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HPV16 L1在整合型重组毕赤酵母中的表达及病毒样颗粒的纯化
1
作者
田晓娟
冯娟
+2 位作者
张丽芳
李文姝
薛向阳
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第5期479-483,共5页
目的构建可稳定表达HPV16L1的整合型重组毕赤酵母,并纯化自主组装成的HPV16L1病毒样颗粒(VLPs)。方法根据酵母密码子偏爱性优化HPV16L1基因并克隆到pPIC3.5K表达载体,构建pPIC3.5K/HPV16L1重组质粒;重组质粒经Bgl II酶切线性化后,电转化...
目的构建可稳定表达HPV16L1的整合型重组毕赤酵母,并纯化自主组装成的HPV16L1病毒样颗粒(VLPs)。方法根据酵母密码子偏爱性优化HPV16L1基因并克隆到pPIC3.5K表达载体,构建pPIC3.5K/HPV16L1重组质粒;重组质粒经Bgl II酶切线性化后,电转化至GS115菌株中,筛选HPV16L1重组毕赤酵母。阳性整合菌株甲醇诱导后,以HPV16L1单克隆抗体检测目的蛋白表达;采用肝素亲和层析法纯化HPV16L1VLPs并进行透射电镜观察。结果PCR、酶切和测序分析表明成功构建了pPIC3.5K/HPV16L1重组质粒。成功构建的HPV16L1重组毕赤酵母甲醇诱导后,Western blot证实重组酵母菌裂解产物存在HPV16L1目的蛋白。肝素亲和纯化后,透射电镜观察到了直径大约55nm的VLPs,其形态与HPV16天然病毒颗粒相似。结论利用整合型重组毕赤酵母表达系统成功表达了HPV16L1蛋白,并用肝素亲和纯化可快速获得结构完整的HPV16L1VLPs,为HPV16预防性疫苗的研制奠定基础。
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关键词
人乳头瘤病毒
主要衣壳蛋白L1
毕赤酵母表达系统
病毒样颗粒
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职称材料
HPV16型E7重组蛋白的表达及其多克隆抗体的制备
被引量：
8
2
作者
王冰冰
涂建欣
+7 位作者
吕艳
侯柏龙
刘巧琼
林晓云
陈韶
薛向阳
朱珊丽
张丽芳
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第2期167-170,175,共5页
目的制备人乳头瘤病毒(HPV)16型E7原核表达蛋白及其多克隆抗体。方法用PCR方法从宫颈癌组织中扩增HPV16 E7基因,克隆至pET21a(+)载体并构建pET21a(+)/HPV16 E7重组质粒,测序鉴定;将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-...
目的制备人乳头瘤病毒(HPV)16型E7原核表达蛋白及其多克隆抗体。方法用PCR方法从宫颈癌组织中扩增HPV16 E7基因,克隆至pET21a(+)载体并构建pET21a(+)/HPV16 E7重组质粒,测序鉴定;将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导后表达重组蛋白,用Ni-NTA亲和层析法纯化并经SDS-PAGE及Western blot分析鉴定;纯化的HPV16 E7重组蛋白免疫日本大耳白兔制备多克隆抗体,用ELISA检测多克隆抗体的效价,并用Western blot法及免疫荧光技术分析多克隆抗体的特异性。结果 HPV16 E7重组蛋白可通过原核表达系统进行表达和纯化;通过兔免疫后可制备特异性的多克隆IgG抗体,效价达1∶30 000;经Western blot法和免疫荧光染色结果证实兔多克隆抗体可特异性识别HPV16 E7蛋白。结论成功进行了HPV16 E7原核表达并制备了HPV16 E7兔多克隆抗体。
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关键词
人乳头瘤病毒
E7蛋白
多克隆抗体
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职称材料
题名
HPV16 L1在整合型重组毕赤酵母中的表达及病毒样颗粒的纯化
1
作者
田晓娟
冯娟
张丽芳
李文姝
薛向阳
机构
温州医科大学分子病毒与免疫研究所/微生物学与免疫学教研室
湖北省黄石市爱康医院
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第5期479-483,共5页
基金
国家自然科学基金项目(No.81001343)
浙江省自然科学基金项目(Y2100909)联合资助~~
文摘
目的构建可稳定表达HPV16L1的整合型重组毕赤酵母,并纯化自主组装成的HPV16L1病毒样颗粒(VLPs)。方法根据酵母密码子偏爱性优化HPV16L1基因并克隆到pPIC3.5K表达载体,构建pPIC3.5K/HPV16L1重组质粒;重组质粒经Bgl II酶切线性化后,电转化至GS115菌株中,筛选HPV16L1重组毕赤酵母。阳性整合菌株甲醇诱导后,以HPV16L1单克隆抗体检测目的蛋白表达;采用肝素亲和层析法纯化HPV16L1VLPs并进行透射电镜观察。结果PCR、酶切和测序分析表明成功构建了pPIC3.5K/HPV16L1重组质粒。成功构建的HPV16L1重组毕赤酵母甲醇诱导后,Western blot证实重组酵母菌裂解产物存在HPV16L1目的蛋白。肝素亲和纯化后,透射电镜观察到了直径大约55nm的VLPs,其形态与HPV16天然病毒颗粒相似。结论利用整合型重组毕赤酵母表达系统成功表达了HPV16L1蛋白,并用肝素亲和纯化可快速获得结构完整的HPV16L1VLPs,为HPV16预防性疫苗的研制奠定基础。
关键词
人乳头瘤病毒
主要衣壳蛋白L1
毕赤酵母表达系统
病毒样颗粒
Keywords
human papillomavirus （HPV）
major capsid protein L1
Pichia pastoris expression system
virus-like particles （VLPs）
分类号
R373 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
HPV16型E7重组蛋白的表达及其多克隆抗体的制备
被引量：
8
2
作者
王冰冰
涂建欣
吕艳
侯柏龙
刘巧琼
林晓云
陈韶
薛向阳
朱珊丽
张丽芳
机构
温州医科大学分子病毒与免疫研究所/微生物学与免疫学教研室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第2期167-170,175,共5页
基金
国家自然科学基金(81172463)
文摘
目的制备人乳头瘤病毒(HPV)16型E7原核表达蛋白及其多克隆抗体。方法用PCR方法从宫颈癌组织中扩增HPV16 E7基因,克隆至pET21a(+)载体并构建pET21a(+)/HPV16 E7重组质粒,测序鉴定;将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导后表达重组蛋白,用Ni-NTA亲和层析法纯化并经SDS-PAGE及Western blot分析鉴定;纯化的HPV16 E7重组蛋白免疫日本大耳白兔制备多克隆抗体,用ELISA检测多克隆抗体的效价,并用Western blot法及免疫荧光技术分析多克隆抗体的特异性。结果 HPV16 E7重组蛋白可通过原核表达系统进行表达和纯化;通过兔免疫后可制备特异性的多克隆IgG抗体,效价达1∶30 000;经Western blot法和免疫荧光染色结果证实兔多克隆抗体可特异性识别HPV16 E7蛋白。结论成功进行了HPV16 E7原核表达并制备了HPV16 E7兔多克隆抗体。
关键词
人乳头瘤病毒
E7蛋白
多克隆抗体
Keywords
human papillomavirus
E7 protein
polyclonal antibody
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
R711.32 [医药卫生—妇产科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
HPV16 L1在整合型重组毕赤酵母中的表达及病毒样颗粒的纯化
田晓娟
冯娟
张丽芳
李文姝
薛向阳
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
HPV16型E7重组蛋白的表达及其多克隆抗体的制备
王冰冰
涂建欣
吕艳
侯柏龙
刘巧琼
林晓云
陈韶
薛向阳
朱珊丽
张丽芳
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014
8
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