被引量：2: 2; 作者武玉永姚庆收马立新; 机构滨州医学院遗传学教研室湖北大学生命科学学院分子微生物学与基因工程实验室; 出处《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第11期4431-4434,共4页; 基金国家"863"项目(2002AA227011) 湖北省自然科学基金(2003ABA118); 文摘 [目的]为研究质体定位的乙酰辅酶A羧化酶转化叶绿体奠定基础。[方法]根据GeneBank上的甘蓝型油菜的叶绿体DNA序列设计1对引物,通过PCR扩增获得与甘蓝型油菜叶绿体基因组可发生同源重组的DNA片段,构建甘蓝型油菜叶绿体多顺反子单交换表达载体,并在大肠杆菌中通过平板定性分析和Western印迹对所构建载体上的表达盒进行功能鉴定。[结果]以甘蓝型油菜的叶片叶绿体基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得4 357 bp的DNA片段,包含2个开放阅读框RbcL和β-CT。成功构建了甘蓝型油菜叶绿体多顺反子单交换表达载体pHBM720,而且同一多顺反子的3个基因均在大肠杆菌中得到表达。[结论]该叶绿体多顺反子单交换表达载体具有较强的通用性与安全性,比双交换表达载体更具优越性。; 关键词甘蓝型油菜叶绿体DNA 多顺反子单交换表达载体; Keywords Brassica napus L. Chloroplast DNA Multicistron Single ross expression vector; 分类号 S565.4 [农业科学—作物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名油菜叶绿体乙酰辅酶A羧化酶单交换表达载体的构建: 3; 作者武玉永谭秀华马立新; 机构滨州医学院医学遗传学教研室湖北大学生命科学学院分子微生物学与基因工程实验室; 出处《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期609-617,共9页; 基金国家"973"重大科学研究计划项目(2013CB910801) 山东省自然科学基金(ZR2010HQ054) 烟台市科技发展计划项目(2013ZH097); 文摘根据已知序列设计引物,通过PCR扩增获得质体定位的乙酰辅酶A羧化酶的4个亚基的基因序列。先将该酶4个亚基的基因进行拼接,然后将这4个拼接好的片段,克隆到pMD18-T载体上,得到质粒pH BM714。再以质粒pHBM714 DNA为模板,用分别带有CpoI和Asc I酶切位点的引物进行PCR扩增,PCR产物在dTTP的保护下经T4 DNA聚合酶处理,与将质粒pHBM720DNA纯化后经CpoI和AscI双酶切后得到的大片段连接,连接产物转化大肠杆菌Xl_(10)-gold,得到正确的重组子命名为pHBM726。此质粒pH BM726,即为带有壮观霉素抗性基因(aadA)筛选标记的质体定位的乙酰辅酶A羧化酶基因油菜叶绿体单交换表达载体;在此载体中壮观霉素抗性基因(aadA)、乙酰辅酶A羧化酶的4个亚基的基因(ACC)和绿色荧光蛋白基因(gfp)共6个基因串联在一起,共用一个启动子序列,一起来进行表达;通过酶切检测、PCR验证和测序验证,均表明该表达载体构建成功。最后此载体在大肠杆菌中表达时,发现重组菌能够在含壮观霉素的培养基上生长,且在可见光下,能看到绿色荧光,表明壮观霉素抗性基因和绿色荧光蛋白基因均在大肠杆菌中成功表达;表达产物通过Western印迹验证表明组成乙酰辅酶A羧化酶的4个亚基的基因在大肠杆菌中成功表达。以上结果表明,该表达载体中串联排列的这6个基因均在大肠杆菌中成功表达。该研究结果可为质体定位的乙酰辅酶A羧化酶转叶绿体的研究奠定基础,为油菜油脂代谢研究提供参考。; 关键词油菜叶绿体乙酰辅酶A羧化酶单交换表达载体构建; Keywords Brassica napus chloroplast acetyl coenzyme A carboxylase single-cross expression vector construction; 分类号 Q943.2 [生物学—植物学] S565.4 [农业科学—作物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名油菜RNA干扰(RNAi)文库的构建: 4; 作者谭秀华武玉永单长民马立新; 机构滨州医学院遗传学教研室湖北大学生命科学学院分子微生物学与基因工程实验室; 出处《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第5期920-924,共5页; 基金国家"十五"科技攻关(2004BA713B04-05); 文摘为了通过构建高通量RNAi(RNA干扰)双元载体来得到油菜RNAi文库,对PCR引物设计时,在目的片段5′端和3′端分别引入合适的酶切位点序列,在3种中间载体的基础上构建高通量RNAi双元载体pHBMT4。该载体Bsu36Ⅰ酶切位点间的片段可被油菜的任意一种功能片段取代。载体pHBMT4含有用以检测载体功效的gus报告基因,原多克隆位点处被一个插入目标序列表达框取代,该框含有的反向重复nos终止序列可自然形成发夹环结构引发转录后水平的基因沉默(PTGS)。通过抽提的油菜总DNA与载体pHBMT4相连转化获得了油菜RNAi文库,为以后研究油菜的基因组功能打下良好的基础。; 关键词 RNAi文库构建油菜双元载体; Keywords RNA interference（RNAi） library construction oilseed rape binary vector; 分类号 Q785 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名一种植物RNAi双元载体的构建: 5; 作者谭秀华宋晓冬杨玥于敏马立新; 机构滨州医学院遗传学教研室湖北大学生命科学学院分子微生物学与基因工程实验室; 出处《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第8期3474-3476,3519,共4页; 文摘 [目的]为利用RNAi技术研究植物基因组功能奠定基础。[方法]通过PCR技术克隆一系列RNAi双元载体所需要的元件:绿色荧光蛋白基因(gfp)、花椰菜花叶病毒启动子(CamV35S)、氨基糖苷3′-腺苷酰基转移酶基因(aada)、胭脂碱合成酶基因终止信号(nos),并进行组装,在双元载体质粒pCAMBIA1301的基础上构建目的载体。[结果]通过7种中间载体的构建,最后成功得到双元载体质粒pHBMT14。[结论]该载体的成功构建为以后的植物基因组功能研究提供了技术平台。; 关键词 RNAI 构建基因克隆双元载体; Keywords RNAi Constuction Gene cloning Binary vector; 分类号 S188 [农业科学—农业基础科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	甘蓝型油菜乙酰辅酶A羧化酶3个亚基基因的克隆及其表达	武玉永谭秀华马立新	《安徽农业科学》 CAS 北大核心	2008	3	在线阅读下载PDF 职称材料
2	甘蓝型油菜叶绿体多顺反子单交换表达载体构建	武玉永姚庆收马立新	《安徽农业科学》 CAS 北大核心	2008	2	在线阅读下载PDF 职称材料
3	油菜叶绿体乙酰辅酶A羧化酶单交换表达载体的构建	武玉永谭秀华马立新	《广西植物》 CAS CSCD 北大核心	2015	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	油菜RNA干扰(RNAi)文库的构建	谭秀华武玉永单长民马立新	《江苏农业学报》 CSCD 北大核心	2010	0	在线阅读下载PDF 职称材料
5	一种植物RNAi双元载体的构建	谭秀华宋晓冬杨玥于敏马立新	《安徽农业科学》 CAS 北大核心	2009	0	在线阅读下载PDF 职称材料