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创伤弧菌溶细胞素基因在大肠杆菌中的表达及溶血活性鉴定
被引量：
10
1
作者
李桂军
楼永良
严杰
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第9期852-854,860,共4页
目的用大肠杆菌表达系统表达创伤弧菌溶细胞素,并对其溶血活性进行评价。为今后的免疫学活性研究和单克隆检测试剂盒的研发奠定基础。方法构建pET28a(+)-vvhA表达载体,对包涵体进行三步洗涤后,用金属亲合层析(HisTag)纯化重组蛋白,并用...
目的用大肠杆菌表达系统表达创伤弧菌溶细胞素,并对其溶血活性进行评价。为今后的免疫学活性研究和单克隆检测试剂盒的研发奠定基础。方法构建pET28a(+)-vvhA表达载体,对包涵体进行三步洗涤后,用金属亲合层析(HisTag)纯化重组蛋白,并用溶血试验验证重组蛋白活性。结果用基因工程的方法成功获得高表达、高纯度(纯度≥96%)重组蛋白VVC。利用兔红细胞溶血试验检测表明,重组蛋白具有溶血活性,其活性为0.2μg/HU。结论成功用大肠杆菌表达系统表达创伤弧菌溶细胞素并对其纯化、复性条件进行优化。
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关键词
创伤弧菌溶细胞素
E.coli表达
溶血活性
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职称材料
创伤弧菌溶细胞素抗原表位预测及其噬菌体展示肽的构建
2
作者
肖美英
楼永良
严杰
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第5期408-411,417,共5页
目的预测创伤弧菌溶细胞素(vibrio vulnificus cytolysin)的抗原表位,为研制多抗原肽疫苗(MAP)奠定基础。方法采用生物信息学技术对Vvc的T细胞和B细胞表位进行预测及分析。选取Vvc主要T细胞和B细胞联合表位肽构建噬菌体展示系统。PEG/N...
目的预测创伤弧菌溶细胞素(vibrio vulnificus cytolysin)的抗原表位,为研制多抗原肽疫苗(MAP)奠定基础。方法采用生物信息学技术对Vvc的T细胞和B细胞表位进行预测及分析。选取Vvc主要T细胞和B细胞联合表位肽构建噬菌体展示系统。PEG/NaCl沉淀法提纯重组噬菌体,SDS-PAGE鉴定目的重组PIII蛋白(rPIII)。Ni-NTA亲和层析法纯化的重组蛋白rVvc常规皮下免疫法制备兔抗血清。rVvc抗血清为一抗,采用Western blot对上述表位肽进行鉴定和筛选。结果预测的4个主要表位肽Vvha1、Vvah2、Vvha3和Vvha4在M13噬菌体中获得成功表达。采用rVvc抗血清为一抗,Western blot对上述表位肽进行鉴定和筛选:Vvha2、Vvha4反应强度高于Vvha1和Vvha3。结论本实验成功地构建Vvc主要T细胞和B细胞联合表位肽噬菌体展示系统。
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关键词
创伤弧菌
溶细胞素
噬菌体展示
B细胞表位
T细胞表位
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职称材料
题名
创伤弧菌溶细胞素基因在大肠杆菌中的表达及溶血活性鉴定
被引量：
10
1
作者
李桂军
楼永良
严杰
机构
温州医学院检验学院温州医学院微生态学研究所
浙江大学
医学院
病原生物学教研室
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第9期852-854,860,共4页
基金
浙江省自然科学基金项目(X205004)
文摘
目的用大肠杆菌表达系统表达创伤弧菌溶细胞素,并对其溶血活性进行评价。为今后的免疫学活性研究和单克隆检测试剂盒的研发奠定基础。方法构建pET28a(+)-vvhA表达载体,对包涵体进行三步洗涤后,用金属亲合层析(HisTag)纯化重组蛋白,并用溶血试验验证重组蛋白活性。结果用基因工程的方法成功获得高表达、高纯度(纯度≥96%)重组蛋白VVC。利用兔红细胞溶血试验检测表明,重组蛋白具有溶血活性,其活性为0.2μg/HU。结论成功用大肠杆菌表达系统表达创伤弧菌溶细胞素并对其纯化、复性条件进行优化。
关键词
创伤弧菌溶细胞素
E.coli表达
溶血活性
Keywords
Vibrio vulnificus cytolysin
E. coli expression
haemolysis activity
分类号
R378.2 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
创伤弧菌溶细胞素抗原表位预测及其噬菌体展示肽的构建
2
作者
肖美英
楼永良
严杰
机构
温州医学院检验学院温州医学院微生态学研究所
浙江大学
医学院
病原生物学教研室
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第5期408-411,417,共5页
基金
浙江省自然科学基金资助项目(X205004)
文摘
目的预测创伤弧菌溶细胞素(vibrio vulnificus cytolysin)的抗原表位,为研制多抗原肽疫苗(MAP)奠定基础。方法采用生物信息学技术对Vvc的T细胞和B细胞表位进行预测及分析。选取Vvc主要T细胞和B细胞联合表位肽构建噬菌体展示系统。PEG/NaCl沉淀法提纯重组噬菌体,SDS-PAGE鉴定目的重组PIII蛋白(rPIII)。Ni-NTA亲和层析法纯化的重组蛋白rVvc常规皮下免疫法制备兔抗血清。rVvc抗血清为一抗,采用Western blot对上述表位肽进行鉴定和筛选。结果预测的4个主要表位肽Vvha1、Vvah2、Vvha3和Vvha4在M13噬菌体中获得成功表达。采用rVvc抗血清为一抗,Western blot对上述表位肽进行鉴定和筛选:Vvha2、Vvha4反应强度高于Vvha1和Vvha3。结论本实验成功地构建Vvc主要T细胞和B细胞联合表位肽噬菌体展示系统。
关键词
创伤弧菌
溶细胞素
噬菌体展示
B细胞表位
T细胞表位
Keywords
Vibrio vulnificus cytolysin , antigenic epitopes prediction, phage display
T cell epitope
B cells epitope
分类号
R378.2 [医药卫生—病原生物学]
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1
创伤弧菌溶细胞素基因在大肠杆菌中的表达及溶血活性鉴定
李桂军
楼永良
严杰
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
10
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下载PDF
职称材料
2
创伤弧菌溶细胞素抗原表位预测及其噬菌体展示肽的构建
肖美英
楼永良
严杰
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008
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