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Pax-8基因真核表达载体的构建及其功能的初步研究
被引量：
6
1
作者
周希
黄晓燕
+3 位作者
陈长曦
陈必成
龚永生
杨德业
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第3期430-436,共7页
目的:构建大鼠Pax-8基因全长序列的真核表达载体pcDNA3.1(+),并将重组质粒转染至心肌细胞系H9c2中进行表达,测定转染后Pax-8基因对心肌细胞增殖及凋亡的影响。方法:酶切pCMV sport6-Pax-8获得大鼠Pax-8全长基因,通过基因重组技术将其插...
目的:构建大鼠Pax-8基因全长序列的真核表达载体pcDNA3.1(+),并将重组质粒转染至心肌细胞系H9c2中进行表达,测定转染后Pax-8基因对心肌细胞增殖及凋亡的影响。方法:酶切pCMV sport6-Pax-8获得大鼠Pax-8全长基因,通过基因重组技术将其插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组质粒pcDNA3.1(+)-Pax-8。限制性酶切鉴定和DNA测序鉴定插入片段。将重组质粒经脂质体法转染至大鼠心肌细胞系H9c2细胞中,RT-PCR法及Western blotting法分别检测转染后Pax-8 mRNA及蛋白表达水平。CCK-8法检测细胞增殖;以血清饥饿诱导心肌细胞凋亡,同时进行Pax-8质粒转染,流式细胞仪检测细胞凋亡指数,West-ern blotting法检测活化caspase-3的表达。结果:成功构建了大鼠pcDNA3.1(+)-Pax-8真核表达载体,且证实转染后心肌细胞的Pax-8 mRNA及蛋白表达均明显高于空白对照组(P<0.05)及空质粒组(P<0.05)。转染Pax-8基因能提高心肌细胞的增殖能力(P<0.05),明显抑制血清饥饿引起的细胞凋亡(P<0.01),同时下调活化caspase-3的表达(P<0.01)。结论:通过基因重组技术成功使得Pax-8基因在心肌细胞中过表达。Pax-8基因可能通过促进心肌细胞增殖及抑制心肌细胞凋亡从而参与胚胎心脏发育的过程。
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关键词
基因
Pax-8
真核表达
细胞凋亡
细胞增殖
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职称材料
荧光染色技术检测细胞杀伤能力
被引量：
2
2
作者
周浩
陈必成
+1 位作者
杨丽红
周蒙滔
《实用医学杂志》
CAS
2008年第15期2565-2567,共3页
目的:用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酶(CFSE)及碘化丙锭(propidium iodide,PI)两种荧光染料标记方法检测小鼠脾细胞杀伤能力,并探讨其应用价值。方法:采用CFSE标记靶细胞,PI标记被杀伤细胞,并通过直接杀伤实验和双向杀伤实验验证方法...
目的:用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酶(CFSE)及碘化丙锭(propidium iodide,PI)两种荧光染料标记方法检测小鼠脾细胞杀伤能力,并探讨其应用价值。方法:采用CFSE标记靶细胞,PI标记被杀伤细胞,并通过直接杀伤实验和双向杀伤实验验证方法可行性。分离各组C57BL/6小鼠脾细胞作为攻击细胞,Balb/c小鼠脾细胞经5μmol/LCFSE染色后作为靶细胞。将攻击细胞与靶细胞按20∶1的比例混合,培养6h后用PI染色10min,经流式细胞术分析。比较Balb/c小鼠脾细胞致敏C57BL/6小鼠组(免疫组)和地塞米松处理组的脾细胞杀伤能力。结果:CFSE及PI两种荧光染色细胞可以在流式细胞仪上明显区分。CFSE和PI双阳性细胞是被杀伤的靶细胞。免疫组与地塞米松处理组的杀伤能力差异存在显著性(P<0.05)。结论:CFSE与PI两种荧光染料染色的杀伤实验方法操作简单、方便,有良好的应用价值。
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关键词
细胞毒性试验
免疫
染色与标记
CFSE
碘化丙锭
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职称材料
题名
Pax-8基因真核表达载体的构建及其功能的初步研究
被引量：
6
1
作者
周希
黄晓燕
陈长曦
陈必成
龚永生
杨德业
机构
温州
医学院
附属
第一
医院
心内科
温州医学院附属第一医院外科实验中心
温州
医学院
基础
学院
机能
实验
中心
出处
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第3期430-436,共7页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.30571050)
浙江省温州市科技发展计划资助项目(No.Y2006A017)
文摘
目的:构建大鼠Pax-8基因全长序列的真核表达载体pcDNA3.1(+),并将重组质粒转染至心肌细胞系H9c2中进行表达,测定转染后Pax-8基因对心肌细胞增殖及凋亡的影响。方法:酶切pCMV sport6-Pax-8获得大鼠Pax-8全长基因,通过基因重组技术将其插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组质粒pcDNA3.1(+)-Pax-8。限制性酶切鉴定和DNA测序鉴定插入片段。将重组质粒经脂质体法转染至大鼠心肌细胞系H9c2细胞中,RT-PCR法及Western blotting法分别检测转染后Pax-8 mRNA及蛋白表达水平。CCK-8法检测细胞增殖;以血清饥饿诱导心肌细胞凋亡,同时进行Pax-8质粒转染,流式细胞仪检测细胞凋亡指数,West-ern blotting法检测活化caspase-3的表达。结果:成功构建了大鼠pcDNA3.1(+)-Pax-8真核表达载体,且证实转染后心肌细胞的Pax-8 mRNA及蛋白表达均明显高于空白对照组(P<0.05)及空质粒组(P<0.05)。转染Pax-8基因能提高心肌细胞的增殖能力(P<0.05),明显抑制血清饥饿引起的细胞凋亡(P<0.01),同时下调活化caspase-3的表达(P<0.01)。结论:通过基因重组技术成功使得Pax-8基因在心肌细胞中过表达。Pax-8基因可能通过促进心肌细胞增殖及抑制心肌细胞凋亡从而参与胚胎心脏发育的过程。
关键词
基因
Pax-8
真核表达
细胞凋亡
细胞增殖
Keywords
Genes
Pax-8
Eukaryotic expression
Apoptosis
Cell proliferation
分类号
R363 [医药卫生—病理学]
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职称材料
题名
荧光染色技术检测细胞杀伤能力
被引量：
2
2
作者
周浩
陈必成
杨丽红
周蒙滔
机构
温州
医学院
附属
第一
医院
普
外科
温州医学院附属第一医院外科实验中心
温州
医学院
附属
第一
医院
实验
诊断
中心
出处
《实用医学杂志》
CAS
2008年第15期2565-2567,共3页
基金
温州科技发展计划项目(编号:Y2006A006)
文摘
目的:用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酶(CFSE)及碘化丙锭(propidium iodide,PI)两种荧光染料标记方法检测小鼠脾细胞杀伤能力,并探讨其应用价值。方法:采用CFSE标记靶细胞,PI标记被杀伤细胞,并通过直接杀伤实验和双向杀伤实验验证方法可行性。分离各组C57BL/6小鼠脾细胞作为攻击细胞,Balb/c小鼠脾细胞经5μmol/LCFSE染色后作为靶细胞。将攻击细胞与靶细胞按20∶1的比例混合,培养6h后用PI染色10min,经流式细胞术分析。比较Balb/c小鼠脾细胞致敏C57BL/6小鼠组(免疫组)和地塞米松处理组的脾细胞杀伤能力。结果:CFSE及PI两种荧光染色细胞可以在流式细胞仪上明显区分。CFSE和PI双阳性细胞是被杀伤的靶细胞。免疫组与地塞米松处理组的杀伤能力差异存在显著性(P<0.05)。结论:CFSE与PI两种荧光染料染色的杀伤实验方法操作简单、方便,有良好的应用价值。
关键词
细胞毒性试验
免疫
染色与标记
CFSE
碘化丙锭
Keywords
Cytotoxicity tests,immunologic Staining and labeling CFSE Propidium iodide
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Pax-8基因真核表达载体的构建及其功能的初步研究
周希
黄晓燕
陈长曦
陈必成
龚永生
杨德业
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011
6
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
荧光染色技术检测细胞杀伤能力
周浩
陈必成
杨丽红
周蒙滔
《实用医学杂志》
CAS
2008
2
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职称材料
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