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三七总皂苷通过ADAM10/Notch3信号通路干预大鼠PASMCs增殖
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作者 黄曼 白相书 +5 位作者 田云娜 徐俊鹏 王肖婷 张赛 袁琳波 王万铁 《中国临床药理学与治疗学》 北大核心 2025年第4期487-492,共6页
目的:探讨在野百合碱(MCT)作用下三七总皂苷(PNS)对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的干预作用及其机制。方法:体外培养的PASMCs随机分为正常对照(Control)组、野百合碱(MCT)组、三七总皂苷(PNS)组、敲低(M+Si ADAM10)组、敲低后处理(... 目的:探讨在野百合碱(MCT)作用下三七总皂苷(PNS)对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的干预作用及其机制。方法:体外培养的PASMCs随机分为正常对照(Control)组、野百合碱(MCT)组、三七总皂苷(PNS)组、敲低(M+Si ADAM10)组、敲低后处理(M+P+Si ADAM10)组、过表达(M+OE ADAM10)组和过表达后处理(M+P+OE ADAM10)组。造模结束后,采用CCK-8法测各组细胞活力;蛋白质免疫印迹(Western blot)法分别检测细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)、细胞神经源性基因座notch同源蛋白-3(Notch3)蛋白的表达情况。结果:在MCT作用下,PASMCs活力显著增强(P<0.05或P<0.01);0~400 mg/L的PNS对正常细胞活力无毒性,100 mg/L的PNS可显著抑制MCT诱导的细胞活力(P<0.01)。在敲低ADAM10后PASMCs活力显著减弱(P<0.01),PCNA蛋白表达明显下降(P<0.05),尤以M+P+Si ADAM10组为著;ADAM10、Notch3蛋白表达均显著下降(P<0.05或P<0.01),尤以M+P+Si ADAM10组为著。过表达ADAM10后PASMCs活力显著增强(P<0.01),PCNA蛋白表达明显增高(P<0.01),M+P+OE ADAM10组PCNA值稍偏高(P>0.05),ADAM10、Notch3蛋白表达均显著升高(P<0.05);而过表达ADAM10的同时使用PNS的PASMCs与敲低ADAM10的PASMCs相比,PCNA蛋白表达显著下降(P<0.01),ADAM10、Notch3蛋白表达不同程度降低(P>0.05)。结论:PNS可能通过抑制ADAM10/Notch3信号通路,减弱大鼠MCT诱导的PASMCs增殖。 展开更多
关键词 肺动脉平滑肌细胞 三七总皂苷 野百合碱 ADAM10/Notch3通路 大鼠
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3-溴丙酮酸通过抑制糖酵解缓解大鼠低氧性肺动脉高压
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作者 曹文傑 余彩茶 +7 位作者 黄曼 程缘 田云娜 徐俊鹏 汤程远 尤利益 胡纯 王万铁 《中国病理生理杂志》 北大核心 2025年第6期1200-1206,共7页
目的:探讨3-溴丙酮酸(3-bromopyruvic acid,3BP)缓解低氧诱导的大鼠动脉型肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)的作用及对糖酵解的干预效果。方法:正常SD大鼠通过置于常压、低氧建立PAH模型,干预1(常氧+3BP)组和干预2(低氧... 目的:探讨3-溴丙酮酸(3-bromopyruvic acid,3BP)缓解低氧诱导的大鼠动脉型肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)的作用及对糖酵解的干预效果。方法:正常SD大鼠通过置于常压、低氧建立PAH模型,干预1(常氧+3BP)组和干预2(低氧+3BP)组均腹腔内注射3BP(15 mg/kg),常氧组和低氧组给予等体积生理盐水,每组各6只,共处理21 d;采用右心导管法测量各组大鼠平均肺动脉压,并对大鼠肺门组织取材。分别称取右室(right ventricle,RV)和左心室加室间隔(left ventricle+interventricular septum,LV+S)的重量,并计算出RV/(LV+S)的比值,作为右心室肥大的指标;取右下肺组织,4%多聚甲醛-PBS固定,常规石蜡制片(厚度5μm),HE和Msaaon染色,显微镜观察并拍照,然后计算中膜厚度比和胶原纤维面积比;Western blot法检测各组肺门组织中糖酵解丙酮酸激酶2(pyruvate kinase isozyme type M2,PKM2)、丙酮酸脱氢酶(pyruvate dehydrogenase,PDH)及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)的表达情况;ELISA法检测各组肺门组织中白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)和IL-18的含量;乳酸试剂盒检测各组肺门组织中乳酸的含量。结果:与常氧组相比,干预1组各指标均没有明显差异(P>0.05);与低氧组比较,干预2组的PKM2蛋白表达下降(P<0.05),PDH蛋白表达显著上升(P<0.01),NLRP3蛋白表达下降(P<0.05),IL-18和IL-1β含量显著减少(P<0.05或P<0.01),肺血流动力学指标示右心室占比和肺动脉平均压均显著下降(P<0.05或P<0.01),肺动脉中膜厚度比和胶原面积均显著减少(P<0.01),乳酸含量显著减少(P<0.01)。结论:3BP可通过抑制糖酵解,减轻炎症反应,从而缓解大鼠低氧性肺动脉高压。 展开更多
关键词 3-溴丙酮酸 肺动脉高压 糖酵解 低氧 炎症
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GYY4137通过调控糖酵解-细胞焦亡抑制低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖 被引量:1
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作者 贾旭广 田云娜 +6 位作者 骆珍珍 黄曼 徐俊鹏 王肖婷 石璐 袁琳波 王万铁 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期2328-2335,共8页
目的:探讨外源性硫化氢供体GYY4137对低氧(hypoxia)诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs的作用及其机制。方法:取生长状态良好的大鼠PASMCs,在细胞密度为60%~70%时,饥饿处理24 h。随机将细胞分成4组:正常对照组、正常+GYY4137组、低氧组... 目的:探讨外源性硫化氢供体GYY4137对低氧(hypoxia)诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs的作用及其机制。方法:取生长状态良好的大鼠PASMCs,在细胞密度为60%~70%时,饥饿处理24 h。随机将细胞分成4组:正常对照组、正常+GYY4137组、低氧组和低氧+GYY4137组。通过CCK-8检测GYY4137对正常细胞无影响的安全浓度范围,并进一步检测GYY4137抑制低氧诱导的PASMCs增殖的最适浓度;EdU染色法检测各组PASMCs的增殖情况;Western blot检测各组PASMCs中增殖细胞核抗原(PCNA)及糖酵解和细胞焦亡相关蛋白的表达情况;乳酸试剂盒检测各组PASMCs的乳酸含量;免疫荧光法检测各组PASMCs中己糖激酶2(HK2)和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)蛋白表达情况;ELISA法检测各组PASMCs中白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18的含量。结果:GYY4137抑制低氧诱导的PAMSCs的有效浓度为100μmol/L(P<0.05)。与低氧组相比,低氧+GYY4137组PCNA蛋白表达显著下降(P<0.05),PAMSCs增殖显著减少(P<0.01),HK2和丙酮酸激酶M2(PKM2)蛋白表达均显著下降(P<0.05,P<0.01),丙酮酸脱氢酶(PDH)蛋白表达显著上升(P<0.05),乳酸含量显著降低(P<0.01),细胞焦亡相关蛋白表达显著下降(P<0.05,P<0.01),免疫荧光显示HK2与NLRP3表达显著降低(P<0.01),ELISA试剂盒检测结果显示IL-1β和IL-18含量显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论:GYY4137通过调控糖酵解-细胞焦亡抑制低氧诱导的大鼠PASMCs增殖。 展开更多
关键词 硫化氢 GYY4137 肺动脉高压 糖酵解 细胞焦亡 低氧
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三七总皂苷对低氧状态下大鼠PASMCs增殖、凋亡及Notch3通路的影响 被引量:3
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作者 白相书 黄曼 +4 位作者 田云娜 徐俊鹏 袁琳波 张赛 王万铁 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1765-1772,共8页
目的:探讨在低氧(hypoxia, Hypo)条件下三七总皂苷(Panax notoginseng saponins, PNS)对大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells, PASMCs)增殖和凋亡及其Notch3通路的影响。方法:以大鼠PASMCs为研究对象,饥饿24 ... 目的:探讨在低氧(hypoxia, Hypo)条件下三七总皂苷(Panax notoginseng saponins, PNS)对大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells, PASMCs)增殖和凋亡及其Notch3通路的影响。方法:以大鼠PASMCs为研究对象,饥饿24 h后将细胞分为6组:正常对照(control, Con)组、Hypo组、Hypo+PNS组、Hypo+DAPT{N-[N-(3,5-difluorophenacetyl)-L-alanyl]-S-phenylglycine t-butyl ester;Notch3通路抑制剂}组、Hypo+过表达Notch3(Hypo+Notch3)组和Hypo+Notch3+PNS组。Con组置于常氧环境(21%O_(2)、5%CO_(2)、74%N_(2))下培养48 h,其余5组预先进行相对应的干预后置于低氧条件(5%O_(2)、6%CO_(2)、89%N_(2))下培养48 h。造模结束后用细胞计数试剂盒8(Cell Counting Kit-8, CCK-8)测各组细胞活力;EdU染色法检测细胞增殖;TUNEL染色法检测细胞凋亡;RT-qPCR法检测PASMCs中Notch3、Hes-1、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)和caspase-3的mRNA表达水平;Western blot检测PASMCs中Notch3、Hes-1、PCNA和caspase-3的蛋白表达水平;通过在细胞中过表达Notch3,探讨PNS是否通过Notch3影响PASMCs的增殖。结果:EdU和TUNEL结果表明,与Con组相比,Hypo组PASMCs增殖能力增强,且细胞凋亡显著减少(P<0.01),Notch3、Hes-1和PCNA的mRNA和蛋白表达水平显著升高,而caspase-3的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05);给予PNS干预后,Notch3、Hes-1和PCNA的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05),而caspase-3的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05);给予Notch3通路抑制剂DAPT干预后,Notch3、Hes-1和PCNA的mRNA蛋白表达水平显著降低(P<0.05),而caspase-3的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。进一步结果显示,在PASMCs中过表达Notch3可逆转PNS对Hypo诱导的PASMCs增殖的抑制作用(P<0.05)。结论:PNS可通过降低Notch3表达,抑制Hypo诱导的大鼠PASMCs增殖并促进PASMCs凋亡。 展开更多
关键词 三七总皂苷 低氧 肺动脉平滑肌细胞 细胞增殖 细胞凋亡 Notch3蛋白
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