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Pax-8基因真核表达载体的构建及其功能的初步研究
被引量：
6
1
作者
周希
黄晓燕
+3 位作者
陈长曦
陈必成
龚永生
杨德业
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第3期430-436,共7页
目的:构建大鼠Pax-8基因全长序列的真核表达载体pcDNA3.1(+),并将重组质粒转染至心肌细胞系H9c2中进行表达,测定转染后Pax-8基因对心肌细胞增殖及凋亡的影响。方法:酶切pCMV sport6-Pax-8获得大鼠Pax-8全长基因,通过基因重组技术将其插...
目的:构建大鼠Pax-8基因全长序列的真核表达载体pcDNA3.1(+),并将重组质粒转染至心肌细胞系H9c2中进行表达,测定转染后Pax-8基因对心肌细胞增殖及凋亡的影响。方法:酶切pCMV sport6-Pax-8获得大鼠Pax-8全长基因,通过基因重组技术将其插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组质粒pcDNA3.1(+)-Pax-8。限制性酶切鉴定和DNA测序鉴定插入片段。将重组质粒经脂质体法转染至大鼠心肌细胞系H9c2细胞中,RT-PCR法及Western blotting法分别检测转染后Pax-8 mRNA及蛋白表达水平。CCK-8法检测细胞增殖;以血清饥饿诱导心肌细胞凋亡,同时进行Pax-8质粒转染,流式细胞仪检测细胞凋亡指数,West-ern blotting法检测活化caspase-3的表达。结果:成功构建了大鼠pcDNA3.1(+)-Pax-8真核表达载体,且证实转染后心肌细胞的Pax-8 mRNA及蛋白表达均明显高于空白对照组(P<0.05)及空质粒组(P<0.05)。转染Pax-8基因能提高心肌细胞的增殖能力(P<0.05),明显抑制血清饥饿引起的细胞凋亡(P<0.01),同时下调活化caspase-3的表达(P<0.01)。结论:通过基因重组技术成功使得Pax-8基因在心肌细胞中过表达。Pax-8基因可能通过促进心肌细胞增殖及抑制心肌细胞凋亡从而参与胚胎心脏发育的过程。
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关键词
基因
Pax-8
真核表达
细胞凋亡
细胞增殖
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职称材料
芹菜素对间歇低氧后幼鼠脑区p38MAPK的影响
2
作者
周永海
蔡晓红
+4 位作者
张存雪
李源
李宁
龚永生
胡良冈
《中华中医药学刊》
CAS
2009年第2期356-358,共3页
目的：研究芹菜素对间歇低氧后幼鼠部分脑区p38MAPK的影响。方法：SPF级健康雄性SD幼鼠（3-4周龄）40只,随机分为4组：间歇低氧组（IH组）、对照组（C组）、芹菜素＋二甲基亚砜组（Q组）和二甲基亚砜组（R组）。建立间歇低氧幼鼠模型,以...
目的：研究芹菜素对间歇低氧后幼鼠部分脑区p38MAPK的影响。方法：SPF级健康雄性SD幼鼠（3-4周龄）40只,随机分为4组：间歇低氧组（IH组）、对照组（C组）、芹菜素＋二甲基亚砜组（Q组）和二甲基亚砜组（R组）。建立间歇低氧幼鼠模型,以RT-PCR法和W esternb lot法分别测幼鼠海马及前额叶皮层p38MAPKmRNA和磷酸化p38MAPK（p-p38）蛋白的表达。结果：IH组幼鼠海马、前额叶皮层的p38MAPK mRNA及p-p38蛋白均明显高于C组（P均〈0.01）,Q组的表达则明显低于R组（P均〈0.01）。结论：芹菜素可降低间歇低氧幼鼠脑区p38MAPK的激活,这可能对减轻间歇低氧后脑损伤具有积极意义。
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关键词
间歇低氧
P38丝裂原活化蛋白激酶
海马
前额叶皮层
芹菜素
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职称材料
题名
Pax-8基因真核表达载体的构建及其功能的初步研究
被引量：
6
1
作者
周希
黄晓燕
陈长曦
陈必成
龚永生
杨德业
机构
温州
医学院
附属第一医院心内科
温州
医学院
附属第一医院外科
实验
中心
温州医学院基础学院机能实验中心
出处
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第3期430-436,共7页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.30571050)
浙江省温州市科技发展计划资助项目(No.Y2006A017)
文摘
目的:构建大鼠Pax-8基因全长序列的真核表达载体pcDNA3.1(+),并将重组质粒转染至心肌细胞系H9c2中进行表达,测定转染后Pax-8基因对心肌细胞增殖及凋亡的影响。方法:酶切pCMV sport6-Pax-8获得大鼠Pax-8全长基因,通过基因重组技术将其插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组质粒pcDNA3.1(+)-Pax-8。限制性酶切鉴定和DNA测序鉴定插入片段。将重组质粒经脂质体法转染至大鼠心肌细胞系H9c2细胞中,RT-PCR法及Western blotting法分别检测转染后Pax-8 mRNA及蛋白表达水平。CCK-8法检测细胞增殖;以血清饥饿诱导心肌细胞凋亡,同时进行Pax-8质粒转染,流式细胞仪检测细胞凋亡指数,West-ern blotting法检测活化caspase-3的表达。结果:成功构建了大鼠pcDNA3.1(+)-Pax-8真核表达载体,且证实转染后心肌细胞的Pax-8 mRNA及蛋白表达均明显高于空白对照组(P<0.05)及空质粒组(P<0.05)。转染Pax-8基因能提高心肌细胞的增殖能力(P<0.05),明显抑制血清饥饿引起的细胞凋亡(P<0.01),同时下调活化caspase-3的表达(P<0.01)。结论:通过基因重组技术成功使得Pax-8基因在心肌细胞中过表达。Pax-8基因可能通过促进心肌细胞增殖及抑制心肌细胞凋亡从而参与胚胎心脏发育的过程。
关键词
基因
Pax-8
真核表达
细胞凋亡
细胞增殖
Keywords
Genes
Pax-8
Eukaryotic expression
Apoptosis
Cell proliferation
分类号
R363 [医药卫生—病理学]
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职称材料
题名
芹菜素对间歇低氧后幼鼠脑区p38MAPK的影响
2
作者
周永海
蔡晓红
张存雪
李源
李宁
龚永生
胡良冈
机构
温州
医学院
附属育英儿童医院
温州医学院基础学院机能实验中心
出处
《中华中医药学刊》
CAS
2009年第2期356-358,共3页
基金
浙江省医药卫生科学研究基金资助项目(2006B104)
浙江省科技厅新苗人才计划资助项目(2007G60G2090029)
温州市科技局资助项目(Y20080193)
文摘
目的：研究芹菜素对间歇低氧后幼鼠部分脑区p38MAPK的影响。方法：SPF级健康雄性SD幼鼠（3-4周龄）40只,随机分为4组：间歇低氧组（IH组）、对照组（C组）、芹菜素＋二甲基亚砜组（Q组）和二甲基亚砜组（R组）。建立间歇低氧幼鼠模型,以RT-PCR法和W esternb lot法分别测幼鼠海马及前额叶皮层p38MAPKmRNA和磷酸化p38MAPK（p-p38）蛋白的表达。结果：IH组幼鼠海马、前额叶皮层的p38MAPK mRNA及p-p38蛋白均明显高于C组（P均〈0.01）,Q组的表达则明显低于R组（P均〈0.01）。结论：芹菜素可降低间歇低氧幼鼠脑区p38MAPK的激活,这可能对减轻间歇低氧后脑损伤具有积极意义。
关键词
间歇低氧
P38丝裂原活化蛋白激酶
海马
前额叶皮层
芹菜素
Keywords
Intermittent hypoxia
p38-mitogen-activatedprotein kinases
hippocampus
prefrontal cortex
apigenin
分类号
R285.5 [医药卫生—中药学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Pax-8基因真核表达载体的构建及其功能的初步研究
周希
黄晓燕
陈长曦
陈必成
龚永生
杨德业
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011
6
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职称材料
2
芹菜素对间歇低氧后幼鼠脑区p38MAPK的影响
周永海
蔡晓红
张存雪
李源
李宁
龚永生
胡良冈
《中华中医药学刊》
CAS
2009
0
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