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肺炎克雷伯菌CRP蛋白表达与纯化及生物学特征分析 被引量：1
1
作者 徐丽 邱雪梅 +3 位作者 骆海龙 杨靖 李蓓 汪静杰 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2021年第4期98-102,127,共6页
目的:原核表达获得肺炎克雷伯菌KP1_RS23625基因(crp)编码的CRP蛋白,并解析CRP蛋白具体的生物学功能。方法:首先克隆肺炎克雷伯菌crp基因,并亚克隆至pET-28a(+)质粒构建重组蛋白表达载体;然后体外原核诱导表达、纯化目的蛋白并进行SDS-P... 目的:原核表达获得肺炎克雷伯菌KP1_RS23625基因(crp)编码的CRP蛋白,并解析CRP蛋白具体的生物学功能。方法:首先克隆肺炎克雷伯菌crp基因,并亚克隆至pET-28a(+)质粒构建重组蛋白表达载体;然后体外原核诱导表达、纯化目的蛋白并进行SDS-PAGE电泳分析。进一步通过生物学信息方法分析CRP蛋白的生物学功能:利用ProtParam、Protscale、SignalP4.1 Service、TMHMM Server v.2.0、SOPMA、SWISS-MODEL软件分别分析目的蛋白理化性质、疏水性、信号肽、跨膜区域、二级与三级结构等一般生物学特征;并借助CDD数据库、Net Phos 3.1 Sever在线软件预测蛋白的功能结构域、磷酸化位点等功能特征;进一步利用ATRING 11.0交互式数据库进行蛋白质交联互作分析。结果:成功构建了重组目的蛋白表达载体pET-28a-crp,并通过原核诱导表达与镍柱亲和吸附法表达、纯化获得CRP目的蛋白;蛋白电泳结果显示CRP蛋白为水溶性蛋白,包括标签蛋白(约4 kDa)的重组目的蛋白分子质量约27 kDa。对CRP蛋白的生物信息学分析结果显示:CRP蛋白大小23.65 kDa、为亲水性蛋白;无跨膜结构域、无信号肽;蛋白二级结构主要由α螺旋与不规则卷曲构成,其中α-螺旋占比40%以上,结构较松散;同时成功构建了三级结构模型;CRP蛋白结构域分析表明含有1个功能结构域,属PRK11753超级家族;修饰位点及蛋白注释分析显示目的蛋白含20个磷酸化位点,与多个蛋白具有交互作用。结论:本研究利用基因工程方法成功获得了较高纯度肺炎克雷伯菌CRP蛋白,并通过生物信息学手段解析了其生物学特征,为肺炎克雷伯菌感染的临床治疗提供理论基础。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 CRP蛋白 转录因子 原核表达 生物信息学
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结合监测点优化的能谱扫描在双低剂量下肢动脉血管CT成像中的应用价值 被引量：3
2
作者 梅莞翠 李铖铖 +5 位作者 汤倩 陈文 王赛 陈素萍 杨波 刘超 《放射学实践》 CSCD 北大核心 2024年第9期1221-1227,共7页
目的:探讨能谱扫描结合腘动脉水平监测在双低剂量(低辐射剂量和低对比剂剂量)下肢动脉血管CT成像(CTA)中的应用价值。方法:前瞻性纳入需行下肢CTA检查的111例患者,分为A、B、C三组。A组(35例)采用常规扫描模式,对比剂105 mL,监测腹主动... 目的:探讨能谱扫描结合腘动脉水平监测在双低剂量(低辐射剂量和低对比剂剂量)下肢动脉血管CT成像(CTA)中的应用价值。方法:前瞻性纳入需行下肢CTA检查的111例患者,分为A、B、C三组。A组(35例)采用常规扫描模式,对比剂105 mL,监测腹主动脉;B组(38例)采用能谱扫描模式,对比剂95 mL,监测腹主动脉;C组(38例)采用能谱扫描模式,对比剂85 mL,监测腘动脉。记录3组的辐射剂量与对比剂剂量。对于B、C两组,生成50 keV单能图像进行分析。由2位医师采用5分法对3组图像腹髂段(AIS)、股腘段(FPS)和膝下段(LKS)进行图像质量评分。测量CT值及噪声值,计算信噪比(SNR)及对比噪声比(CNR)。比较3组图像间的客观参数、主观评分、辐射剂量和对比剂剂量。结果:C组对比剂剂量较A组降低了19.04%,ED降低了14%,差异均有统计学意义(P均<0.05)。B、C两组在各血管处CT值均高于A组(P<0.05)。从腹主动脉到踝动脉,C组的客观图像质量优势逐渐显现,在踝动脉处的SNR和CNR最高,其次为B组,A组最低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。图像质量主观评分方面,AIS段3组图像质量评分差异无统计学意义;FPS段B、C组评分高于A组;LKS段C组评分最高,B组次之,A组最低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:与传统下肢CTA、腹主动脉点监测扫描方案相比,能谱结合腘动脉水平监测点扫描方案在双低剂量下可提高下肢动脉的图像质量,尤其提高了对膝下血管的显示能力,具有较高的临床应用价值。 展开更多
关键词 能谱CT 体层摄影术 X线计算机 下肢动脉 辐射剂量 对比剂剂量 阈值监测
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血管生成素样蛋白8敲除减轻脂多糖诱导的肝脏脂质沉积 被引量：2
3
作者 罗珊 冯莹 +3 位作者 范丹丹 郑雯鑫 郭兴荣 阮绪芝 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2024年第9期1197-1203,共7页
目的 探索血管生成素样蛋白8(ANGPTL8)在脂多糖(LPS)诱导的肝脏脂质沉积中的作用及机制。方法 选取6~8周雄性野生型和ANGPTL8敲除小鼠,通过腹腔注射LPS(10 mg/kg)诱导脓毒症小鼠模型。荧光定量PCR(qPCR)检测肝脏组织和免疫荧光检测HepG... 目的 探索血管生成素样蛋白8(ANGPTL8)在脂多糖(LPS)诱导的肝脏脂质沉积中的作用及机制。方法 选取6~8周雄性野生型和ANGPTL8敲除小鼠,通过腹腔注射LPS(10 mg/kg)诱导脓毒症小鼠模型。荧光定量PCR(qPCR)检测肝脏组织和免疫荧光检测HepG2细胞中ANGPTL8的表达;分别用谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)和丙二醛(MDA)试剂盒检测血清ALT、AST水平及肝脏组织TG、MDA含量;HE染色观察肝脏组织的病理变化;油红O染色分析肝组织脂滴形成;TUNEL检测肝细胞凋亡;RNA-seq分析肝脏组织差异表达基因,并通过qPCR及Western blot进一步验证差异基因。结果 LPS刺激小鼠48 h后,肝脏ANGPTL8明显上调;与野生型小鼠相比,ANGPTL8敲除小鼠肝脏脂质沉积、脂肪变性和细胞凋亡显著减轻,血清中ALT、AST以及肝脏TG、MDA的水平显著降低;ANGPTL8敲除可上调LPS诱导的肝脏中小窝蛋白1(CAV1)的表达。结论 LPS促进肝脏组织ANGPTL8的表达和分泌,ANGPTL8通过抑制CAV1促进肝脏脂质沉积和过氧化,从而加剧LPS诱导的肝脏脂质沉积。 展开更多
关键词 血管生成素样蛋白8 脂多糖 小窝蛋白1 脂质沉积 凋亡
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功能磁共振在非神经精神性系统性红斑狼疮中的研究进展
4
作者 陈嘉玲 敖锋 《磁共振成像》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期158-164,共7页
非神经精神性系统红斑狼疮(non-neuropsychiatric systemic lupus erythematosus,non-NPSLE)是系统性红斑狼疮疾病中的一个亚型,累及中枢神经系统,持续损害患者健康。目前对于non-NPSLE的发病机制尚不明确。功能MRI技术能够提供无创且... 非神经精神性系统红斑狼疮(non-neuropsychiatric systemic lupus erythematosus,non-NPSLE)是系统性红斑狼疮疾病中的一个亚型,累及中枢神经系统,持续损害患者健康。目前对于non-NPSLE的发病机制尚不明确。功能MRI技术能够提供无创且具有价值的研究成果,有助于多层次、多角度地研究non-NPSLE的神经生物学机制以及生物学标记物。近年来,已有多种功能MRI技术被应用于non-NPSLE探索其脑功能变化。综上所述,本文对功能MRI技术在non-NPSLE应用中的研究结果及潜在不足进行综述,旨在为今后non-NPSLE的研究提供方向。 展开更多
关键词 系统性红斑狼疮 磁共振成像 血氧水平依赖 扩散张量成像 动脉自旋标记
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ANGPTL8调控糖代谢作用机制研究 被引量：4
5
作者 马石楠 李忠耀 郭兴荣 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期200-206,共7页
探讨ANGPTL8在胰岛素作用下对人肝细胞糖代谢影响及可能的作用机制。利用尾静脉水动力转染证实在小鼠肝脏过表达ANGPTL8可提高进食期糖耐受;在Hep G2细胞中利用q PCR检测进食的主要调控因素胰岛素、葡萄糖等对ANGPTL8表达影响,发现单独... 探讨ANGPTL8在胰岛素作用下对人肝细胞糖代谢影响及可能的作用机制。利用尾静脉水动力转染证实在小鼠肝脏过表达ANGPTL8可提高进食期糖耐受;在Hep G2细胞中利用q PCR检测进食的主要调控因素胰岛素、葡萄糖等对ANGPTL8表达影响,发现单独的葡萄糖或胰岛素对ANGPTL8表达影响不明显,而葡萄糖和胰岛素组合可显著促进ANGPTL8表达;利用Western blotting分析在ANGPTL8敲除(ANGPTL8-/-)和ANGPTL8稳定过表达(ANGPTL8++)的Hep G2细胞中胰岛素介导PI3K/AKT信号通路蛋白及其蛋白磷酸化表达差异,结果显示ANGPTL8可上调胰岛素介导的AKT信号通路中AKT、GSK-3β、Fox O1蛋白磷酸化;PAS染色分析ANGPTL8可促进胰岛素介导的糖原合成。 展开更多
关键词 ANGPTL8 糖耐受 PI3K/AKT信号通路 糖原合成
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基于多模态MRI影像组学的胶质母细胞瘤生境亚区预测MGMT启动子甲基化表达 被引量：4
6
作者 焦凯剑 杨波 +3 位作者 陈文 方钰辉 陈亚琳 吴磊 《磁共振成像》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期25-30,76,共7页
目的探讨胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)不同肿瘤生境亚区多模态影像组学模型用于术前预测GBM O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)启动子甲基化的效能。材料与方法回顾性分析来自湖北医药学院... 目的探讨胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)不同肿瘤生境亚区多模态影像组学模型用于术前预测GBM O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)启动子甲基化的效能。材料与方法回顾性分析来自湖北医药学院附属太和医院、宾法尼西亚大学、加州大学弗朗西斯科分校的600例GBM患者的术前MRI图像、临床和基因信息。自动分割预处理后的图像,得到GBM的三个肿瘤生境亚区(增强区域、坏死区域和水肿区域)。从术前MRI图像[对比增强T1加权成像(contrast enhanced T1-weighted imaging,T1WI-CE)序列、T2液体衰减反转恢复(T2 fluid attenuation inversion recovery,T2-FLAIR)序列和弥散张量成像(diffusion tensor imaging,DTI)的各向异性分数(fractional anisotropy,FA)参数图]上分别提取三个亚区的2153个影像组学特征。通过相关性分析、最小冗余最大相关算法(minimum redundancy maximum relevance,MRMR)和Boruta算法进行特征筛选,使用XGBoost算法构建模型。以受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线及其曲线下面积(area under the curve,AUC)、准确度、敏感度和特异度等指标评价模型诊断效能,DeLong检验对比模型差异性。结果在训练集和测试集两个亚型的不同临床特征的组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。特征筛选后获得10个来自多模态生境亚区的特征。多模态生境亚区影像组学模型在训练集和测试集上的AUC分别为0.874和0.899。结论术前MRI影像组学模型可以预测GBM患者MGMT基因启动子甲基化状态,多序列组合模型的诊断效能更具鲁棒性,肿瘤生境亚区的研究为GBM患者的分子分型的精确诊断、替莫唑胺(temozolomide,TMZ)使用的决策、生存期预测提供了重要的临床辅助价值。 展开更多
关键词 胶质母细胞瘤 影像组学 磁共振成像 O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶 生境成像
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甲基化转移酶抑制剂BIX01294促进小鼠子宫基质细胞迁移、抑制基质细胞蜕膜化 被引量：1
7
作者 廖晖淇 田鎏 +3 位作者 杨慧 马妮 张昌军 刁红录 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期730-736,共7页
目的探讨甲基化转移酶抑制剂BIX01294(BIX)对小鼠子宫内膜基质细胞迁移和蜕膜化过程的作用和影响。方法取妊娠第3.5天小鼠子宫分离培养得小鼠子宫内膜基质细胞,采用细胞划痕运动分析、体外诱导小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化模型及Real-tim... 目的探讨甲基化转移酶抑制剂BIX01294(BIX)对小鼠子宫内膜基质细胞迁移和蜕膜化过程的作用和影响。方法取妊娠第3.5天小鼠子宫分离培养得小鼠子宫内膜基质细胞,采用细胞划痕运动分析、体外诱导小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化模型及Real-time PCR方法分别从形态学和分子生物学角度观察BIX对小鼠子宫内膜基质细胞迁移及蜕膜化的影响。结果在一定浓度范围内(BIX≤15μmol/L),小鼠子宫内膜基质细胞的迁移距离随着BIX浓度的升高而增加,与对照组相比,BIX 15μmol/L处理组基质细胞的迁移距离增加最明显,差异具有统计学意义,当BIX浓度提高到20μmol/L时,细胞迁移距离增加不明显,且此时开始出现细胞的死亡;与对照组相比,BIX处理24 h组小鼠子宫内膜基质细胞Ehmt2 m RNA表达显著下调(P<0.01);并且15μmol/L BIX能够抑制小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化反应。结论一定浓度范围的BIX通过抑制Ehmt2m RNA在基质细胞中的表达促进小鼠子宫内膜基质细胞的迁移,并且对小鼠子宫基质细胞的蜕膜化过程有抑制作用。 展开更多
关键词 子宫内膜基质细胞 迁移 蜕膜化 BIX01294 组蛋白甲基化
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TALEN介导的CXCR4敲除肝癌细胞株的建立 被引量：1
8
作者 张文美 丁妍 +3 位作者 郭兴荣 李东升 赵万红 王小莉 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期225-228,共4页
通过TALEN打靶建立CXCR4的细胞株,旨在研究CXCR4对肝癌的影响。选用肝癌细胞株Hep G2,采用转录激活样效应物核酸酶(TALEN)干扰细胞中CXCR4的表达。构建的CXCR4 TALEN质粒转入Hep G2细胞,通过T7E1酶切确定打靶效率为40%,并通过测序筛选出... 通过TALEN打靶建立CXCR4的细胞株,旨在研究CXCR4对肝癌的影响。选用肝癌细胞株Hep G2,采用转录激活样效应物核酸酶(TALEN)干扰细胞中CXCR4的表达。构建的CXCR4 TALEN质粒转入Hep G2细胞,通过T7E1酶切确定打靶效率为40%,并通过测序筛选出了CXCR4敲除的单克隆细胞,免疫荧光和Western blot进一步证实CXCR4基因表达显著下调。 展开更多
关键词 TALEN CXCR4 肝癌 基因打靶
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ANGPTL8敲除减轻DEN诱导的小鼠急性肝损伤 被引量：1
9
作者 高玉玖 胡蓉 +4 位作者 方晨 李盼盼 孟享 郭兴荣 冯莹 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第3期278-284,共7页
目的 探讨血管生成素样蛋白8(ANGPTL8)在N-二乙基亚硝胺(DEN)诱导小鼠急性肝损伤中的作用及机制。方法 选取雄性野生型(WT)和ANGPTL8敲除(ANGPTL8 KO)C57BL/6J小鼠,腹腔注射DEN(50 mg/kg)诱导急性肝损伤模型(15日龄各组32只,8周龄各组14... 目的 探讨血管生成素样蛋白8(ANGPTL8)在N-二乙基亚硝胺(DEN)诱导小鼠急性肝损伤中的作用及机制。方法 选取雄性野生型(WT)和ANGPTL8敲除(ANGPTL8 KO)C57BL/6J小鼠,腹腔注射DEN(50 mg/kg)诱导急性肝损伤模型(15日龄各组32只,8周龄各组14只)。利用PCR和免疫荧光检测肝组织和肝原代细胞中ANGPTL8的表达变化;试剂盒检测血清中ALT、AST含量;HE染色观察肝脏组织病理学变化;流式细胞术和共聚焦显微镜分析肝原代细胞活性氧(ROS)累积差异;ELISA检测血液中炎症因子IL-6、IL-1β含量;TUNEL染色检测肝细胞凋亡水平。结果 DEN诱导3 d显著上调肝脏中ANGPTL8表达;与WT小鼠相比,ANGPTL8 KO可显著下调DEN诱导小鼠血清中ALT和AST、IL-6和IL-1β水平;ANGPTL8KO小鼠肝小叶紊乱程度、炎症细胞浸润、肝细胞淤血、空泡样变和坏死程度较轻;ANGPTL8 KO小鼠显著改善DEN诱导的肝细胞ROS累积和凋亡。结论 DEN上调肝脏中ANGPTL8表达,ANGPTL8进一步促进肝脏急性炎症期ROS累积、炎症因子表达和肝细胞凋亡,从而加剧DEN诱导的急性肝损伤。 展开更多
关键词 ANGPTL8 急性肝损伤 活性氧 炎症因子 凋亡
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