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小鼠抗EV71衣壳蛋白VP1单克隆抗体的制备
被引量：
6
1
作者
周湧超
徐志刚
+3 位作者
杨澜
陈新宇
段志良
文金生
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第5期462-468,共7页
目的制备肠道病毒71型(EV71)衣壳蛋白VP1特异性小鼠单克隆抗体(mAb)并检测其特异性。方法合成编码EV71-VP1的基因并克隆入原核表达质粒p ET21a;采用重组表达的VP1免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合并采用ELISA筛选...
目的制备肠道病毒71型(EV71)衣壳蛋白VP1特异性小鼠单克隆抗体(mAb)并检测其特异性。方法合成编码EV71-VP1的基因并克隆入原核表达质粒p ET21a;采用重组表达的VP1免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合并采用ELISA筛选可分泌抗VP1的m Ab的杂交瘤细胞株;将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔,采用蛋白G亲和层析法从腹水中纯化mAb,并采用SDS-PAGE和Western blot法检测m Ab的纯度和特异性;EV71感染Vero细胞,采用间接免疫荧光细胞化学染色和Western blot法评估所制备m Ab识别EV71的能力。结果成功表达了EV71-VP1,制备出了4株杂交瘤细胞(6E、8D、9F和10C),杂交瘤细胞所分泌的小鼠m Ab均可识别EV71。结论成功制备了小鼠抗EV71衣壳蛋白VP1的m Ab。
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关键词
肠道病毒71型(EV71)
衣壳蛋白VP1
单克隆抗体(mAb)
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职称材料
结核分枝杆菌esxN特异性细胞表位的鉴定及其在肺结核诊断中的应用
被引量：
1
2
作者
徐志刚
李德周
+3 位作者
陈新宇
段志良
毛嘉媛
文金生
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第12期1686-1691,共6页
目的鉴定结核分枝杆菌早期分泌靶向抗原6(ESAT-6)样蛋白esxN特异性HLA-A~*0201限制性细胞毒性T细胞(CTL)表位并用于肺结核诊断。方法采用SYFPEITHI软件预测esxN中受HLA-A~*0201限制性的CTL表位并合成候选表位;采用主要组织相容性复合体(...
目的鉴定结核分枝杆菌早期分泌靶向抗原6(ESAT-6)样蛋白esxN特异性HLA-A~*0201限制性细胞毒性T细胞(CTL)表位并用于肺结核诊断。方法采用SYFPEITHI软件预测esxN中受HLA-A~*0201限制性的CTL表位并合成候选表位;采用主要组织相容性复合体(MHC)-肽复合物稳定性实验检测候选表位与HLA-A~*0201分子结合力;采用酶联免疫斑点实验(ELISPOT)研究候选表位在HLA-A~*0201转基因小鼠中的免疫原性;基于鉴定的CTL表位、ESAT-6和培养滤液蛋白10(CFP-10),采用ELISPOT检测肺结核患者体内表位及蛋白特异性CTL的水平。结果 6条候选CTL表位中,esxN_(15-24)(AMIRAQAASL)和esxN_(48-57)(VACQEFITQL)与HLA-A~*0201分子有较高结合力;候选表位免疫HLA-A~*0201转基因小鼠,esxN_(48-57)诱导产生可分泌γ干扰素(IFN-γ)的T细胞反应;在HLA-A~*0201阳性肺结核患者中检测到esxN_(15-24)、esxN_(48-57)、ESAT-6、CFP-10特异性分泌IFN-γ的T细胞;esxN_(15-24)、esxN_(48-57)诊断肺结核的敏感率与ESAT-6、CFP-10相近。结论从结核分枝杆菌esxN中鉴定出两条HLA-A~*0201限制性CTL表位,其有望用于辅助肺结核病的诊断。
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关键词
结核分枝杆菌
ESAT-6样蛋白esxN
HLA-A~＊
0201
表位
在线阅读
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职称材料
题名
小鼠抗EV71衣壳蛋白VP1单克隆抗体的制备
被引量：
6
1
作者
周湧超
徐志刚
杨澜
陈新宇
段志良
文金生
机构
温州医科大学基础医学院虫媒病毒研究所
温州医科大学
附属第二医院检验科
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第5期462-468,共7页
基金
国家自然科学基金(81501363)
浙江省自然科学基金(LY17C010004)
温州市科技计划项目(Y20150093)
文摘
目的制备肠道病毒71型(EV71)衣壳蛋白VP1特异性小鼠单克隆抗体(mAb)并检测其特异性。方法合成编码EV71-VP1的基因并克隆入原核表达质粒p ET21a;采用重组表达的VP1免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合并采用ELISA筛选可分泌抗VP1的m Ab的杂交瘤细胞株;将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔,采用蛋白G亲和层析法从腹水中纯化mAb,并采用SDS-PAGE和Western blot法检测m Ab的纯度和特异性;EV71感染Vero细胞,采用间接免疫荧光细胞化学染色和Western blot法评估所制备m Ab识别EV71的能力。结果成功表达了EV71-VP1,制备出了4株杂交瘤细胞(6E、8D、9F和10C),杂交瘤细胞所分泌的小鼠m Ab均可识别EV71。结论成功制备了小鼠抗EV71衣壳蛋白VP1的m Ab。
关键词
肠道病毒71型(EV71)
衣壳蛋白VP1
单克隆抗体(mAb)
Keywords
enterovirus 71（EV71）
capsid protein VP1
monoclonal antibody
分类号
Q813.2 [生物学—生物工程]
R512.5 [医药卫生—内科学]
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职称材料
题名
结核分枝杆菌esxN特异性细胞表位的鉴定及其在肺结核诊断中的应用
被引量：
1
2
作者
徐志刚
李德周
陈新宇
段志良
毛嘉媛
文金生
机构
温州医科大学基础医学院虫媒病毒研究所
宁波市第二医院肝病科
温州医科大学
附属第二医院检验科
温州医科大学
第二临床
医学院
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第12期1686-1691,共6页
基金
国家自然科学基金(81501363)
浙江省自然科学基金(LY17C010004)
温州市科技计划项目(Y20150093)
文摘
目的鉴定结核分枝杆菌早期分泌靶向抗原6(ESAT-6)样蛋白esxN特异性HLA-A~*0201限制性细胞毒性T细胞(CTL)表位并用于肺结核诊断。方法采用SYFPEITHI软件预测esxN中受HLA-A~*0201限制性的CTL表位并合成候选表位;采用主要组织相容性复合体(MHC)-肽复合物稳定性实验检测候选表位与HLA-A~*0201分子结合力;采用酶联免疫斑点实验(ELISPOT)研究候选表位在HLA-A~*0201转基因小鼠中的免疫原性;基于鉴定的CTL表位、ESAT-6和培养滤液蛋白10(CFP-10),采用ELISPOT检测肺结核患者体内表位及蛋白特异性CTL的水平。结果 6条候选CTL表位中,esxN_(15-24)(AMIRAQAASL)和esxN_(48-57)(VACQEFITQL)与HLA-A~*0201分子有较高结合力;候选表位免疫HLA-A~*0201转基因小鼠,esxN_(48-57)诱导产生可分泌γ干扰素(IFN-γ)的T细胞反应;在HLA-A~*0201阳性肺结核患者中检测到esxN_(15-24)、esxN_(48-57)、ESAT-6、CFP-10特异性分泌IFN-γ的T细胞;esxN_(15-24)、esxN_(48-57)诊断肺结核的敏感率与ESAT-6、CFP-10相近。结论从结核分枝杆菌esxN中鉴定出两条HLA-A~*0201限制性CTL表位,其有望用于辅助肺结核病的诊断。
关键词
结核分枝杆菌
ESAT-6样蛋白esxN
HLA-A~＊
0201
表位
Keywords
Mycobacterium tuberculosis
ESAT-6 protein esxN
HLA-A .0201 molecule
epitope
分类号
R521 [医药卫生—内科学]
R378.91 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
小鼠抗EV71衣壳蛋白VP1单克隆抗体的制备
周湧超
徐志刚
杨澜
陈新宇
段志良
文金生
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018
6
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
结核分枝杆菌esxN特异性细胞表位的鉴定及其在肺结核诊断中的应用
徐志刚
李德周
陈新宇
段志良
毛嘉媛
文金生
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017
1
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