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题名生物大分子高分辨率冷冻电镜三维重构技术
被引量：7
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作者
程凌鹏
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机构
清华大学生命科学学院蛋白质研究技术中心
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出处
《实验技术与管理》
CAS
北大核心
2018年第6期17-22,26,共7页
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基金
国家自然科学基金面上项目(31570727)
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文摘
冷冻电子显微三维重构技术(简称冷冻电镜)能够解析生物大分子复合体的高分辨率三维结构。冷冻电镜不需要样品结晶,适用的生物样品较为宽泛,且保持了生物样品的近生理状态。近年来随着电镜硬件和计算机图像处理软件技术的发展,冷冻电镜结构解析分辨率已经达到原子水平,逐渐成为生物结构解析的主流方法之一。该文介绍了冷冻电镜三维重构技术的起源、发展及未来趋势。
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关键词
生物大分子
三维重构技术
高分辨率冷冻电镜
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Keywords
biological macromolecules
3D reconstruction technology
high resolution cryo electron microscope
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分类号
Q81
[生物学—生物工程]
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题名一种人B淋巴细胞表面抗原的重组表达和纯化
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作者
常卿
俞敏达
李文奇
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机构
清华大学生命科学学院蛋白质研究技术中心
清华大学结构生物学高精尖创新中心
北京市第四中学国际校区
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出处
《生物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第6期20-24,共5页
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基金
国家自然科学基金面上项目(81971469)。
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文摘
人源CD20作为B淋巴细胞表面特异性表达的膜蛋白,可以作为B淋巴细胞瘤免疫治疗的有效靶点。通过分子克隆引物设计,将CD20的胞外区以重复串联的方式克隆到pET28a载体上,两者之间通过Linker连接区(-GSSGGSSG-)连接,构建表达载体pET28a-Bi20。测序正确后转化至大肠杆菌Transetta(DE3)中重组表达,优化表达条件为当菌液OD_(600)为0.6~0.8时,以IPTG终浓度1 mmol/L,37℃诱导5 h。表达产物带有C端6个组氨酸的亲和标签,以包涵体形式表达。通过包涵体洗涤条件优化,变性条件下的镍亲和层析纯化,透析复性条件的摸索和优化,最终获得纯度大于95%的可溶CD20胞外区同源二聚体Bi20,建立在大肠杆菌表达系统中规模化量产CD20胞外区多肽的方法。经Western Blot和ELISA检测证实纯化复性后CD20胞外区多肽Bi20具有良好的免疫原性。
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关键词
人源B淋巴细胞表面抗原
细胞治疗
重组表达
连接区
包涵体变复性
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Keywords
human B lymphocyte surface antigen
cell therapy
recombinant expression
linker
inclusion body refolding
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分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
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