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眼表宏基因组研究进展被引量：1: 1; 作者赵福新《眼科新进展》 CAS 北大核心 2021年第12期1191-1195,共5页; 眼表存在多种微生物,眼表微生物与眼表疾病(如角膜炎、角膜溃疡、结膜炎、干眼、睑板腺功能障碍等)的发生发展有关。早期主要通过传统的培养方法来鉴定微生物,但只有极少量的微生物可被培养并检出。宏基因组学可分析眼表所有微生物组成... 展开更多; 关键词眼表微生物宏基因组学高通量测序; 在线阅读下载PDF 职称材料

CRISPR/Cas9的应用及脱靶效应研究进展被引量：47: 2; 作者郑武谷峰《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1003-1010,共8页; CRISPR/Cas9基因编辑技术在生命科学领域掀起了一场全新的技术革命,该技术可以对基因组特定位点进行靶向编辑,包括缺失、插入、修复等。CRISPR/Cas9比锌指核酸酶(ZFNs)和转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)技术更易于操作,而且更高效。... 展开更多; 关键词基因组编辑 CRISPR/Cas9 脱靶效应 RNA; 在线阅读下载PDF 职称材料

基因组编辑技术研究前沿与挑战被引量：3: 3; 作者谷峰高彩霞 +1 位作者吴强张博《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期951-952,共2页; 人类对自然界生物的改造包括许多方面：通过动植物的育种尽可能获得高质、高产的农副产品来满足人类日益增长的物质生活需要；对抗生素、抗体、疫苗等生产菌株的基因组进行改造，为人类提供高质量的诊断和治疗用医药产品；通过合适的工... 展开更多; 关键词编辑技术基因组自然界微生物物质生活农副产品生产菌株医药产品; 在线阅读下载PDF 职称材料

小鼠胚胎大脑皮质活化和静息神经干细胞的初步分离与鉴定被引量：1: 4; 作者涂晓萌李莲莲 +1 位作者李雪罗祖强《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1396-1403,共8页; 目的:从小鼠胚胎大脑皮质中分离并鉴定静息和活化的神经干细胞。方法:通过流式细胞术,从胚胎14.5 d的小鼠大脑皮质中分选出大小不同的细胞团;利用免疫荧光技术检测神经干细胞标志物Pax6以及增殖标志物Ki67的表达变化;借助RT-qPCR分析两... 展开更多; 关键词神经干细胞静息活化细胞增殖流式细胞术; 在线阅读下载PDF 职称材料

CRISPR-Cas基因编辑系统升级:聚焦Cas蛋白和PAM 被引量：6: 5; 作者唐连超谷峰《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期236-249,共14页; 以CRISPR-Cas (clustered regularly interspaced short palindromic repeats and CRISPR associated proteins)系统为代表的基因编辑技术的出现极大地促进了人类改造自然界物种的能力。在医疗、工业、农业等多个研究领域,基因编辑技术... 展开更多; 关键词基因编辑 CRISPR-Cas系统 Cas蛋白 PAM 定向进化; 在线阅读下载PDF 职称材料

自闭症相关Foxp1突变体Y435X的功能研究被引量：1: 6; 作者涂晓萌郭志强李雪《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期961-969,共9页; 目的:对小鼠Foxp1 Y435X突变体(蛋白序列比对小鼠Y435X等同于人类Y439X)的表达和功能进行研究,探究Y435X突变体与自闭症谱系障碍发病机制之间的联系。方法:通过Western blot分析小鼠神经母细胞瘤N2a细胞中Y435X突变体的蛋白表达水平;利... 展开更多; 关键词自闭症谱系障碍 Foxp1 Y435X突变体 N2A细胞皮质神经元; 在线阅读下载PDF 职称材料

CRISPR-Cas9 对人类线粒体基因组微同源区切割后产生新生变异: 7; 作者王邦谷峰《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1221-1222,共2页; 线粒体是真核细胞的一种细胞器,其含有线粒体基因组(mtDNA,mitochondrial DNA),是细胞能量制造、多种信号转导及重要代谢物合成的中心。人类mtDNA长约16.6 kb,编码13个呼吸链所必需的蛋白以及24个蛋白翻译必需的RNA。人类mtDNA的突变会... 展开更多; 关键词神经退行性疾病重大疾病心血管疾病线粒体基因组呼吸链有氧呼吸氧自由基蛋白翻译; 在线阅读下载PDF 职称材料

Otx1诱导外向钾电流并抑制小鼠神经母细胞瘤细胞增殖: 8; 作者涂晓萌司祥李雪《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期1171-1177,共7页; 目的:探讨Otx1(orthodenticle homeobox 1)蛋白在调节电压门控性钾通道中的作用,并分析其对体外培养的小鼠神经细胞增殖的影响。方法:小鼠神经母细胞瘤N2a细胞中分别转染对照和过表达Otx1的质粒DNA,应用全细胞膜片钳记录N2a细胞中K^(+)... 展开更多; 关键词 Otx1蛋白电压门控性钾通道 N2A细胞细胞增殖; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名眼表宏基因组研究进展被引量：1: 1; 作者赵福新; 机构温州医科大学附属眼视光医院、眼视光学和视觉科学国家重点实验室; 出处《眼科新进展》 CAS 北大核心 2021年第12期1191-1195,共5页; 基金浙江省自然科学基金项目(编号LY18H120005)。; 文摘眼表存在多种微生物,眼表微生物与眼表疾病(如角膜炎、角膜溃疡、结膜炎、干眼、睑板腺功能障碍等)的发生发展有关。早期主要通过传统的培养方法来鉴定微生物,但只有极少量的微生物可被培养并检出。宏基因组学可分析眼表所有微生物组成、菌群多样性、代谢特征、毒力因子等,目前其已被广泛应用于眼表疾病的研究。本文主要对眼表感染性疾病宏基因组学的研究进行综述,以提高人们对宏基因组学在眼表感染性疾病应用中的认识。; 关键词眼表微生物宏基因组学高通量测序; Keywords ocular surface microbiome metagenomics high-throughput sequencing; 分类号 R77 [医药卫生—眼科]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名CRISPR/Cas9的应用及脱靶效应研究进展被引量：47: 2; 作者郑武谷峰; 机构温州医科大学附属眼视光医院; 出处《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1003-1010,共8页; 基金国家重点基础研究发展计划(973计划)项目(编号:2013CB967502) 国家自然科学基金项目(编号:81201181/H1818) +1 种基金温州医科大学人才启动项目(编号:QTJ 12011和KYQD141106)资助; 文摘 CRISPR/Cas9基因编辑技术在生命科学领域掀起了一场全新的技术革命,该技术可以对基因组特定位点进行靶向编辑,包括缺失、插入、修复等。CRISPR/Cas9比锌指核酸酶(ZFNs)和转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)技术更易于操作,而且更高效。CRISPR/Cas9系统中的向导RNA(Single guide RNA,sg RNA)是一段与目标DNA片段匹配的RNA序列,指导Cas9蛋白对基因组进行识别。研究发现,设计的sg RNA会与非靶点DNA序列错配,引入非预期的基因突变,即脱靶效应(Off-target effects)。脱靶效应严重制约了CRISPR/Cas9基因编辑技术的广泛应用。为了避免脱靶效应,研究者对影响脱靶效应的因素进行了系统研究并提出了许多降低脱靶效应的方法。文章总结了CRISPR/Cas9系统的应用及脱靶效应研究进展,以期为相关领域的工作提供参考。; 关键词基因组编辑 CRISPR/Cas9 脱靶效应 RNA; Keywords 向导RNA genome editing off-target effects sgRNA; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名基因组编辑技术研究前沿与挑战被引量：3: 3; 作者谷峰高彩霞吴强张博; 机构温州医科大学附属眼视光医院中国科学院遗传与发育生物学研究所上海交通大学系统生物医学研究院比较生物医学研究中心北京大学生命科学学院; 出处《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期951-952,共2页; 文摘人类对自然界生物的改造包括许多方面：通过动植物的育种尽可能获得高质、高产的农副产品来满足人类日益增长的物质生活需要；对抗生素、抗体、疫苗等生产菌株的基因组进行改造，为人类提供高质量的诊断和治疗用医药产品；通过合适的工具去定点修复人类自身的基因从而达到治疗疾病的目的可以说是“人定胜天”的终极目标。所有这些操作都涉及到基因组的改造或编辑。基因组编辑技术的研发为人类改造自然界生物（本文所指的自然界包括地球上所有的野生和改造的动植物、微生物及人类本身）提供了新的工具，使“传统的不能”变为“可能”。; 关键词编辑技术基因组自然界微生物物质生活农副产品生产菌株医药产品; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名小鼠胚胎大脑皮质活化和静息神经干细胞的初步分离与鉴定被引量：1: 4; 作者涂晓萌李莲莲李雪罗祖强; 机构温州医科大学附属眼视光医院眼视光学和视觉科学国家重点实验室温州医科大学附属第一医院病理科; 出处《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1396-1403,共8页; 基金国家自然科学基金资助项目(No.81571096) 浙江省自然科学青年基金资助项目(No.LQ14C090005)。; 文摘目的:从小鼠胚胎大脑皮质中分离并鉴定静息和活化的神经干细胞。方法:通过流式细胞术,从胚胎14.5 d的小鼠大脑皮质中分选出大小不同的细胞团;利用免疫荧光技术检测神经干细胞标志物Pax6以及增殖标志物Ki67的表达变化;借助RT-qPCR分析两组细胞中干细胞标志基因Pax6、Oct4、Sox2和Nanog的表达情况;采用流式细胞术及RT-qPCR分析两组细胞所处的周期;体外培养对大、小细胞组进行增殖能力检测。结果:免疫荧光结果表明,分离出的两类细胞均表达Pax6,且大细胞组Ki67为阳性,小细胞组为阴性。细胞周期分析显示,小细胞组G0/G1期比例高于大细胞组,而G2/M期为0,且cyclin A和cyclin B的表达显著低于大细胞组(P<0.05)。体外培养显示,相对于大细胞,小细胞形成的微球数量少,速度慢;大、小细胞形成的微球消化后,Pax6和Ki67染色均阳性,且阳性率无显著差异(P>0.05)。结论:大、小细胞团分别为活化和静息的神经干细胞。活化的干细胞具有较强的增殖能力,而静息干细胞自我复制与增殖能力较差。在体外培养条件下,静息的神经干细胞可以被转激活。; 关键词神经干细胞静息活化细胞增殖流式细胞术; Keywords Neural stem cells Quiescence Activation Cell proliferation Flow cytometry; 分类号 R741.02 [医药卫生—神经病学与精神病学] R363.2 [医药卫生—病理学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名CRISPR-Cas基因编辑系统升级:聚焦Cas蛋白和PAM 被引量：6: 5; 作者唐连超谷峰; 机构温州医科大学附属眼视光医院; 出处《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期236-249,共14页; 基金国家自然科学基金项目(编号81201181)资助。; 文摘以CRISPR-Cas (clustered regularly interspaced short palindromic repeats and CRISPR associated proteins)系统为代表的基因编辑技术的出现极大地促进了人类改造自然界物种的能力。在医疗、工业、农业等多个研究领域,基因编辑技术正在被广泛应用。Cas蛋白是CRISPR-Cas系统的功能蛋白,不同类型的Cas蛋白在其自身活性、识别位点、切割末端、RNA需求等方面具有不同的特性。PAM (protospacer adjacent motif)是靶位点附近的若干个碱基,对Cas蛋白识别靶序列至关重要,也是CRISPR-Cas系统发挥功效的关键特性之一。目前已有多种不同的PAM鉴定方法被报道。本文对Cas蛋白的寻找、Cas蛋白突变体筛选及PAM的确定方法(含PAM谱拓展)进行了综述,以期为新型基因编辑工具的发展和优化提供借鉴。; 关键词基因编辑 CRISPR-Cas系统 Cas蛋白 PAM 定向进化; Keywords gene editing CRISPR-Cas system Cas protein PAM directed evolution; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名自闭症相关Foxp1突变体Y435X的功能研究被引量：1: 6; 作者涂晓萌郭志强李雪; 机构温州医科大学附属眼视光医院; 出处《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期961-969,共9页; 基金国家自然科学基金资助项目(No.81571096) 浙江省自然科学青年基金资助项目(No.LQ14C090005) 温州市基础医疗卫生科技项目(No.Y20190134)。; 文摘目的:对小鼠Foxp1 Y435X突变体(蛋白序列比对小鼠Y435X等同于人类Y439X)的表达和功能进行研究,探究Y435X突变体与自闭症谱系障碍发病机制之间的联系。方法:通过Western blot分析小鼠神经母细胞瘤N2a细胞中Y435X突变体的蛋白表达水平;利用免疫荧光检测N2a细胞及原代小鼠大脑皮质神经元中Y435X突变体的亚细胞定位;采用小鼠子宫内胚胎基因转染技术,分析Y435X突变体对大脑皮质神经元迁移、最终定位及顶树突发育的影响。结果:Western blot结果显示,Y435X突变体在N2a细胞中产生大约56 kD的截短蛋白,与野生型Foxp1相比,表达量明显增加;免疫荧光结果说明,Y435X突变体在胞质中形成聚集体,并导致核膜皱缩;Y435X突变体改变了小鼠出生后大脑皮质神经元的正常定位及顶树突的生长方向。结论:Foxp1 Y435X突变体在皮质神经元中产生聚集体,并干扰出生后皮质神经元的正常定位及顶树突的生长。; 关键词自闭症谱系障碍 Foxp1 Y435X突变体 N2A细胞皮质神经元; Keywords Autism spectrum disorder Foxp1 Y435X mutant N2a cells Cortical neurons; 分类号 R741.02 [医药卫生—神经病学与精神病学] R749.94 [医药卫生—神经病学与精神病学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名CRISPR-Cas9 对人类线粒体基因组微同源区切割后产生新生变异: 7; 作者王邦谷峰; 机构温州医科大学附属眼视光医院; 出处《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1221-1222,共2页; 基金国家重点研发计划浙江省自然科学基金资助; 文摘线粒体是真核细胞的一种细胞器,其含有线粒体基因组(mtDNA,mitochondrial DNA),是细胞能量制造、多种信号转导及重要代谢物合成的中心。人类mtDNA长约16.6 kb,编码13个呼吸链所必需的蛋白以及24个蛋白翻译必需的RNA。人类mtDNA的突变会导致很多种重大疾病,比如神经退行性疾病、糖尿病、癌症、心血管疾病等[1]。因此,线粒体相关疾病是人类重大疾病的重要组成部分。细胞由于有氧呼吸作用产生的氧自由基簇(reactive oxygen species,ROS),无时无刻不在损伤mtDNA,进而诱发mtDNA突变。; 关键词神经退行性疾病重大疾病心血管疾病线粒体基因组呼吸链有氧呼吸氧自由基蛋白翻译; 分类号 R394 [医药卫生—医学遗传学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名Otx1诱导外向钾电流并抑制小鼠神经母细胞瘤细胞增殖: 8; 作者涂晓萌司祥李雪; 机构温州医科大学附属眼视光医院眼视光学和视觉科学国家重点实验室; 出处《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期1171-1177,共7页; 基金国家自然科学基金资助项目(No.81571096) 浙江省自然科学青年基金资助项目(No.LQ14C090005) 温州市基础医疗卫生科技项目(No.Y20190134)。; 文摘目的:探讨Otx1(orthodenticle homeobox 1)蛋白在调节电压门控性钾通道中的作用,并分析其对体外培养的小鼠神经细胞增殖的影响。方法:小鼠神经母细胞瘤N2a细胞中分别转染对照和过表达Otx1的质粒DNA,应用全细胞膜片钳记录N2a细胞中K^(+)依赖的外向电流;通过电生理技术,分析Otx1对K^(+)电流激活、失活和失活后恢复时间等参数的影响;通过细胞转染Otx1突变体,研究其对细胞增殖的影响。结果:过表达Otx1可增强电压依赖性外向K^(+)电流,降低半失活电位,并延迟外向电流失活后恢复;星形胶质细胞瘤相关的Otx1突变体K321T和Y320C所诱导的K^(+)电流幅度较低,与野生型Otx1相比,转染K321T或Y320C突变体的细胞增殖率升高;在N2a细胞表达Kv4.2α也导致外向K^(+)电流增强,并抑制N2a细胞的增殖。结论:Otx1可在体外培养的小鼠神经细胞中诱导电压依赖性K^(+)电流,而K^(+)电流可能参与细胞的增殖过程。; 关键词 Otx1蛋白电压门控性钾通道 N2A细胞细胞增殖; Keywords Otx1 protein Voltage-gated potassium channels N2a cells Cell proliferation; 分类号 R338.8 [医药卫生—人体生理学] R329.25 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	眼表宏基因组研究进展	赵福新	《眼科新进展》 CAS 北大核心	2021	1	在线阅读下载PDF 职称材料
2	CRISPR/Cas9的应用及脱靶效应研究进展	郑武谷峰	《遗传》 CAS CSCD 北大核心	2015	47	在线阅读下载PDF 职称材料
3	基因组编辑技术研究前沿与挑战	谷峰高彩霞吴强张博	《遗传》 CAS CSCD 北大核心	2015	3	在线阅读下载PDF 职称材料
4	小鼠胚胎大脑皮质活化和静息神经干细胞的初步分离与鉴定	涂晓萌李莲莲李雪罗祖强	《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心	2020	1	在线阅读下载PDF 职称材料
5	CRISPR-Cas基因编辑系统升级:聚焦Cas蛋白和PAM	唐连超谷峰	《遗传》 CAS CSCD 北大核心	2020	6	在线阅读下载PDF 职称材料
6	自闭症相关Foxp1突变体Y435X的功能研究	涂晓萌郭志强李雪	《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心	2021	1	在线阅读下载PDF 职称材料
7	CRISPR-Cas9 对人类线粒体基因组微同源区切割后产生新生变异	王邦谷峰	《遗传》 CAS CSCD 北大核心	2020	0	在线阅读下载PDF 职称材料
8	Otx1诱导外向钾电流并抑制小鼠神经母细胞瘤细胞增殖	涂晓萌司祥李雪	《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心	2021	0	在线阅读下载PDF 职称材料