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题名肺炎克雷伯菌CRP蛋白表达与纯化及生物学特征分析
被引量：1
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作者
徐丽
邱雪梅
骆海龙
杨靖
李蓓
汪静杰
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机构
湖北医药学院基础医学院
湖北医药学院生物医药研究院
湖北医药学院生物医学与工程学院
武当特色中药研究湖北省重点实验室
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出处
《食品工业科技》
CAS
北大核心
2021年第4期98-102,127,共6页
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基金
湖北省教育厅科研计划项目(Q20182103)
湖北省自然科学基金(2019CFB143)
湖北医药学院人才启动基金(2017QDJZR16,2016QDJZR17)。
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文摘
目的:原核表达获得肺炎克雷伯菌KP1_RS23625基因(crp)编码的CRP蛋白,并解析CRP蛋白具体的生物学功能。方法:首先克隆肺炎克雷伯菌crp基因,并亚克隆至pET-28a(+)质粒构建重组蛋白表达载体;然后体外原核诱导表达、纯化目的蛋白并进行SDS-PAGE电泳分析。进一步通过生物学信息方法分析CRP蛋白的生物学功能:利用ProtParam、Protscale、SignalP4.1 Service、TMHMM Server v.2.0、SOPMA、SWISS-MODEL软件分别分析目的蛋白理化性质、疏水性、信号肽、跨膜区域、二级与三级结构等一般生物学特征;并借助CDD数据库、Net Phos 3.1 Sever在线软件预测蛋白的功能结构域、磷酸化位点等功能特征;进一步利用ATRING 11.0交互式数据库进行蛋白质交联互作分析。结果:成功构建了重组目的蛋白表达载体pET-28a-crp,并通过原核诱导表达与镍柱亲和吸附法表达、纯化获得CRP目的蛋白;蛋白电泳结果显示CRP蛋白为水溶性蛋白,包括标签蛋白(约4 kDa)的重组目的蛋白分子质量约27 kDa。对CRP蛋白的生物信息学分析结果显示:CRP蛋白大小23.65 kDa、为亲水性蛋白;无跨膜结构域、无信号肽;蛋白二级结构主要由α螺旋与不规则卷曲构成,其中α-螺旋占比40%以上,结构较松散;同时成功构建了三级结构模型;CRP蛋白结构域分析表明含有1个功能结构域,属PRK11753超级家族;修饰位点及蛋白注释分析显示目的蛋白含20个磷酸化位点,与多个蛋白具有交互作用。结论:本研究利用基因工程方法成功获得了较高纯度肺炎克雷伯菌CRP蛋白,并通过生物信息学手段解析了其生物学特征,为肺炎克雷伯菌感染的临床治疗提供理论基础。
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关键词
肺炎克雷伯菌
CRP蛋白
转录因子
原核表达
生物信息学
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Keywords
Klebsiella pneumoniae
CRP protein
transcription factor
prokaryotic expression
bioinformatics
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分类号
TS201.3
[轻工技术与工程—食品科学]
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