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响应面法优化十堰地区黄药叶果胶提取工艺及其基本性质研究
1
作者 吴正坤 桂利利 +1 位作者 余惠凡 李飞 《中国食品添加剂》 CAS 2024年第4期40-47,共8页
通过单因素试验和响应面法优化低温碱提取法黄药叶果胶提取工艺,并分析黄药叶果胶单糖组成及基本性质。结果表明,黄药叶果胶的最优提取工艺参数是NaOH浓度1.85 g/L、提取时间32 min和液料比60∶1(mL/g),黄药叶果胶在此条件下的得率为(10... 通过单因素试验和响应面法优化低温碱提取法黄药叶果胶提取工艺,并分析黄药叶果胶单糖组成及基本性质。结果表明,黄药叶果胶的最优提取工艺参数是NaOH浓度1.85 g/L、提取时间32 min和液料比60∶1(mL/g),黄药叶果胶在此条件下的得率为(10.785±0.017)%。果胶样品水解后得到5种单糖,分别是半乳糖醛酸45.06 mol%、鼠李糖19.91 mol%、半乳糖14.55 mol%、阿拉伯糖13.01 mol%、岩藻糖7.48 mol%。分析黄药叶果胶单糖组成和酯化度,黄药叶果胶为低脂果胶,且结构线性度低,主要结构为含有较短中性糖侧链的RG-I型果胶。本研究可为十堰地区黄药叶果胶的开发、利用和结构研究提供理论依据。 展开更多
关键词 黄药叶 果胶 提取工艺 响应面 单糖组成
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温敏离子通道蛋白TRPV4受热激活参与相关疾病发生的机制研究进展 被引量：1
2
作者 徐恋恋 吴兆猛 +4 位作者 王悦华 江陈梦 李征远 郑晓晖 高小康 《山东医药》 CAS 2022年第26期105-107,共3页
发热是机体应对感染和损伤的一种病理性防御反应。瞬时感受器电位离子通道香草素受体4(TRPV4)是瞬时感受器电位离子通道家族的成员,在机体中广泛表达,对体温具有负调节作用。当机体温度升高激活TRPV4或使其表达增多时,可引起脑水肿和癫... 发热是机体应对感染和损伤的一种病理性防御反应。瞬时感受器电位离子通道香草素受体4(TRPV4)是瞬时感受器电位离子通道家族的成员,在机体中广泛表达,对体温具有负调节作用。当机体温度升高激活TRPV4或使其表达增多时,可引起脑水肿和癫痫发作的加剧;TRPV4的活性及正常表达影响新生儿面部与心脏缺陷和精子活动趋热性。通过对TRPV4的多方面研究,有望揭示TRPV4受热激活下与疾病的具体机制,探索新的药物作用靶点和开发新的药物等。 展开更多
关键词 瞬时感受器电位离子通道香草素受体4 温敏离子通道蛋白 发热 激活
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黄药叶总黄酮提取工艺优化及其 抗氧化活性研究 被引量：20
3
作者 桂利利 吴正坤 +1 位作者 余惠凡 李飞 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2021年第19期100-108,共9页
采用超声波辅助提取法提取黄药叶总黄酮,通过单因素试验和正交试验优化黄药叶总黄酮提取工艺,并探讨其体外抗氧化活性。结果表明,黄药叶总黄酮最佳提取工艺参数为乙醇体积分数70%,提取次数3次,提取时间40 min,料液比1∶30(g/mL),此条件... 采用超声波辅助提取法提取黄药叶总黄酮,通过单因素试验和正交试验优化黄药叶总黄酮提取工艺,并探讨其体外抗氧化活性。结果表明,黄药叶总黄酮最佳提取工艺参数为乙醇体积分数70%,提取次数3次,提取时间40 min,料液比1∶30(g/mL),此条件下黄药叶总黄酮得率为(6.18±0.13)%。体外抗氧化试验结果表明,黄药叶总黄酮提取物对羟自由基、DPPH自由基和超氧阴离子自由基均具有一定的清除能力,相应的半数清除浓度(inhibitory concentration,IC_(50))为484.12、18.27、46.88μg/mL,分别为L-抗坏血酸的1.50、4.50、2.51倍,黄药叶总黄酮提取物铁离子还原能力略低于L-抗坏血酸。 展开更多
关键词 黄药叶 总黄酮 提取工艺 正交试验 抗氧化活性
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TRPV4原核表达纯化系统的构建及生物信息学分析
4
作者 李征远 徐恋恋 +2 位作者 孙建云 郑晓晖 高小康 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2022年第3期137-144,共8页
目的:构建非选择性阳离子通道蛋白TRPV4的原核表达纯化系统,并对其进行生物信息学分析,为与该目标蛋白相关疾病的研究和药物活性成分筛选提供技术支持。方法:将人源TRPV4基因分别克隆至pET-28a(+)、pET-32a、pET-15b、pGEX-5X-1、pEX-4T... 目的:构建非选择性阳离子通道蛋白TRPV4的原核表达纯化系统,并对其进行生物信息学分析,为与该目标蛋白相关疾病的研究和药物活性成分筛选提供技术支持。方法:将人源TRPV4基因分别克隆至pET-28a(+)、pET-32a、pET-15b、pGEX-5X-1、pEX-4T和pGEX-6p-1等6种表达载体,并利用BL21和Rossetta两种大肠杆菌表达宿主构建TRPV4原核表达系统。采用谷胱甘肽亲和层析和镍柱亲和层析法分离纯化目标蛋白。通过生物信息学技术对目标蛋白进行分析,获得其相应的理化性质和结构参数。结果:利用pGEX-6p-1载体和Rossetta构建了GST-TRPV4和GST-TRPV4-6his融合蛋白原核表达系统。诱导表达目标蛋白的IPTG浓度为0.6 mmol/L时,GSTTRPV4融合蛋白有明显表达,IPTG浓度为0.4 mmol/L时,GST-TRPV4-6his融合蛋白有明显表达,表达温度均为18℃。纯化GST-TRPV4-6his融合蛋白时,咪唑溶液在100 mmol/L或200 mmol/L时可以得到完整的GSTTRPV4-6his融合蛋白。结论:本文首次在原核表达系统中成功构建和表达纯化了人源TRPV4离子通道蛋白,并利用生物信息学分析解析了该蛋白的理化性质,为后续高纯度大量表达和进一步研究奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 TRPV4 离子通道蛋白 原核表达 pGEX-6p-1载体 大肠杆菌 生物信息学
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肺炎克雷伯菌CRP蛋白表达与纯化及生物学特征分析 被引量：1
5
作者 徐丽 邱雪梅 +3 位作者 骆海龙 杨靖 李蓓 汪静杰 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2021年第4期98-102,127,共6页
目的:原核表达获得肺炎克雷伯菌KP1_RS23625基因(crp)编码的CRP蛋白,并解析CRP蛋白具体的生物学功能。方法:首先克隆肺炎克雷伯菌crp基因,并亚克隆至pET-28a(+)质粒构建重组蛋白表达载体;然后体外原核诱导表达、纯化目的蛋白并进行SDS-P... 目的:原核表达获得肺炎克雷伯菌KP1_RS23625基因(crp)编码的CRP蛋白,并解析CRP蛋白具体的生物学功能。方法:首先克隆肺炎克雷伯菌crp基因,并亚克隆至pET-28a(+)质粒构建重组蛋白表达载体;然后体外原核诱导表达、纯化目的蛋白并进行SDS-PAGE电泳分析。进一步通过生物学信息方法分析CRP蛋白的生物学功能:利用ProtParam、Protscale、SignalP4.1 Service、TMHMM Server v.2.0、SOPMA、SWISS-MODEL软件分别分析目的蛋白理化性质、疏水性、信号肽、跨膜区域、二级与三级结构等一般生物学特征;并借助CDD数据库、Net Phos 3.1 Sever在线软件预测蛋白的功能结构域、磷酸化位点等功能特征;进一步利用ATRING 11.0交互式数据库进行蛋白质交联互作分析。结果:成功构建了重组目的蛋白表达载体pET-28a-crp,并通过原核诱导表达与镍柱亲和吸附法表达、纯化获得CRP目的蛋白;蛋白电泳结果显示CRP蛋白为水溶性蛋白,包括标签蛋白(约4 kDa)的重组目的蛋白分子质量约27 kDa。对CRP蛋白的生物信息学分析结果显示:CRP蛋白大小23.65 kDa、为亲水性蛋白;无跨膜结构域、无信号肽;蛋白二级结构主要由α螺旋与不规则卷曲构成,其中α-螺旋占比40%以上,结构较松散;同时成功构建了三级结构模型;CRP蛋白结构域分析表明含有1个功能结构域,属PRK11753超级家族;修饰位点及蛋白注释分析显示目的蛋白含20个磷酸化位点,与多个蛋白具有交互作用。结论:本研究利用基因工程方法成功获得了较高纯度肺炎克雷伯菌CRP蛋白,并通过生物信息学手段解析了其生物学特征,为肺炎克雷伯菌感染的临床治疗提供理论基础。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 CRP蛋白 转录因子 原核表达 生物信息学
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肺炎克雷伯菌对H2O2氧化胁迫的响应机制研究
6
作者 邱雪梅 徐丽 +4 位作者 骆海龙 袁杰 杨靖 李蓓 汪静杰 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2020年第21期99-104,共6页
目的:研究宿主肠道氧化条件对肺炎克雷伯菌的影响及该菌响应氧化胁迫的机制。方法:通过体外模拟肠道氧化条件,将肺炎克雷伯菌接种在含不同浓度梯度H_2O_2的液体培养基中进行氧化胁迫处理;测定细菌的生长曲线、检测细菌的关键毒力因子-... 目的:研究宿主肠道氧化条件对肺炎克雷伯菌的影响及该菌响应氧化胁迫的机制。方法:通过体外模拟肠道氧化条件,将肺炎克雷伯菌接种在含不同浓度梯度H_2O_2的液体培养基中进行氧化胁迫处理;测定细菌的生长曲线、检测细菌的关键毒力因子-荚膜与生物膜的生成量。并进一步地利用qRT-PCR荧光定量分析荚膜与生物膜表型相关基因的表达差异。结果:在氧化因子胁迫下,当处于较低浓度范围(<1.56 mmol/L)时,肺炎克雷伯菌早期生长受到抑制作用,中后期逐渐适应胁迫、其生长未受明显影响。此外,肺炎克雷伯菌在氧化胁迫条件下荚膜生成量明显降低,呈剂量依赖效应;但在一定浓度范围氧化因子作用下,其生物膜的形成量增加。分子检测表明荚膜结构基因magA表达量明显下调,生物膜相关基因YbaJ出现显著的上调表达。结论:肺炎克雷伯菌通过上调YbaJ基因的表达促进毒力因子生物膜形成以此响应氧化因子胁迫,本研究可为食源性肺炎克雷伯菌与宿主肠道因子互作及致病机制研究提供新思路。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 氧化 胁迫 生物膜 荚膜 毒力因子
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抗坏血酸-磷酸溶液超声提取-高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法快速测定土壤中6种砷形态的含量
7
作者 杨丽婷 隆星星 +2 位作者 王艳萍 郭怀兰 张垚 《理化检验（化学分册）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期770-774,共5页
为解决高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法(HPLC-ICP-MS)测定土壤中6种砷形态含量时色谱分离时间长以及亚砷酸根[As(Ⅲ)]易转化成砷酸根[As(Ⅴ)]的问题,进行了题示研究。在0.1 g土壤样品中添加体积比1∶1的1.6 mol·L^(-1)磷酸溶... 为解决高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法(HPLC-ICP-MS)测定土壤中6种砷形态含量时色谱分离时间长以及亚砷酸根[As(Ⅲ)]易转化成砷酸根[As(Ⅴ)]的问题,进行了题示研究。在0.1 g土壤样品中添加体积比1∶1的1.6 mol·L^(-1)磷酸溶液和0.5 mol·L^(-1)抗坏血酸溶液的混合溶液10 mL,常温下超声提取6 h,用水稀释至50 mL,经0.22μm聚醚砜膜过滤,用HPLC-ICP-MS测定滤液中砷甜菜碱(AsB)、As(Ⅲ)、二甲基砷(DMA)、砷胆碱(AsC)、一甲基砷(MMA)和As(Ⅴ)等6种砷形态的含量。在色谱分析中,以Dionex IonPac AG7色谱柱(50 mm×4 mm,10μm)为分析柱和保护柱,不同体积比的3.5 mmol·L^(-1)碳酸铵溶液和100 mmol·L^(-1)碳酸铵溶液的混合溶液为流动相进行梯度洗脱。结果显示:6种砷形态的质量浓度均在一定范围内和峰面积呈线性关系,检出限(3S/N)为0.010~0.050μg·L^(-1);按照标准加入法进行回收试验,回收率为92.0%~110%,测定值的相对标准偏差(n=6)均小于5.0%。方法用于6个实际土壤样品的分析,检出了As(Ⅲ)和As(Ⅴ),检出量分别为0.07~0.15μg·g^(-1)和3.44~8.61μg·g^(-1)。 展开更多
关键词 抗坏血酸 高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法 砷 形态分析 土壤
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五汁饮对对乙酰氨基酚诱导小鼠肝损伤的保护作用 被引量：1
8
作者 高金星 余惠凡 +1 位作者 覃彬华 张昌文 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2021年第16期331-335,共5页
目的:探讨五汁饮(Wuzhiyin,WZY)对对乙酰氨基酚(acetaminophen,AP)致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法:将小鼠随机分为空白组,模型组及五汁饮低、中、高剂量组,灌胃给药100、200、400 mg/kg,空白组和模型组灌胃等体积生理盐水。通过计算... 目的:探讨五汁饮(Wuzhiyin,WZY)对对乙酰氨基酚(acetaminophen,AP)致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法:将小鼠随机分为空白组,模型组及五汁饮低、中、高剂量组,灌胃给药100、200、400 mg/kg,空白组和模型组灌胃等体积生理盐水。通过计算脏器指数,检测血清中的ALT、AST及肝组织匀浆中的MDA、GSH、TNF-α、IL-6、IL-1β水平,结合肝组织切片来观察病理学变化。结果:五汁饮低、中、高剂量组小鼠肝脏指数较模型组降低(P<0.05或P<0.01)。与模型组相比,五汁饮中、高剂量明显抑制血清中的AST、ALT活力(P<0.05或P<0.01),显著性降低TNF-α、IL-6、IL-1β的水平(P<0.05或P<0.01),使肝组织匀浆中MDA水平降低,同时缓解肝组织匀浆中GSH水平的升高;组织病理学HE和Tunel染色显示五汁饮可改善肝组织的坏死与凋亡,并减轻细胞炎性浸润。结论:五汁饮对对乙酰氨基酚诱导的急性肝损伤有一定的保护作用,其机制可能与其抗氧化作用、减少炎症反应及抑制细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 五汁饮 对乙酰氨基酚 肝损伤 凋亡
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抗癌中药预知子/燕覆:本草变迁与资源分布 被引量：11
9
作者 周莉 李琛 +2 位作者 曹风军 李洪亮 汪选斌 《中医药临床杂志》 2019年第5期799-803,共5页
《中国药典》2010年以后版本均以木通科木通(五叶木通)Akebia quinata(Thunb.)Decne.,三叶木通Akebia trifoliata(Thunb.)Koidz.或白木通Akebia trifoliata(Thunb.)Koidz.Var australis(Diels)Rehd为抗癌中药预知子来源。同源藤茎入药... 《中国药典》2010年以后版本均以木通科木通(五叶木通)Akebia quinata(Thunb.)Decne.,三叶木通Akebia trifoliata(Thunb.)Koidz.或白木通Akebia trifoliata(Thunb.)Koidz.Var australis(Diels)Rehd为抗癌中药预知子来源。同源藤茎入药之木通始载于《神农本草经》,又名通草,但《本草纲目》中除收载通草子(木通科种子,又名燕覆子)外,另收载了"预知子",可见二者非同一基源。然正是由于有通草之名,导致长期与毛茛科铁线莲属川木通、马兜铃科关木通混用。直到关木通导致肾毒事件之后,2015版药典才将其区别。因此,建议现中国药典之预知子的学名改为"燕覆(Akebiae Fructus)"。并将木通严格区别于关木通和川木通。其在资源分布上,预知子/燕覆广泛分布于长江及黄河流域各省、东南地区及台湾。日本、朝鲜、俄罗斯亦有分布报道。但重庆、福建未见有野生资源报道。重庆自1997年行政区划方独立于四川成立直辖市,其周边湖北、湖南、陕西、贵州地区均有三叶木通、白木通分布;而福建周边浙江、江西、广东、台湾均有白木通分布,鉴于四川省为木通药材资源分布地区。因此,推测重庆应有三叶木通、白木通分布;福建应有白木通分布,有待今后进一步去证实。 展开更多
关键词 预知子 燕覆 本草考证 资源分布
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