蝉拟青霉总多糖对免疫抑制大鼠组织器官免疫功能调节的实验研究 被引量：12

1

作者 金丽琴 吕建新 +2 位作者 杨介钻 李东 李安乐 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期881-884,共4页

目的:观察蝉拟青霉总多糖对免疫抑制大鼠组织器官免疫功能调节和自由基代谢的影响,探讨其对免疫抑制大鼠组织器官的免疫调节和抗衰老作用。方法:以速率法在全自动生化分析仪上测定乳酸脱氢酶(LDH)活力;以鸟氨酸的生成判断精氨酸酶(argin... 目的:观察蝉拟青霉总多糖对免疫抑制大鼠组织器官免疫功能调节和自由基代谢的影响,探讨其对免疫抑制大鼠组织器官的免疫调节和抗衰老作用。方法:以速率法在全自动生化分析仪上测定乳酸脱氢酶(LDH)活力;以鸟氨酸的生成判断精氨酸酶(arginase)的活力;以硫代巴比妥酸-醋酸法测定脂质过氧化物(LPO)含量;以Ell-man试剂测定还原型谷胱甘肽(GSH)水平。结果:蝉拟青霉总多糖使环磷酰胺所致免疫抑制大鼠组织细胞内LDH(肾、胸腺)、arginase(肝、脾、胸腺)活力升高,具有显著差异(均P<0.01);使LPO(肾、脾、胸腺)的含量下降(P<0.05或P<0.01);使环磷酰胺所致的肝、脾内低下的还原型谷胱甘肽(GSH)升高(均P<0.01)。结论:蝉拟青霉总多糖能增强免疫抑制大鼠组织器官的免疫功能和加速自由基的代谢。 展开更多

关键词 拟青霉 多糖类 免疫抑制 过氧化脂质类 谷胱甘肽

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细脚拟青霉多糖体外抗肿瘤作用及其机制的实验研究 被引量：13

2

作者 左江成 吕建新 +3 位作者 金丽琴 邹立林 李东 明镇寰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期237-241,共5页

目的:通过观察细脚拟青霉多糖的体外抗肿瘤活性,初步探讨其作用机制。方法:采用水提,乙醇沉淀,DEAE-纤维素和Sephadex G-100柱层析分离纯化多糖PTPS-I;以PTPS-I和经PTPS-I刺激培养的人外周血单个核细胞(MNC)的条件培养基(PTPS-I-MNC-CM... 目的:通过观察细脚拟青霉多糖的体外抗肿瘤活性,初步探讨其作用机制。方法:采用水提,乙醇沉淀,DEAE-纤维素和Sephadex G-100柱层析分离纯化多糖PTPS-I;以PTPS-I和经PTPS-I刺激培养的人外周血单个核细胞(MNC)的条件培养基(PTPS-I-MNC-CM)作用于体外培养的红白血病细胞K562、喉癌细胞Hep2和肝癌细胞SMMC-7721,观察PTPS-I和PTPS-I-MNC-CM对其增殖活性的影响;用cell counting kit-8(CCK-8)检测MNC的增殖活性;以荧光定量PCR检测MNC中TNF-α和IL-6 mRNA的表达。结果:PTPS-I-MNC-CM能抑制K562,Hep2和SMMC-7721细胞的增殖(均为P<0.01);PTPS-I不能抑制肿瘤细胞的增殖(P>0.05),没有显现直接的细胞毒作用。PTPS-I能促进MNC的增殖(P<0.01)和增强TNF-α和IL-6 mRNA的表达(P<0.05,P<0.01)。结论:PTPS-I具有免疫调节活性,通过免疫调节发挥抗肿瘤作用。 展开更多

关键词 拟青霉 多糖类 抗肿瘤活性 免疫力

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HLA-A、B、DRB1等位基因多态性与中国南方鼻咽癌的相关性研究 被引量：5

3

作者 曾学辉 肖露露 +2 位作者 李疆 吕建新 王小宁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期819-820,823,共3页

目的:探讨南方人群中鼻咽癌(NPC)易感性与HLA多态性之间的关联。方法:应用聚合酶链反应/序列特异性引物(PCR-SSP)方法对35例NPC患者及60例正常对照进行HLA-A、HLA-B及DRB1基因分型。结果:NPC患者的HLA-A*02、HLA-B*58及HLA-DRB1*03基因... 目的:探讨南方人群中鼻咽癌(NPC)易感性与HLA多态性之间的关联。方法:应用聚合酶链反应/序列特异性引物(PCR-SSP)方法对35例NPC患者及60例正常对照进行HLA-A、HLA-B及DRB1基因分型。结果:NPC患者的HLA-A*02、HLA-B*58及HLA-DRB1*03基因位点的频率高于正常对照组,HLA-B*40基因位点的频率低于正常对照组。结论:HLA-A*02、HLA-B*58及HLA-DRB1*03可能是NPC的易感性基因,HLA-B*40可能是NPC的保护性基因。 展开更多

关键词 鼻咽癌 人类白细胞抗原 多态性 等位基因

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荧光定量PCR用于重组杆状病毒鉴定及病毒滴度检测的研究 被引量：3

4

作者 沈波 孟哲峰 +1 位作者 彭颖 吕建新 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期853-855,共3页

目的:建立一种高效、简便的荧光实时定量PCR方法,用于重组杆状病毒鉴定及病毒滴度的检测.方法:利用Bac-to-Bac载体系统在E.coli菌株DH10 Bac中构建重组杆状病毒穿梭质粒(Bacmid)和在昆虫细胞中构建含人IL-18基因的重组杆状病毒,纯化的重... 目的:建立一种高效、简便的荧光实时定量PCR方法,用于重组杆状病毒鉴定及病毒滴度的检测.方法:利用Bac-to-Bac载体系统在E.coli菌株DH10 Bac中构建重组杆状病毒穿梭质粒(Bacmid)和在昆虫细胞中构建含人IL-18基因的重组杆状病毒,纯化的重组Bacmid作为PCR检测的标准模板,由昆虫细胞中收获的病毒母液用于空斑测定和病毒DNA提取.以10倍梯度稀释的重组Bacmid作为标准模板,进行荧光定量PCR扩增IL18基因片段并绘制标准曲线,然后以提取的重组杆状病毒DNA作为模板,采用同样体系进行实时PCR反应检测.同时,以琼脂糖空斑法测定病毒母液的滴度.结果:成功构建了重组杆状病毒并建立了病毒滴度的实时荧光PCR检测方法.运用标准模板进行的PCR反应显示该方法的线形范围为101～108拷贝,病毒母液的DNA拷贝浓度(vg/ml)值约为空斑检测的滴度pfu/ml值的10倍.结论:荧光定量PCR方法可灵敏快速地鉴定重组杆状病毒,并在较大的线性范围内检测重组杆状病毒滴度,较之空斑法更准确地反映了重组杆状病毒的实际数量. 展开更多

关键词 荧光定量PCR 重组病毒鉴定 病毒滴度

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用于肿瘤靶向治疗的EGF-IL-18融合蛋白在昆虫细胞中的表达及活性鉴定 被引量：2

5

作者 孟哲峰 彭颖 +1 位作者 沈波 吕建新 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期113-115,117,共4页

目的 :制备能用于肿瘤靶向治疗的重组表皮生长因子受体干扰序列 白细胞介素 18(EGF-IL-18)融合蛋白 ,并鉴定其生物学活性。方法 :利用Bac-to-Bac表达系统在昆虫细胞Sf9中表达融合蛋白 ,用离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤层析等方法纯... 目的 :制备能用于肿瘤靶向治疗的重组表皮生长因子受体干扰序列 白细胞介素 18(EGF-IL-18)融合蛋白 ,并鉴定其生物学活性。方法 :利用Bac-to-Bac表达系统在昆虫细胞Sf9中表达融合蛋白 ,用离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤层析等方法纯化表达产物 ,并以IFN-γ诱导实验和EGFR竞争结合实验初步评价融合蛋白的生物活性。结果 :经SDS-PAGE和Westernblot检测 ,Sf9细胞中表达的重组蛋白与预期的EGF-IL-18融合蛋白分子量一致 ,纯化后融合蛋白具有较高纯度和良好的免疫原性。IFN -γ诱导实验和EGFR竞争结合实验显示 ,该融合蛋白具有肿瘤导向性和抗肿瘤活性。结论 :成功表达并纯化了具有肿瘤导向性的抗肿瘤蛋白———EGF-IL-18融合蛋白 ,该蛋白具有较好的肿瘤导向性和抗肿瘤活性 。 展开更多

关键词 表皮生长因子-白细胞介素18融合蛋白 昆虫细胞 肿瘤靶向治疗

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大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药谱及其产ESBLs的研究 被引量：5

6

作者 陈云波 王震 +4 位作者 查长森 邹立林 季敬章 彭颖 吕建新 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期701-704,I0001,共5页

目的了解临床分离的54株大肠埃希菌对氨基糖类苷类抗生素的耐药谱及产ESBLs情况,分析氨基糖苷类修饰酶AAC(3)-II的检出率及该酶的一些特征。方法采用MIC法测定临床分离的54株大肠埃希菌对7种氨基糖苷类抗生素的耐药谱,用NCCLS推荐的酶... 目的了解临床分离的54株大肠埃希菌对氨基糖类苷类抗生素的耐药谱及产ESBLs情况,分析氨基糖苷类修饰酶AAC(3)-II的检出率及该酶的一些特征。方法采用MIC法测定临床分离的54株大肠埃希菌对7种氨基糖苷类抗生素的耐药谱,用NCCLS推荐的酶抑制剂增强纸片扩散法检测产ESBLs菌株,并通过聚合酶链反应、克隆测序和测定重组菌耐药谱对aac(3)-II基因进行研究。结果54株大肠埃希菌对阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素、妥布霉素、链霉素、大观霉素和奈替米星的耐药率分别为14.8%、77.8%、59.3%、66.7%、68.5%、61.1%、22.2%;共检测出产ESBLs菌株34株,占63.0%;aac(3)-II基因在54株大肠埃希菌中检出率为88.5%;质粒转化菌产ESBLs且同时检出aac(3)-II基因。重组菌BL21(DE3)/pET26::aac(3)-II对庆大霉素和卡那霉素有耐药性,对其余5种氨基糖苷类抗生素没有表现出耐药性。结论大肠埃希菌对庆大霉素的耐药率最高,对阿米卡星的耐药率最低;耐氨基糖苷类抗生素的大肠埃希菌与其产ESBLs有相关性;重组菌BL21(DE3)/pET26::aac(3)-II仅对庆大霉素和卡那霉素产生耐药。 展开更多

关键词 大肠埃希菌 氨基糖苷类抗生素 修饰酶 超广谱Β内酰胺酶 耐药性

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幽门螺杆菌临床分离株的REPPCR分析 被引量：2

7

作者 彭颖 吕建新 +1 位作者 叶嗣颖 黄庆华 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期684-686,共3页

应用REP PCR对来自20例单纯性胃炎和20例消化性溃疡病人的幽门螺杆菌菌株进行基因分型,并运用SAS软件进行聚类分析。结果显示这些菌株按照基因型被分为两大类,但两种来源的菌株在两大类中的比例无明显差异(P>0.1),提示幽门螺杆菌临... 应用REP PCR对来自20例单纯性胃炎和20例消化性溃疡病人的幽门螺杆菌菌株进行基因分型,并运用SAS软件进行聚类分析。结果显示这些菌株按照基因型被分为两大类,但两种来源的菌株在两大类中的比例无明显差异(P>0.1),提示幽门螺杆菌临床分离株REP PCR基因型与致病性之间不存在明显相关性。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 临床分离株 REP-PCR分析 基因分型

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霍乱弧菌O139 mshA基因的克隆、表达及免疫反应性鉴定 被引量：1

8

作者 尹铁球 楼永良 +2 位作者 杜季梅 彭颖 曾爱兵 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期403-406,共4页

目的克隆霍乱弧菌O139临床菌株的甘露糖敏感血凝素(Mannose-Sensitive Hemagglutinin,MSHA)基因,构建原核表达系统,鉴定重组表达产物的免疫反应性。方法高保真PCR扩增mshA基因,T-A克隆后测定核苷酸序列并构建原核表达系统pET-28a(+)-msh... 目的克隆霍乱弧菌O139临床菌株的甘露糖敏感血凝素(Mannose-Sensitive Hemagglutinin,MSHA)基因,构建原核表达系统,鉴定重组表达产物的免疫反应性。方法高保真PCR扩增mshA基因,T-A克隆后测定核苷酸序列并构建原核表达系统pET-28a(+)-mshA-E.coliBL21(DE3),IPTG诱导目的重组蛋白(rMSHA)表达、Ni-NTA亲和层析法收集蛋白;Western blot鉴定其免疫反应性。结果所克隆的mshA基因与GenBank报道的(AE004128)序列完全一致。构建的mshA基因原核表达系统pET-28a(+)-mshA-E.coliBL21(DE3)表达量占细菌总蛋白的20%以上。表达的蛋白(约20kD)可与His单克隆抗体发生特异性免疫结合。结论成功构建了霍乱弧菌O139mshA基因的高效原核表达系统,表达的rMSHA蛋白有良好的免疫反应性,为进一步研制MSHA及其抗体检测试剂盒奠定了基础。 展开更多

关键词 霍乱弧菌O139 mshA基因 克隆 表达 免疫反应性

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幽门螺杆菌随机扩增多态性DNA指纹图谱分析 被引量：2

9

作者 许迪 叶嗣颖 +3 位作者 孔利佳 彭颖 黄庆华 廖方 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2004年第6期8-10,共3页

应用随机扩增多态性DNA指纹法(RandomamplifiedpolymorphicDNA,RAPD)对来自29例消化性溃疡和19例单纯性胃炎病人的幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)菌株基因组DNA进行PCR反应,建立Hp的DNA指纹图谱,运用统计分析软件(Statisticanalysis... 应用随机扩增多态性DNA指纹法(RandomamplifiedpolymorphicDNA,RAPD)对来自29例消化性溃疡和19例单纯性胃炎病人的幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)菌株基因组DNA进行PCR反应,建立Hp的DNA指纹图谱,运用统计分析软件(Statisticanalysissoftware,SAS)对HpDNA指纹图的相似性以及与疾病的相关性进行分析。结果显示,这些菌株按HpDNA指纹图可分为两大类,两种来源的菌株在两大类中的比例有明显差异(P<0.05)。提示可能存在与疾病相关的特异基因型。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 RAPD 聚类分析

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RT-qPCR检测人IL-6 mRNA的方法建立与运用

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作者 邹立林 吕建新 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期470-472,共3页

目的:建立实时定量检测人IL-6mRNA的方法并加以应用。方法:抽取人外周静脉血,EDTA抗凝,用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞,用Trizol裂解液提取总RNA,将总RNA逆转录为cDNA,然后用IL-6引物进行实时荧光定量PCR扩增,扩增体系中加入SYBR... 目的:建立实时定量检测人IL-6mRNA的方法并加以应用。方法:抽取人外周静脉血,EDTA抗凝,用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞,用Trizol裂解液提取总RNA,将总RNA逆转录为cDNA,然后用IL-6引物进行实时荧光定量PCR扩增,扩增体系中加入SYBRGreenⅠ。结果:该法检测IL-6mRNA线性范围广,灵敏度高,特异性好,重复性好,方法简单。结论:该法可较为精确地定量IL-6mRNA。 展开更多

关键词 白细胞介素-6 核糖核酸 信使 逆转录-聚合酶链反应 实时 定量

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钙结合蛋白S100A7在肺癌中的选择性表达 被引量：5

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作者 张颢 刘丹慧 +8 位作者 孙锁柱 刘吉福 武珊珊 毛颖 李明颖 冯盛 肖焱光 何大澄 肖雪媛 《中国肺癌杂志》 CAS 2009年第1期54-58,共5页

背景与目的S100A7是S100蛋白家族成员,它的过表达与一些癌的发生和转移密切相关,本文旨在探讨S100A7在肺癌中的差异表达。方法采用RT-PCR、Western blot和免疫组化等技术探讨了S100A7蛋白在肺癌及其癌旁组织中的表达差异。结果S100A7只... 背景与目的S100A7是S100蛋白家族成员,它的过表达与一些癌的发生和转移密切相关,本文旨在探讨S100A7在肺癌中的差异表达。方法采用RT-PCR、Western blot和免疫组化等技术探讨了S100A7蛋白在肺癌及其癌旁组织中的表达差异。结果S100A7只在肺鳞癌和大细胞肺癌组织中有表达,而在肺腺癌、小细胞肺癌及其他亚型的肺癌组织、癌旁组织和正常肺组织中不表达;并发现S100A7蛋白的表达在高分化的癌细胞中较强。结论S100A7蛋白可选择性地在不同亚型的肺癌中表达,很可能成为肺癌亚型诊断的标志蛋白之一。 展开更多

关键词 肺肿瘤 人S100A7蛋白 肿瘤生物标记物 病理学

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