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bFGF生物蛋白海绵体外生物学活性检测方法的建立及其稳定性评价被引量：1: 1; 作者焦悦王晓杰 +6 位作者张睿蔡敏倩李婷婷高丽昌王珊珊李海燕李校堃《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期171-174,共4页; 目的:建立碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)生物蛋白海绵体外生物学活性测定方法,观察bFGF生物蛋白海绵常温放置的稳定性。方法:bFGF生物蛋白海绵供试品融于稀释液中,离心后获得浸提液,以bFGF标准品为对照,与NIH3T3细胞共培养,MTT法检测bFG... 展开更多; 关键词碱性成纤维细胞生长因子生物蛋白海绵生物学活性; 在线阅读下载PDF 职称材料

重组人角质细胞生长因子-2对兔碱烧伤模型角膜上皮损伤的治疗作用被引量：7: 2; 作者王晓杰周鑫 +6 位作者田海山马吉胜焦悦张睿蔡敏倩钱焕文李校堃《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期625-628,F0002,共5页; 目的:研究外用旋滴重组人角质细胞生长因子-2(KGF-2)对兔碱烧伤模型角膜上皮损伤的治疗作用,为角膜上皮损伤的早期治疗探索新方法。方法:制备兔角膜碱烧伤模型,60只日本大耳白兔随机分为碱烧伤对照组和KGF-2组(25mg·mL-1)(n=30);... 展开更多; 关键词角质细胞生长因子-2 角膜上皮损伤修复; 在线阅读下载PDF 职称材料

重组截短型人角质细胞生长因子-1的表达及纯化被引量：3: 3; 作者邓林刘孝菊 +5 位作者龚守良王会岩田海山王晓杰马吉胜李校堃《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期629-633,共5页; 目的:构建高效表达N端缺失的23个氨基酸重组人角质细胞生长因子1(rhKGF1dest23)的基因工程菌,为治疗放化疗后口腔黏膜炎的新药开发提供实验数据。方法:利用PCR方法分别以pET3c-hKGF1及sumo-EGF为模板合成N端缺失的23个氨基酸rhKGF1dest2... 展开更多; 关键词高效表达重组截短人角质细胞生长因子-1 纯化; 在线阅读下载PDF 职称材料

重组截短型人角质细胞生长因子1在昆虫细胞中的表达被引量：2: 4; 作者薛萍朱小静 +4 位作者刘孝菊李一兰南佳姜潮李校堃《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期633-639,共7页; 目的:探讨重组截短型人角质细胞生长因子1(rhKGF1D23)蛋白在昆虫细胞中表达的可行性,为rhKGF1D23蛋白的生产提供新的途径。方法:PCR法扩增昆虫偏爱密码子优化截短序列kgf1d23亚克隆到pFastbac载体。在辅助质粒的作用下,pFastBac-kgf1d2... 展开更多; 关键词角质细胞生长因子1 截短突变 sf-9细胞杆状病毒系统; 在线阅读下载PDF 职称材料

H-1152对兔眼眼压及小梁组织超微结构的影响被引量：1: 5; 作者王云孙静静 +5 位作者蔡素萍邱敬华余曼曹桂群刘旭阳李校堃《眼科研究》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期453-456,共4页; 目的观察H-1152对兔眼眼压以及小梁组织超微结构的影响,并探讨其作用机制。方法观察兔眼点用H-1152前后眼压变化,并用透射电镜分析兔眼小梁组织超微结构的变化。结果H-1152能明显降低兔眼眼压。局部点用10mmol/L的H-1152(50μL)后1～6h... 展开更多; 关键词 H-1152 青光眼眼压小梁网; 在线阅读下载PDF 职称材料

GST与FGF23 C末端71个氨基酸融合蛋白的表达、纯化及其免疫原性: 6; 作者陈玉斌刘孝菊 +5 位作者姚娜孙常文田海山张键刘敏李校堃《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期225-229,共5页; 目的:构建和表达谷胱甘肽-S-转移酶(GST)与成纤维细胞生长因子23(FGF-23)的活性片段-C末端71个氨基酸(FGF23CTR)融合蛋白的基因工程菌,并检测融合蛋白的免疫原性,为制备FGF23特异性单克隆抗体以及研发慢性肾病诊断试剂提供实验数据。方... 展开更多; 关键词成纤维细胞生长因子23 免疫原性基因工程菌; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名bFGF生物蛋白海绵体外生物学活性检测方法的建立及其稳定性评价被引量：1: 1; 作者焦悦王晓杰张睿蔡敏倩李婷婷高丽昌王珊珊李海燕李校堃; 机构吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心吉林农业大学中药材学院温州医学院药学院浙江省生物技术制药工程重点实验室哈尔滨沛奇隆生物制药有限公司; 出处《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期171-174,共4页; 基金国家863计划项目资助课题(2007AA100503) 教育部科技创新工程重大项目-培养资金项目资助课题 +1 种基金吉林省科技厅科技发展计划项目资助课题(20070922); 文摘目的:建立碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)生物蛋白海绵体外生物学活性测定方法,观察bFGF生物蛋白海绵常温放置的稳定性。方法:bFGF生物蛋白海绵供试品融于稀释液中,离心后获得浸提液,以bFGF标准品为对照,与NIH3T3细胞共培养,MTT法检测bFGF生物蛋白海绵浸提液对NIH3T3细胞的促增值作用,用bFGF标准品计算bFGF生物蛋白海绵的相对百分效价,对该方法进行验证;以常温储存2、3和4年的bFGF生物蛋白海绵为供试品,以低温储存30d的bFGF生物蛋白海绵为标准对照,以不含bFGF生物蛋白海绵和bFGF的培养液为空白对照,测定各组生物学活性效价,比较不同储存时间bFGF生物蛋白海绵的体外生物学活性效价的稳定性。结果:bFGF生物蛋白海绵供试品浸提液随浓度增加其吸光度(A值)增高,即NIH3T3细胞增殖作用增加,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01),与bFGF标准品比较差异无统计学意义(P>0.05);bFGF标准品和bFGF生物蛋白海绵在该方法中均存在量效关系,且符合四参数方程式:y=(A-D)∕[1+(X/C)B]+D;常温条件下储存2、3和4年生物蛋白海绵体与低温储存30d比较,其生物学活性效价(U.mL-1)下降率分别为0.5%、0.6%和0.8%,均低于15%的国家标准。结论:bFGF生物蛋白海绵在体外能够促进NIH3T3细胞增殖,具有良好生物学活性;应用NIH3T3细胞检测bFGF生物蛋白海绵体外生物学活性可作为常规检测方法;bFGF生物蛋白海绵常温储存2～4年稳定性良好。; 关键词碱性成纤维细胞生长因子生物蛋白海绵生物学活性; Keywords basic fibroblast growth factor biologic protein sponge biological activitydrug; 分类号 R915.2 [医药卫生—微生物与生化药学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名重组人角质细胞生长因子-2对兔碱烧伤模型角膜上皮损伤的治疗作用被引量：7: 2; 作者王晓杰周鑫田海山马吉胜焦悦张睿蔡敏倩钱焕文李校堃; 机构吉林大学公共卫生学院卫生部放射生物学重点实验室吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心温州医学院药学院生物技术制药工程重点实验室军事医学科学院放射与辐射医学研究所; 出处《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期625-628,F0002,共5页; 基金科技部"重大新药创制"科技重大专项基金资助课题(2008ZX09101-057) 科技型中小企业技术创新基金资助课题(09C26212203306) +1 种基金吉林省长春市企业科技特派员行动计划项目资助课题(09KT03); 文摘目的:研究外用旋滴重组人角质细胞生长因子-2(KGF-2)对兔碱烧伤模型角膜上皮损伤的治疗作用,为角膜上皮损伤的早期治疗探索新方法。方法:制备兔角膜碱烧伤模型,60只日本大耳白兔随机分为碱烧伤对照组和KGF-2组(25mg·mL-1)(n=30);各组日本大耳白兔于造模后以50μL药物滴眼,每日3次。7和14d裂隙灯观察角膜烧伤面积以及角膜新生血管的形成,MTT法检测角膜上皮细胞活性,免疫组化方法进行病理组织学检查。结果:碱烧伤后7和14d,KGF-2组角膜烧伤面积小于碱烧伤对照组,差异有显著性(P<0.01)。碱烧伤对照组7d角膜新生血管发生率为17.50%,KGF-2组为7.32%;碱烧伤对照组14d角膜新生血管发生率为41.67%,KGF-2组为32.50%。MTT检测结果显示:碱烧伤后7和14d,KGF-2组492nm吸光度与碱烧伤对照组比较差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。碱烧伤后7和14d,病理切片HE染色显示:对照组角膜基质水肿,板层纤维排列松散、紊乱,炎症反应反复出现,角膜上皮层变薄,部分脱落,角膜内皮层内侧有大量成纤维细胞增生;KGF-2组碱烧伤后7d,角膜上皮细胞生长良好,基质轻度增厚,无明显的炎症反应;碱烧伤后14d,未出现炎症复发,角膜上皮细胞生长良好,排列整齐,角膜基质仅有轻度增厚。结论:外用旋滴25mg·mL-1KGF-2可加速角膜上皮损伤的恢复,减轻角膜烧伤的各种炎症反应症状;减轻角膜基质水肿和纤维化,同时KGF-2亦表现出显著的抑制角膜新生血管形成的作用;KGF-2有可能成为另一个对角膜上皮损伤具有重要调控作用的生长因子。; 关键词角质细胞生长因子-2 角膜上皮损伤修复; Keywords keratinocyte growth factor-2 corneal epithelium wound healing; 分类号 R772.2 [医药卫生—眼科]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名重组截短型人角质细胞生长因子-1的表达及纯化被引量：3: 3; 作者邓林刘孝菊龚守良王会岩田海山王晓杰马吉胜李校堃; 机构吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心吉林农业大学生命科学学院吉林大学公共卫生学院卫生部放射生物学重点实验室温州医学院药学院生物技术制药工程重点实验室; 出处《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期629-633,共5页; 基金科技部重大新药创制项目资助课题(2009ZX09102); 文摘目的:构建高效表达N端缺失的23个氨基酸重组人角质细胞生长因子1(rhKGF1dest23)的基因工程菌,为治疗放化疗后口腔黏膜炎的新药开发提供实验数据。方法:利用PCR方法分别以pET3c-hKGF1及sumo-EGF为模板合成N端缺失的23个氨基酸rhKGF1dest23及sumo基因片段,构建4种原核表达载体pET22b-rhKGF1dest23、pET22b-sumo-rhKGF1dest23、pET3c-rhKGF1dest23和pET3c-sumo-rhKGF1dest23,分别转化原核表达宿主菌Rosetta(DE3)plysS、BL21(DE3)、BL21(DE3)StarplysS、origima(DE3)和BL21AI,筛选rhKGF1dest23蛋白表达的最佳质粒与宿主菌组合。CM离子交换和肝素亲和层析法纯化rhKGF1dest23蛋白,Westernblotting法鉴定rhKGF1dest23蛋白。结果:pET22b-rhKGF1dest23质粒与BL21AI宿主菌为最佳组合表达,经IPTG与阿拉伯糖诱导,SDS-PAGE电泳后表明目的蛋白大部分以可溶性形式存在,约占菌体总蛋白的10%,经CM和肝素两步纯化后rhKGF1dest23蛋白纯度为95%以上,Westernblotting法鉴定为rhKGF1dest23蛋白。结论:成功构建表达人KGF1dest23重组蛋白的基因工程菌,经IPTG与阿拉伯糖诱导,CM弱阳离子与肝素亲合层析后,得到了纯化的rhKGF1dest23蛋白。; 关键词高效表达重组截短人角质细胞生长因子-1 纯化; Keywords high expression recombinant truncated human keratinocyte growth factor-1 purification; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名重组截短型人角质细胞生长因子1在昆虫细胞中的表达被引量：2: 4; 作者薛萍朱小静刘孝菊李一兰南佳姜潮李校堃; 机构吉林农业大学生命科学学院吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心温州医学院药学院浙江省生物技术与制药工程重点实验室吉林大学第二医院检验科吉林大学白求恩医学院生物化学教研室; 出处《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期633-639,共7页; 基金国家863计划项目资助课题(2010AA100069); 文摘目的:探讨重组截短型人角质细胞生长因子1(rhKGF1D23)蛋白在昆虫细胞中表达的可行性,为rhKGF1D23蛋白的生产提供新的途径。方法:PCR法扩增昆虫偏爱密码子优化截短序列kgf1d23亚克隆到pFastbac载体。在辅助质粒的作用下,pFastBac-kgf1d23载体Tn7片段转座到Bacmid中mini-attTn7位点,得到穿梭载体Bacmid-kgf1d23,并通过脂质体法转染sf-9细胞得到杆状病毒P1。继续转染细胞扩增病毒并提高病毒滴度,蛋白表达分析从P3代病毒转染细胞开始,收集细胞超声裂解后进行纯化,MTT法检测纯化后目的蛋白生物活性。结果:昆虫偏好密码子改造的kgf1d23基因构建进转移载体pFastBac-kgf1d23和穿梭载体Bacmid-kgf1d23载体中。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白在60h后开始大量表达,优化的收获蛋白时间在84～96h;利用肝素亲和层析和SP阳离子交换层析可以去除90%以上的杂蛋白。纯化的rhKGF1D23蛋白在0.3～25.0μg.L-1时,随浓度的增加HaCat细胞的促有丝分裂能力增强,在25.0μg.L-1时达到平台期。结论:重组截短型角质细胞生长因子rhKGF1D23蛋白在昆虫细胞中得到表达,保持其特有的肝素亲和特性,并具有免疫原性及细胞生物学活性。; 关键词角质细胞生长因子1 截短突变 sf-9细胞杆状病毒系统; Keywords keratinocyte growth factor 1 truncated mutation sf-9 cells baculovirial expression system; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名H-1152对兔眼眼压及小梁组织超微结构的影响被引量：1: 5; 作者王云孙静静蔡素萍邱敬华余曼曹桂群刘旭阳李校堃; 机构温州医学院药学院浙江省生物技术制药工程重点实验室四川大学华西医院眼科; 出处《眼科研究》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期453-456,共4页; 基金国家自然科学基金资助(30772379); 文摘目的观察H-1152对兔眼眼压以及小梁组织超微结构的影响,并探讨其作用机制。方法观察兔眼点用H-1152前后眼压变化,并用透射电镜分析兔眼小梁组织超微结构的变化。结果H-1152能明显降低兔眼眼压。局部点用10mmol/L的H-1152(50μL)后1～6h的眼压较对照组降低(P<0.05)。点药后2h下降至最低点,较处理前降低50.6%。与对照组相比,点药后1～3h眼压下降最明显。电镜下可见小梁间间隙增大,小梁组织中细胞外基质(ECM)减少。结论H-1152可有效降低兔眼眼压,其作用机制可能是通过降解小梁通道的ECM,改变小梁通道的构型,使房水排出阻力减少,眼压降低。H-1152有望成为治疗青光眼的有效药物。; 关键词 H-1152 青光眼眼压小梁网; Keywords Rho-kinase inhibitor glaucoma intraocular pressure trabecular meshwork; 分类号 R775 [医药卫生—眼科]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名GST与FGF23 C末端71个氨基酸融合蛋白的表达、纯化及其免疫原性: 6; 作者陈玉斌刘孝菊姚娜孙常文田海山张键刘敏李校堃; 机构吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心吉林农业大学生命科学学院吉林大学公共卫生学院卫生部放射生物学重点实验室温州医学院药学院生物技术制药工程重点实验室; 出处《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期225-229,共5页; 基金国家863计划资助课题(2011AA02A113) 浙江省温州市第4期科技项目资助课题(Y20100181) 浙江省温州市科技局项目资助课题(Y20100184); 文摘目的:构建和表达谷胱甘肽-S-转移酶(GST)与成纤维细胞生长因子23(FGF-23)的活性片段-C末端71个氨基酸(FGF23CTR)融合蛋白的基因工程菌,并检测融合蛋白的免疫原性,为制备FGF23特异性单克隆抗体以及研发慢性肾病诊断试剂提供实验数据。方法:以质粒pET22b-fgf23为模板利用PCR方法扩增FGF23CTR的基因片段,将该基因与表达载体pGEX-4T-1连接后转化至BL21宿主细胞中,通过IPTG诱导获得可溶性表达,将GST-FGF23CTR融合蛋白用Glutathione Sepharose4B亲和层析法纯化,Western blotting法鉴定蛋白。该融合蛋白免疫Balb/C小鼠制备抗血清,采用ELISA法检测抗血清的效价。结果:构建GST-FGF23CTR融合蛋白的表达载体,纯化后得到纯度90%以上的融合蛋白,并与商品化的FGF23多克隆抗体呈阳性反应,ELISA法证实融合蛋白具有良好的免疫原性。结论:成功构建GST-FGF23CTR融合蛋白基因工程菌,并纯化得到具有良好免疫原性的融合蛋白,以此方法制备的抗原可用于FGF23特异性单克隆抗体的制备和FGF23生物学功能研究。; 关键词成纤维细胞生长因子23 免疫原性基因工程菌; Keywords fibroblast growth factor 233 immunogenicity genetic engineering bacteria; 分类号 Q786 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	bFGF生物蛋白海绵体外生物学活性检测方法的建立及其稳定性评价	焦悦王晓杰张睿蔡敏倩李婷婷高丽昌王珊珊李海燕李校堃	《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2011	1	在线阅读下载PDF 职称材料
2	重组人角质细胞生长因子-2对兔碱烧伤模型角膜上皮损伤的治疗作用	王晓杰周鑫田海山马吉胜焦悦张睿蔡敏倩钱焕文李校堃	《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2010	7	在线阅读下载PDF 职称材料
3	重组截短型人角质细胞生长因子-1的表达及纯化	邓林刘孝菊龚守良王会岩田海山王晓杰马吉胜李校堃	《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2010	3	在线阅读下载PDF 职称材料
4	重组截短型人角质细胞生长因子1在昆虫细胞中的表达	薛萍朱小静刘孝菊李一兰南佳姜潮李校堃	《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2012	2	在线阅读下载PDF 职称材料
5	H-1152对兔眼眼压及小梁组织超微结构的影响	王云孙静静蔡素萍邱敬华余曼曹桂群刘旭阳李校堃	《眼科研究》 CAS CSCD 北大核心	2009	1	在线阅读下载PDF 职称材料
6	GST与FGF23 C末端71个氨基酸融合蛋白的表达、纯化及其免疫原性	陈玉斌刘孝菊姚娜孙常文田海山张键刘敏李校堃	《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2012	0	在线阅读下载PDF 职称材料