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肺炎克雷伯菌CRP蛋白表达与纯化及生物学特征分析 被引量:1
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作者 徐丽 邱雪梅 +3 位作者 骆海龙 杨靖 李蓓 汪静杰 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2021年第4期98-102,127,共6页
目的:原核表达获得肺炎克雷伯菌KP1_RS23625基因(crp)编码的CRP蛋白,并解析CRP蛋白具体的生物学功能。方法:首先克隆肺炎克雷伯菌crp基因,并亚克隆至pET-28a(+)质粒构建重组蛋白表达载体;然后体外原核诱导表达、纯化目的蛋白并进行SDS-P... 目的:原核表达获得肺炎克雷伯菌KP1_RS23625基因(crp)编码的CRP蛋白,并解析CRP蛋白具体的生物学功能。方法:首先克隆肺炎克雷伯菌crp基因,并亚克隆至pET-28a(+)质粒构建重组蛋白表达载体;然后体外原核诱导表达、纯化目的蛋白并进行SDS-PAGE电泳分析。进一步通过生物学信息方法分析CRP蛋白的生物学功能:利用ProtParam、Protscale、SignalP4.1 Service、TMHMM Server v.2.0、SOPMA、SWISS-MODEL软件分别分析目的蛋白理化性质、疏水性、信号肽、跨膜区域、二级与三级结构等一般生物学特征;并借助CDD数据库、Net Phos 3.1 Sever在线软件预测蛋白的功能结构域、磷酸化位点等功能特征;进一步利用ATRING 11.0交互式数据库进行蛋白质交联互作分析。结果:成功构建了重组目的蛋白表达载体pET-28a-crp,并通过原核诱导表达与镍柱亲和吸附法表达、纯化获得CRP目的蛋白;蛋白电泳结果显示CRP蛋白为水溶性蛋白,包括标签蛋白(约4 kDa)的重组目的蛋白分子质量约27 kDa。对CRP蛋白的生物信息学分析结果显示:CRP蛋白大小23.65 kDa、为亲水性蛋白;无跨膜结构域、无信号肽;蛋白二级结构主要由α螺旋与不规则卷曲构成,其中α-螺旋占比40%以上,结构较松散;同时成功构建了三级结构模型;CRP蛋白结构域分析表明含有1个功能结构域,属PRK11753超级家族;修饰位点及蛋白注释分析显示目的蛋白含20个磷酸化位点,与多个蛋白具有交互作用。结论:本研究利用基因工程方法成功获得了较高纯度肺炎克雷伯菌CRP蛋白,并通过生物信息学手段解析了其生物学特征,为肺炎克雷伯菌感染的临床治疗提供理论基础。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 CRP蛋白 转录因子 原核表达 生物信息学
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胰岛素抵抗指数对PCOS不孕患者IVF-ET治疗妊娠结局的预测 被引量:9
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作者 胡玥玥 张昌军 《中国医药导报》 CAS 2017年第35期66-70,共5页
目的探讨胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)对多囊卵巢综合征(PCOS)不孕患者行体外受精-胚胎移植(IVFET)治疗妊娠结局的预测价值。方法回顾性分析2014年8月~2016年8月在湖北医药学院附属人民医院生殖医学中心接受IVF-ET治疗的PCOS患者86例的临床... 目的探讨胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)对多囊卵巢综合征(PCOS)不孕患者行体外受精-胚胎移植(IVFET)治疗妊娠结局的预测价值。方法回顾性分析2014年8月~2016年8月在湖北医药学院附属人民医院生殖医学中心接受IVF-ET治疗的PCOS患者86例的临床资料,根据HOMA-IR分为两组:观察组(胰岛素抵抗组)44例,HOMA-IR≥1.66;对照组(非胰岛素抵抗组)42例,HOMA-IR<1.66。比较两组患者的一般资料、体重指数(BMI)、游离睾酮指数(FTI)、空腹胰岛素(INS)、空腹血糖(Glu)、促排卵情况、妊娠结局等;对影响PCOS患者IVF-ET妊娠结局的因素进行Logistic回归分析。结果观察组BMI、FTI、Glu、INS、HOMA-IR显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);观察组获卵数低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组临床妊娠率、活产率显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组正常受精率、优质胚胎率、胚胎着床率、卵巢过度刺激综合征发生率、早期流产率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。PCOS患者年龄、不孕年限、BMI是妊娠结局的独立危险因素(P<0.05),AMH是妊娠结局的保护因素(P<0.05)。结论 PCOS患者行IVF-ET助孕治疗过程中,HOMA-IR值越低其妊娠结局可能越好。 展开更多
关键词 多囊卵巢综合征 胰岛素抵抗指数 体外受精-胚胎移植 妊娠结局
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先天性肾上腺皮质增生症行体外受精-胚胎移植一例分析及文献复习 被引量:4
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作者 胡玥玥 徐少元 +1 位作者 彭海英 张昌军 《国际生殖健康/计划生育杂志》 CAS 2018年第6期463-467,共5页
目的:探讨先天性肾上腺皮质增生症(CAH)基因诊断及行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕治疗的特点。方法:报告1例CAH合并原发性不孕女性患者的临床表现、染色体检查、生化和类固醇激素测定,采用直接基因测序法测定基因型,并进行糖皮质激素... 目的:探讨先天性肾上腺皮质增生症(CAH)基因诊断及行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕治疗的特点。方法:报告1例CAH合并原发性不孕女性患者的临床表现、染色体检查、生化和类固醇激素测定,采用直接基因测序法测定基因型,并进行糖皮质激素替代治疗及IVF-ET助孕治疗。结果:该患者基因突变检测显示CYP21A2基因复合杂合突变,确诊为21-羟化酶缺乏(21-OHD)型CAH,经IVF-ET成功妊娠,孕期予以糖皮质激素干预并进行产前诊断,孕足月分娩一健康男婴。结论:基因检测是CAH遗传学诊断和产前诊断的有效方法,CAH患者进行IVF-ET期间降低雄激素与孕激素可改善助孕治疗结局。 展开更多
关键词 肾上腺皮质功能亢进 不育 女(雌)性 受精 体外 先天性肾上腺皮质增生症 21-羟化酶缺乏 基因诊断
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缺氧诱导的外泌体活化自噬促进肝癌进展 被引量:1
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作者 王坪锋 胡培 +3 位作者 童堃 童尧尧 李莹 严世荣 《山西医科大学学报》 CAS 2023年第8期1019-1028,共10页
目的探讨缺氧诱导的外泌体对肝癌进展的调节作用及其机制。方法将Huh7细胞置于0.1%O_(2)培养箱培养24 h作为缺氧组,另设常氧组,提取外泌体,纳米追踪技术检测外泌体的浓度和粒径大小,免疫印迹检测HSP70、Alix、CD63的表达。将Huh7细胞分... 目的探讨缺氧诱导的外泌体对肝癌进展的调节作用及其机制。方法将Huh7细胞置于0.1%O_(2)培养箱培养24 h作为缺氧组,另设常氧组,提取外泌体,纳米追踪技术检测外泌体的浓度和粒径大小,免疫印迹检测HSP70、Alix、CD63的表达。将Huh7细胞分为对照组(PBS)、常氧外泌体组(20μg/ml常氧外泌体)、缺氧外泌体组(20μg/ml缺氧外泌体),实时无标记细胞分析仪(real-time cell analysis,RTCA)实验检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,免疫印记检测细胞PCNA、cyclin D1、Bax、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Beclin1、LC3、p62的表达,激光共聚焦检测自噬流的改变。Huh7细胞分为对照组(PBS)、缺氧外泌体组(20μg/ml缺氧外泌体)、缺氧外泌体+3-MA组(5 mmol/L 3-甲基腺嘌呤+1 h后20μg/ml缺氧外泌体),检测细胞增殖、迁移和相关蛋白的表达。结果与常氧组相比,缺氧组外泌体浓度增加,但外泌体粒径的大小没有明显变化,缺氧组外泌体标记蛋白HSP70、Alix、CD63的表达增加(P<0.05)。与常氧外泌体组相比,缺氧外泌体组Huh7细胞增殖和迁移能力增强(均P<0.05),PCNA、cyclin D1、N-cadherin、Vimentin、Beclin1、LC3-Ⅱ的表达上调,Bax、E-cadherin和p62的表达下调(均P<0.05),自噬流增强(P<0.05)。与缺氧外泌体组相比,缺氧外泌体+3-MA组Huh7细胞增殖、迁移和上皮间质转化作用减弱(P<0.05),PCNA、cyclin D1、N-cadherin、Vimentin、Beclin1、LC3-Ⅱ的表达下调(P<0.05),Bax、E-cadherin和p62的表达上调(P<0.05)。结论缺氧诱导的外泌体可以参与细胞自噬的发生进而促进肝癌进展。 展开更多
关键词 肝细胞癌 外泌体 缺氧 自噬 自噬流
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瞬时受体电位香草素受体4在消化道疾病中的研究进展 被引量:1
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作者 朱贝贝 吴昊 +3 位作者 刘晓波 刘小琪 金曙 李胜保 《安徽医学》 2022年第6期729-732,共4页
瞬时受体电位香草素受体4(transient receptor potential vanilloid 4,TRPV4)是一种阳离子通道蛋白,在人类和动物的多种细胞中广泛表达,参与化学传感、伤害感受、调节免疫细胞和细胞因子的释放等多种重要病理生理过程[1]。在消化道中,TR... 瞬时受体电位香草素受体4(transient receptor potential vanilloid 4,TRPV4)是一种阳离子通道蛋白,在人类和动物的多种细胞中广泛表达,参与化学传感、伤害感受、调节免疫细胞和细胞因子的释放等多种重要病理生理过程[1]。在消化道中,TRPV4主要表达于胃肠道神经细胞、上皮细胞及免疫细胞中,在调节胃肠动力、内脏超敏、炎症免疫、细胞增殖等方面发挥重要作用[2-4]。目前认为,TRPV4表达异常或活性改变与胃肠道多种疾病有关,包括炎症性肠病、肠易激综合征及胃肠道恶性肿瘤等[3]。本篇综述旨在分析TRPV4病理生理学特性,并总结TRPV4在消化道疾病发病机制中的研究进展。 展开更多
关键词 瞬时受体电位香草素受体4 钙离子 内脏超敏 炎症 肿瘤
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浅析“郧西七夕”对当地经济文化建设的影响——对郧西地区“七夕”文化底蕴辐射力的社会调研
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作者 王鑫 《科技创新与应用》 2012年第19期330-330,共1页
湖北省郧西县是国家级贫困县,近年来郧西根据其自身的旅游资源富集、文化底蕴深厚的实际情况,借助郧西地区"七夕"文化底蕴雄厚的辐射力,极大发挥自身资源优势,对"七夕文化"进行丰富内涵建设,从而带动郧西地区经济... 湖北省郧西县是国家级贫困县,近年来郧西根据其自身的旅游资源富集、文化底蕴深厚的实际情况,借助郧西地区"七夕"文化底蕴雄厚的辐射力,极大发挥自身资源优势,对"七夕文化"进行丰富内涵建设,从而带动郧西地区经济快速发展,提高了人民生活水平、极大地丰富了人民文化生活。 展开更多
关键词 郧西 七夕文化 天河经济 文化底蕴
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局部多维聚类分割CT肝脏微小病灶的方法
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作者 何强 高瞻 +2 位作者 段钰桔 周利炆 赵亮 《电子设计工程》 2022年第20期34-37,43,共5页
针对肝脏微小病灶在影像诊断中容易被遗漏,设计局部敏感的图像分割算法,分割肝脏中的微小病灶。采用影像科医生标注的53例多发低密度微小病灶的病例,得到841张肝脏病灶图片,包含1 638个病灶区域。统计所有微小病灶灰度值的均值和标准差... 针对肝脏微小病灶在影像诊断中容易被遗漏,设计局部敏感的图像分割算法,分割肝脏中的微小病灶。采用影像科医生标注的53例多发低密度微小病灶的病例,得到841张肝脏病灶图片,包含1 638个病灶区域。统计所有微小病灶灰度值的均值和标准差。将肝脏区域裁剪成不相交子块,子块中肝脏区域的灰度值、相对位置坐标、梯度信息构成多维向量,采用聚类算法对子块进行分割,取符合统计分布的簇作为分割结果,并对分割结果进行后处理以及假阳性过滤。通过统计,1 638个小病灶灰度值的均值为46.25±22.71,使用该文算法分割53例肝脏中微小病灶,采用十则交叉验证与人工标注微小病灶结果计算Dice,最好的结果为0.513 4±0.078 1。实验表明,将灰度值、相对位置坐标和梯度信息构成多维向量,使用kmeans++聚类算法可以有效分割肝脏中的微小病灶,其具有重要的临床应用价值。 展开更多
关键词 多维 局部 分割 肝脏 微小病灶
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